細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法(凝膠法)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法

凝膠法方法分類 濁度法光度法顯色基質(zhì)法重現(xiàn)性好方法特性能定量能控制藥物的增強(qiáng)/抑制干擾操作簡(jiǎn)便。節(jié)省時(shí)間2原理：利用鱟血液中的變性細(xì)胞，經(jīng)裂解液和機(jī)械方式促使細(xì)胞破裂而提取到的一種細(xì)胞溶解物，能與極微量的細(xì)菌內(nèi)毒素形成特異凝膠反應(yīng)，反應(yīng)的速度和凝膠的堅(jiān)固程度與內(nèi)毒素濃度有關(guān).34細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)之凝膠法實(shí)驗(yàn)程序1、試驗(yàn)準(zhǔn)備：試劑、儀器及用具2、內(nèi)毒素限值的確定3、確定最大有效稀釋倍數(shù)4、凝膠限度試驗(yàn)5、結(jié)果判定5要求1、以最終產(chǎn)品為檢測(cè)必要（濃度超過(guò)0.5mg/ml）2、檢測(cè)樣品PH應(yīng)在6~8之間，不符應(yīng)調(diào)整61、試驗(yàn)準(zhǔn)備：試劑、儀器及用具

儀器與器具電熱恒溫水浴鍋、定時(shí)鐘、去熱源槍頭和小玻璃瓶、移液槍、試管架、剪刀、錫箔紙。試劑細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、鱟試劑。72、內(nèi)毒素限值的確定L=K/M式中L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K為人每千克體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量，以EU/（kg·h）表示；M為人用每千克體重每小時(shí)的最大供試品劑量，以ml/（kg·h）、mg/（kg·h）或U/（kg·h）表示。一般由供試品提供者直接提供內(nèi)毒素限值如1000EU。8大家應(yīng)該也有點(diǎn)累了，稍作休息大家有疑問(wèn)的，可以詢問(wèn)和交流93、確定最大有效稀釋倍數(shù)

（MVD）：MVD=cL/λ

式中L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值；c為供試品溶液的濃度；λ為在凝膠法中鱟試劑的標(biāo)示靈敏度(EU/ml)。103、鱟試劑靈敏度復(fù)核

按下表制備溶液A、B、C，使用稀釋倍數(shù)為MVD的供試品溶液來(lái)制備溶液A，按鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)項(xiàng)下操作。

116、結(jié)果判定

將制備好的試劑用錫箔紙包裹好后放入電熱恒溫水浴鍋中，37℃恒溫水浴60min后觀察結(jié)果（保證玻璃瓶中溶液處于水面以下，并防止水進(jìn)入瓶中）。若陰性對(duì)照溶液B為陰性，陽(yáng)性對(duì)照溶液C為陽(yáng)性，試驗(yàn)有效。若溶液A的兩個(gè)平行管均為陰性，判定供試品符合規(guī)定；若溶液A的兩個(gè)平行管均為陽(yáng)性，判定供試品不符合規(guī)定。若溶液A的兩個(gè)平行管中的一管為陽(yáng)性，另一管為陰性，需進(jìn)行復(fù)試，復(fù)試時(shí)，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均為陰性，判定供試品符合規(guī)定；否則判定供試品不符合規(guī)定

12操作注意事項(xiàng)試驗(yàn)前準(zhǔn)備：1、玻璃器具應(yīng)規(guī)范化，便于除熱原、計(jì)量準(zhǔn)確、清洗操作方便。2、用于內(nèi)毒素檢測(cè)的稀釋試管最好用玻璃試管；塑料用具只能為一次性且保證無(wú)內(nèi)毒素。實(shí)