制革酶化學(xué)

糞便軟化法Oropon發(fā)汗法脫毛早期曾使用的“發(fā)汗法”脫毛是利用在溫暖潮濕的環(huán)境中，皮上的微生物生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中分泌的蛋白酶的作用而產(chǎn)生脫毛效果用狗或雞糞來(lái)處理裸皮，使其軟化，該方法很難控制，裸皮易受到損害甚至腐爛。后來(lái)研究發(fā)現(xiàn)糞便的軟化作用是由于細(xì)菌蛋白酶的作用1908年O.勒姆申請(qǐng)了第一個(gè)軟化酶制劑Oropon的專利。商品酶制劑Oropon的成功開(kāi)發(fā)和應(yīng)用可以認(rèn)為是酶制劑在制革中使用的一個(gè)里程碑目前，以酶為基礎(chǔ)的制革生物技術(shù)在清潔性、環(huán)境友好性方面獨(dú)具特色,這些技術(shù)在制革工業(yè)的廣泛應(yīng)用,是解決制革工業(yè)嚴(yán)重污染,促進(jìn)制革工業(yè)持續(xù)發(fā)展的重要途徑。

浸水酶酶法脫毛脫脂酶軟化酶酶是活細(xì)胞產(chǎn)生的一類具有催化功能的蛋白質(zhì)（核酸），亦稱為生物催化劑Biocatalysts。絕大多數(shù)的酶都是蛋白質(zhì)酶促反應(yīng)Enzymaticreaction底物產(chǎn)物核酶是1982年，Cech等研究原生動(dòng)物四膜蟲rRNA時(shí)，首次發(fā)現(xiàn)RRNA基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的I型內(nèi)含子剪切和外顯子拼接過(guò)程可在無(wú)任何蛋白質(zhì)存在的情況下發(fā)生，證明了RNA具有催化功能。為區(qū)別于傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)催化劑，Cech給這種具有催化活性的RNA定名為核酶。

核酶（ribozyme）主要指一類具有催化功能的RNA，亦稱RNA催化劑酶的催化反應(yīng)特征酶的結(jié)構(gòu)與功能酶的高效作用機(jī)理酶的分類酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)酶活力測(cè)定制革常用酶制劑酶的分類以蛋白質(zhì)肽鏈組成分：?jiǎn)误w酶寡聚酶多酶復(fù)合體多酶體系多功能酶多功能酶（multifunctionalenzyme）：一些多酶體系在進(jìn)化過(guò)程中由于基因的融合，形成由一條多肽鏈組成卻具有多種不同催化功能的酶酶的分類多種酶靠非共價(jià)鍵相互嵌合催化連續(xù)反應(yīng)的體系，稱為多酶復(fù)合體（multienzymecomplex）。連續(xù)反應(yīng)體系中前一反應(yīng)的產(chǎn)物為后一反應(yīng)的底物，反應(yīng)依次連接，構(gòu)成一個(gè)代謝途徑或代謝途徑的一部分。由于這一序列反應(yīng)是在一高度有序的多酶復(fù)合體內(nèi)進(jìn)行，從而提高了酶的催化效率，同時(shí)利于對(duì)酶的調(diào)控。代謝反應(yīng)S→B→C→D→PESBEBCECDEDPESB+EBCECD+EDP++可溶多酶復(fù)合體游離單體酶膜結(jié)合多酶復(fù)合體酶的分類以酶分子的化學(xué)組成分：酶的分類以酶反應(yīng)的催化類型分：酶的分類1.氧化還原酶類(oxidoreductases)指催化底物進(jìn)行氧化還原反應(yīng)的酶類。例如，乳酸脫氫酶、琥珀酸脫氫酶、細(xì)胞色素氧化酶、過(guò)氧化氫酶等。2.轉(zhuǎn)移酶類(transferases)指催化底物之間進(jìn)行某些基團(tuán)的轉(zhuǎn)移或交換的酶類。如轉(zhuǎn)甲基酶、轉(zhuǎn)氨酸、己糖激酶、磷酸化酶等。3.水解酶類(hydrolases)指催化底物發(fā)生水解反應(yīng)的酶類。例如、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶等。以酶反應(yīng)的催化類型分：酶的分類4.裂解酶類(lyases)指催化一個(gè)底物分解為兩個(gè)化合物或兩個(gè)化合物合成為一個(gè)化合物的酶類。例如檸檬酸合成酶、醛縮酶等。5.異構(gòu)酶類(isomerases)指催化各種同分異構(gòu)體之間相互轉(zhuǎn)化的酶類。例如，磷酸丙糖異構(gòu)酶、消旋酶等。6.合成酶類(連接酶類，ligases)指催化兩分子底物合成為一分子化合物，同時(shí)還必須偶聯(lián)有ATP的磷酸鍵斷裂的酶類。例如，谷氨酰胺合成酶、氨基酸：tRNA連接酶等。以酶反應(yīng)的催化類型分：酶的催化反應(yīng)特征①能催化熱力學(xué)上允許進(jìn)行的化學(xué)反應(yīng)，而不能實(shí)現(xiàn)那些熱力學(xué)上不能進(jìn)行的反應(yīng)；②能縮短反應(yīng)達(dá)到平衡所需的時(shí)間，而不能改變平衡點(diǎn)；③一般情況下，對(duì)可逆反應(yīng)的正反兩個(gè)方向的催化作用相同。

酶與一般催化劑的共同點(diǎn)：酶的催化反應(yīng)特征酶與一般催化劑的不同點(diǎn)：高效性1反應(yīng)條件溫和2高度專一3常需要輔助因子4在生物體內(nèi)受到嚴(yán)格調(diào)控5酶的催化反應(yīng)特征高效性1酶能大幅度較低反應(yīng)的活化能以摩爾為單位進(jìn)行比較，酶的催化效率比化學(xué)催化劑高107～1013倍，比非催化反應(yīng)高108～1020倍。酶的催化反應(yīng)特征反應(yīng)條件溫和2凡能使蛋白質(zhì)變性的因素如強(qiáng)酸、強(qiáng)堿高溫等條件都能使酶破壞而完全失去活性。所以酶作用一般都要求比較溫和的條件如常溫、常壓和接近中性的酸堿度。酶促反應(yīng)一般在pH5-8水溶液中進(jìn)行，反應(yīng)溫度范圍為20-40

C。酶的催化反應(yīng)特征高度專一3酶的底物專一性即特異性（substratespecificity）指酶對(duì)它所作用的底物有嚴(yán)格的選擇性。一種酶只能作用于某一種或某一類結(jié)構(gòu)性質(zhì)相似的物質(zhì)。酶對(duì)底物和催化的反應(yīng)有嚴(yán)格的選擇性。酶的催化反應(yīng)特征高度專一3專一性結(jié)構(gòu)專一立體（異構(gòu)）專一絕對(duì)專一相對(duì)專一鍵專一基團(tuán)專一旋光異構(gòu)順?lè)串悩?gòu)有些酶對(duì)底物的要求非常嚴(yán)格，只作用于一個(gè)特定的底物。這種專一性稱為絕對(duì)專一性有些酶的作用對(duì)象不是一種底物，而是一類化合物或一類化學(xué)鍵。這種專一性稱為相對(duì)專一性基團(tuán)專一性：對(duì)鍵兩端的基團(tuán)要求的程度不同，只對(duì)其中一個(gè)基團(tuán)要求嚴(yán)格鍵專一性：有些酶只要求作用于底物一定的鍵，而對(duì)鍵兩端的基團(tuán)無(wú)嚴(yán)格的要求。一種酶只能作用于一種立體異構(gòu)體，或只能生成一種立體異構(gòu)體，稱為立體異構(gòu)特異性。酶的催化反應(yīng)特征高度專一3酶促反應(yīng)為什么會(huì)有專一性？酶的催化反應(yīng)特征高度專一3Fischer(費(fèi)雪)——德國(guó)鎖鑰假說(shuō)鎖鑰假說(shuō)認(rèn)為整個(gè)酶分子的天然構(gòu)象是具有剛性結(jié)構(gòu)的，酶表面具有特定的形狀。酶與底物的結(jié)合如同一把鑰匙對(duì)一把鎖一樣。此學(xué)說(shuō)可以較好的解釋酶的立體異構(gòu)專一性；但不能解釋：酶的多底物現(xiàn)象、酶對(duì)正反方向的催化等。酶的催化反應(yīng)特征高度專一3Koshland——美國(guó)該學(xué)說(shuō)認(rèn)為酶的活性部位并不是和底物的形狀正好互補(bǔ)的，而是在酶和底物結(jié)合的過(guò)程中，底物分子或酶分子，有時(shí)是兩者的構(gòu)象同時(shí)發(fā)生了一定的變化后才互補(bǔ)的，這時(shí)催化基團(tuán)的位置也正好在所催化底物鍵的斷裂和即將生成鍵的適當(dāng)位置。這個(gè)動(dòng)態(tài)的辨認(rèn)過(guò)程稱為誘導(dǎo)契合。誘導(dǎo)契合學(xué)說(shuō)（1964）酶的催化反應(yīng)特征高度專一3酶的催化反應(yīng)特征常需要輔助因子4酶的催化活力常跟輔酶、輔基和金屬離子等輔助因子有關(guān)

輔助因子：金屬離子或有機(jī)小分子輔酶：和酶蛋白結(jié)合疏松，可以用透析或超濾法除去輔基：和酶蛋白結(jié)合緊密，不能用透析或超濾法除去全酶：把酶蛋白（apoenzyme）與輔因子（cofactor）結(jié)合所形成的復(fù)合物為全酶。

酶的催化反應(yīng)特征在生物體內(nèi)受到嚴(yán)格調(diào)控5（1）酶濃度的調(diào)節(jié)誘導(dǎo)或抑制酶的合成調(diào)節(jié)酶的降解（2）激素調(diào)節(jié)酶的活性（3）反饋抑制調(diào)節(jié)酶的活性（4）抑制劑和激活劑的調(diào)節(jié)（5）其他調(diào)節(jié)方式。共價(jià)修飾調(diào)節(jié)、別構(gòu)調(diào)節(jié)、酶原激活、同功酶等。酶的結(jié)構(gòu)與功能酶分子中直接與底物結(jié)合，并催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的部位，稱為酶的活性中心。酶的活性中心包括兩個(gè)功能部位：一個(gè)是結(jié)合部位，另一個(gè)是催化部位。酶的結(jié)構(gòu)與功能酶分子中與底物結(jié)合的部位或區(qū)域稱為結(jié)合部位。酶分子中促使底物發(fā)生化學(xué)變化的部位稱為催化部位結(jié)合部位決定酶的專一性，催化部位決定酶所催化反應(yīng)的性質(zhì)酶的結(jié)構(gòu)與功能調(diào)控部位Regulatorysite酶分子中存在著一些可以與其他分子發(fā)生某種程度的結(jié)合的部位，從而引起酶分子空間構(gòu)象的變化，對(duì)酶起激活或抑制作用酶的高效作用機(jī)理鄰近定向效應(yīng)1張力效應(yīng)與底物變形2酸堿催化效應(yīng)3共價(jià)催化4微環(huán)境效應(yīng)5酶的高效作用機(jī)理鄰近定向效應(yīng)1酶的高效作用機(jī)理鄰近定向效應(yīng)1鄰近效應(yīng)：在酶促反應(yīng)中，由于酶和底物分子之間的親和性，底物分子有向酶的活性中心靠近的趨勢(shì)，最終結(jié)合到酶的活性中心，使底物在酶活性中心的有效濃度大大增加的效應(yīng)。定向效應(yīng)：當(dāng)專一性底物向酶活性中心靠近時(shí)，會(huì)誘導(dǎo)酶分子構(gòu)象發(fā)生改變，使酶活性中心的相關(guān)基團(tuán)和底物的反應(yīng)基團(tuán)正確定向排列，同時(shí)使反應(yīng)基團(tuán)之間的分子軌道以正確方向嚴(yán)格定位，使酶促反應(yīng)易于進(jìn)行。以上兩種效應(yīng)使酶具有高效率和專一性特點(diǎn)。酶的高效作用機(jī)理鄰近定向效應(yīng)1普通化學(xué)反應(yīng)—隨機(jī)碰撞（受濃度、碰撞角度影響）相當(dāng)于——社會(huì)上的自由戀愛(ài)酶的活性中心—相當(dāng)于“婚姻介紹所”鄰近作用提高了酶活性（“婚介”）中心的底物濃度（—非婚男女集中）定向作用縮短了底物與催化基團(tuán)間（“男女”）的距離提高反應(yīng)速度（成功率）108倍酶的高效作用機(jī)理張力效應(yīng)與底物變形2酶底物當(dāng)酶與底物靠近時(shí)，不僅酶構(gòu)象受底物作用而變化，底物分子也常常受酶作用而變化，也就是酶使底物分子中的敏感鍵發(fā)生“變形”，從而促使底物中的敏感鍵更易于破裂。因而更容易形成一個(gè)互相契合的酶—底的復(fù)合物而提高催化效率同時(shí)形變底物分子發(fā)生形變酶的高效作用機(jī)理酸堿催化效應(yīng)3廣義酸基團(tuán)（質(zhì)子供體）廣義堿基團(tuán)（質(zhì)子受體）酸堿催化是通過(guò)瞬時(shí)的向反應(yīng)物提供質(zhì)子或從反應(yīng)物接受質(zhì)子以穩(wěn)定過(guò)渡態(tài)，加速反應(yīng)的一類催化機(jī)制。酶分子中存在很多可以作為廣義酸、堿的基團(tuán)酶的高效作用機(jī)理共價(jià)催化4催化劑通過(guò)與底物形成反應(yīng)活性很高的共價(jià)過(guò)渡產(chǎn)物，使反應(yīng)活化能降低，從而提高反應(yīng)速度的過(guò)程，稱為共價(jià)催化。它包括兩種類型：親核催化和親電催化親核基團(tuán)：

His的咪唑基，Cys的硫基，Asp的羧基，Ser的羥基等；親電子基團(tuán)：H+

、Mg2+、Mn2+

、Fe3+某些輔酶，如焦磷酸硫胺素和磷酸吡哆醛等也可以參與共價(jià)催化作用。酶的高效作用機(jī)理微環(huán)境效應(yīng)5酶活性中心處于一個(gè)非極性環(huán)境中，即低介電環(huán)境中，在這個(gè)低介電環(huán)境中排斥水分子，酶的催化基團(tuán)和底物分子的敏感健之間的反應(yīng)力增大，有利于催化反應(yīng)的進(jìn)行。如果酶活中心是一個(gè)高介電環(huán)境，就會(huì)吸附大量水分子，水分子對(duì)帶電離子具有屏蔽作用，消弱帶電離子間的吸附作用，影響酶促反應(yīng)進(jìn)行。酶的高效作用機(jī)理綜上所述：酶與底物結(jié)合時(shí)，由于酶的變形（誘導(dǎo)契合）或底物變形使二者相互適合，并依靠離子鍵、氫鍵、范德華力的作用和水的影響，結(jié)合成中間產(chǎn)物，在酶分子的非極性區(qū)域內(nèi)，由于酶與底物的鄰近、定向，使二者可以通過(guò)親核\親電催化、一般酸\堿催化或金屬離子催化方式進(jìn)行多元催化，從而大大降低反應(yīng)所需的活化能，使酶促反應(yīng)迅速進(jìn)行。酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)首先看一下底物濃度不同時(shí)酶促反應(yīng)的情況？酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)

在低底物濃度時(shí)：反應(yīng)速度與底物濃度成正比，表現(xiàn)為一級(jí)反應(yīng)特征。酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)隨著底物濃度的增高反應(yīng)速度不再成正比例加速；反應(yīng)為混合級(jí)反應(yīng)。酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)

當(dāng)?shù)孜餄舛冗_(dá)到一定值反應(yīng)速度達(dá)到最大值（Vmax），此時(shí)再增加底物濃度，反應(yīng)速度不再增加，表現(xiàn)為零級(jí)反應(yīng)。酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)Henri.V——法國(guó)CAWurtz——法國(guó)酶與底物的中間絡(luò)合物學(xué)說(shuō)1880年CAWurtz首先提出酶與底物的中間絡(luò)合物1902年Henri.V對(duì)酶與底物的中間絡(luò)合物進(jìn)行了完善該學(xué)說(shuō)認(rèn)為當(dāng)酶催化某一化學(xué)反應(yīng)時(shí)，酶首先和底物結(jié)合生成中間復(fù)合物（ES），然后生成產(chǎn)物（P），并釋放出酶。酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)加拿大德國(guó)米氏方程1913年Michaelis和Menten推導(dǎo)了米氏方程（Henri-Michaelis-Mentenkineticlaw）米氏常數(shù)酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)關(guān)于米氏常數(shù)Km的幾點(diǎn)說(shuō)明：A.不同的酶具有不同Km值，它是酶的一個(gè)重要的特征物理常數(shù),只與酶的性質(zhì)有關(guān)，而與其濃度無(wú)關(guān)。B.Km值只是在固定的底物，一定的溫度和pH條件下，一定的緩沖體系中測(cè)定的，不同條件下具有不同的Km值。C.一般情況下，1/Km可以近似地表示酶對(duì)底物的親和力大小，1/Km愈大，表明親和力愈大。D.同一種酶有幾種底物就有幾個(gè)Km值，其中Km值最小的底物一般稱為該酶的最適底物或天然底物酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)米氏常數(shù)的應(yīng)用[S]=

KmVmax-VV當(dāng)?shù)孜餄舛群妥畲笏俣纫阎獣r(shí)，可計(jì)算出酶的催化反應(yīng)速度當(dāng)要求的反應(yīng)速度已知時(shí)可計(jì)算底物濃度若：V=99%Vmax，[S]=99Km若：V=90%Vmax，[S]=9Km酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)其它影響酶促反應(yīng)的因素：1）溫度2）pH3）[E]4）激活劑5）抑制劑酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)溫度的影響使酶促反應(yīng)速度達(dá)最大時(shí)的溫度稱為酶的最適溫度。溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響：一方面是溫度升高,酶促反應(yīng)速度加快(溫度系數(shù)Q10：反應(yīng)溫度提高10

C，其反應(yīng)速度與原來(lái)的反應(yīng)速度之比。Q10多為1-2)另一方面,溫度升高,酶的高級(jí)結(jié)構(gòu)將發(fā)生變化或變性，導(dǎo)致酶活性降低甚至喪失，反應(yīng)速度很快下降酶對(duì)溫度的耐受力與其存在狀態(tài)有關(guān)。酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)溫度的影響酶對(duì)溫度的耐受力與其存在狀態(tài)有關(guān)。最適溫度與不是一個(gè)固定的常數(shù)，它隨底物的種類、濃度,溶液的離子強(qiáng)度,pH,反應(yīng)時(shí)間等的影響。例:

反應(yīng)時(shí)間短，最適溫度高反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，最適溫度低酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)pH對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響酶反應(yīng)速度最大時(shí)的溶液pH，稱為酶的最適pHpH值影響酶活力的原因：影響酶分子構(gòu)象的穩(wěn)定性。嚴(yán)重時(shí)可使酶變性失活影響酶分子（包括輔因子）極性基團(tuán)的解離狀態(tài)，使其荷電性發(fā)生變化影響底物分子的解離狀態(tài)酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)pH對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響酶的最適pH不是一個(gè)固定的常數(shù)，它受到底物的種類、濃度;緩沖液的種類、濃度;酶的純度;反應(yīng)的溫度、時(shí)間等的影響例:堿性磷酸酶催化磷酸苯酯水解時(shí)影響。[s]為2.5x10-5M，最適pH為8.3[s]為2.5x10-2M，最適pH為10.0酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)酶濃度對(duì)酶反應(yīng)速度的影響當(dāng)?shù)孜餄舛却蟠蟪^(guò)酶濃度時(shí)，反應(yīng)達(dá)到最大速度。如果此時(shí)增加酶的濃度可增加反應(yīng)速度，酶促反應(yīng)的速度與酶的濃度成正比關(guān)系。酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)激活劑對(duì)酶反應(yīng)速度的影響提高酶活性的物質(zhì)，稱為激活劑酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)激活劑對(duì)酶反應(yīng)速度的影響激活劑的種類（1）無(wú)機(jī)離子：金屬離子(K+Na+Mg2+Zn2+Fe2+Ca2+)、陰離子(Cl-Br-)、氫離子（2）簡(jiǎn)單有機(jī)分子：

某些還原劑、乙二胺四乙酸（EDTA）

(3)具有蛋白質(zhì)性質(zhì)的大分子物質(zhì)主要是激活酶原無(wú)活性的酶原有活性的酶激活作用酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)激活劑對(duì)酶反應(yīng)速度的影響使酶的活性降低或喪失的現(xiàn)象，稱為酶的抑制作用。能夠引起酶的抑制作用的化合物則稱為抑制劑。酶的抑制劑一般具備兩個(gè)方面的特點(diǎn)：a.在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與被抑制的底物分子或底物的過(guò)渡狀態(tài)相似b.能夠與酶的活性中心以非共價(jià)或共價(jià)的方式形成比較穩(wěn)定的復(fù)合體或結(jié)合物酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)不可逆抑制作用

可逆抑制作用競(jìng)爭(zhēng)性抑制非競(jìng)爭(zhēng)性抑制反競(jìng)爭(zhēng)性抑制專一性不可逆抑制作用非專一性不可逆抑制作用抑制作用抑制劑對(duì)酶反應(yīng)的影響酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)抑制劑對(duì)酶反應(yīng)的影響不可逆抑制作用：抑制劑與酶的活性中心的功能基團(tuán)共價(jià)結(jié)合而抑制酶的活性,不能用透析或超濾等物理方法除去抑制劑而恢復(fù)酶活性專一性不可逆抑制作用：這類抑制劑只作用于與酶活性部位有關(guān)的氨基酸殘基或一類酶。非專一性不可逆抑制作用：這類抑制劑作用于酶分子上一類或幾類不同的基團(tuán)或作用于幾類不同的酶。酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)抑制劑對(duì)酶反應(yīng)的影響可逆性抑制：抑制劑與酶蛋白以非共價(jià)方式結(jié)合，引起酶活性暫時(shí)性喪失。抑制劑可以通過(guò)透析等物理方法被除去，并且能部分或全部恢復(fù)酶的活性。

競(jìng)爭(zhēng)性抑制非競(jìng)爭(zhēng)性抑制反競(jìng)爭(zhēng)性抑制酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)抑制劑對(duì)酶反應(yīng)的影響竟?fàn)幮砸种疲阂种苿┑幕瘜W(xué)結(jié)構(gòu)與底物相似，因而能與底物竟?fàn)幣c酶活性中心結(jié)合。當(dāng)抑制劑與活性中心結(jié)合后，底物被排斥在反應(yīng)中心之外，其結(jié)果是酶促反應(yīng)被抑制了。竟?fàn)幮砸种仆ǔ？梢酝ㄟ^(guò)增大底物濃度，即提高底物的競(jìng)爭(zhēng)能力來(lái)消除。酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)抑制劑對(duì)酶反應(yīng)的影響P×酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)抑制劑對(duì)酶反應(yīng)的影響琥珀酸延胡索酸草酸鹽草酰乙酸丙二酸戊二酸酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)抑制劑對(duì)酶反應(yīng)的影響非競(jìng)爭(zhēng)性抑制：酶可同時(shí)與底物及抑制劑結(jié)合，即底物和抑制劑沒(méi)有競(jìng)爭(zhēng)作用。酶與抑制劑結(jié)合后，還可與底物結(jié)合；酶與底物結(jié)合后，也可再結(jié)合抑制劑，但是三元的中間產(chǎn)物不能進(jìn)一步分解為產(chǎn)物，所以酶活性降低。非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑與酶活性中心以外的基團(tuán)結(jié)合。這類抑制作用不會(huì)因提高底物濃度而減弱酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)抑制劑對(duì)酶反應(yīng)的影響酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)抑制劑對(duì)酶反應(yīng)的影響反競(jìng)爭(zhēng)性抑制：酶只有與底物結(jié)合后才與抑制劑結(jié)合，形成的三元中間產(chǎn)物不能進(jìn)一步分解為產(chǎn)物，所以酶活性降低。反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用常見(jiàn)于多底物反應(yīng)中，而在單底物反應(yīng)中比較少見(jiàn)酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)抑制劑對(duì)酶反應(yīng)的影響酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)抑制劑對(duì)酶反應(yīng)的影響不可逆抑制和可逆抑制的動(dòng)力學(xué)比較酶活力測(cè)定酶活力酶活力也稱酶活性，指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。其大小可用在一定條件下，它所催化的某一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速率（reactionrate）來(lái)表示。酶反應(yīng)速率用單位時(shí)間內(nèi)、單位體積中底物的減少量或產(chǎn)物的增加量來(lái)表示。單位：濃度/單位時(shí)間酶活力測(cè)定酶的活力單位1961年，提出用“國(guó)際單位”（IU）表示酶活力，即：1個(gè)酶活力單位：是指在最適條件下，1分鐘內(nèi)能轉(zhuǎn)化1u摩爾底物的酶量，或轉(zhuǎn)化底物中1微摩爾有關(guān)基團(tuán)的酶量。(25

C,最適底物濃度和最適pH）1972年，提出新的酶活力國(guó)際單位：Kat單位：最適條件下，每秒鐘能催化1mol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量1Kat=60×106IU酶活力測(cè)定酶的比活力代表酶的純度，比活力用每mg蛋白質(zhì)所含的酶活力單位數(shù)表示，對(duì)同一酶來(lái)說(shuō)，比活力愈大，表示酶的純度愈高。用IU/mg蛋白、Kat/mg蛋白表示。比活力大小可用來(lái)比較每單位質(zhì)量蛋白質(zhì)的催化能力。比活力=活力IU/mg蛋白=總活力IU/總蛋白mg轉(zhuǎn)化數(shù)在單位時(shí)間內(nèi)每一活性中心或每分子酶所能轉(zhuǎn)換的底物分子數(shù)。用Kcat表示酶活力測(cè)定產(chǎn)物濃度[P](t)引起酶反應(yīng)速度降低的主要原因：1、底物濃度的降低；2、酶的部分失活；3、產(chǎn)物對(duì)酶的抑制；4、產(chǎn)物增加引起的逆反應(yīng)速度的增加可以用初速度來(lái)測(cè)定制劑中酶的含量。酶活力測(cè)定測(cè)定酶活力時(shí)應(yīng)注意（1）應(yīng)測(cè)反應(yīng)初速度（2）酶的反應(yīng)速度一般用單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物的增加量來(lái)表示。（3）測(cè)酶活力時(shí)應(yīng)使反應(yīng)溫度、pH、離子強(qiáng)度和底物濃度等因素保持恒定。（4）測(cè)定酶反應(yīng)速度時(shí)，應(yīng)使[S]>>[E]。產(chǎn)物濃度[P](t)酶活力測(cè)定制革生產(chǎn)中用的酶主要是一些蛋白酶，所以下面主要介紹幾種工業(yè)生產(chǎn)中蛋白酶活力的測(cè)定方法。酶活力測(cè)定由于各種酶的性質(zhì)及最適反應(yīng)條件不同，無(wú)法規(guī)定一個(gè)統(tǒng)一的酶活力測(cè)定方法目前工業(yè)上蛋白酶制劑活力測(cè)定使用最廣泛的方法有Folin法——福林法LVU法甲醛滴定法轉(zhuǎn)化倍數(shù)法酶活力測(cè)定Folin法原理：酪素在蛋白酶的催化作用下，水解生成含有酚基的氨基酸（Tyr）。在一定條件下，生成的Tyr越多，說(shuō)明該酶制劑的催化能力越強(qiáng)在堿性條件下，Tyr和Folin試劑反應(yīng)生成鉬藍(lán)和鎢藍(lán)，藍(lán)色的深淺與酚類化合物含量成正比，因此，通過(guò)比色測(cè)定，可確定出Tyr含量，從而計(jì)算出酶的活力定義：1g固體酶粉（或1ml液體酶），在一定溫度和pH條件下，1min水解酪素產(chǎn)生1ugTyr為一個(gè)酶活力單位，以u(píng)/g（u/ml）酶活力測(cè)定LVU法原理：堿性酪素溶液在標(biāo)準(zhǔn)條件下（T：37℃，pH：8.2），進(jìn)行酶解反應(yīng)，一定時(shí)間后（一般60min），加入鹽酸終止反應(yīng)，未酶解酪素以硫酸鈉沉淀。濾液用標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液滴定，濾液中的酸包括加入的鹽酸和酪素降解產(chǎn)生的酸，酪素降解越多，濾液中的酸就越多，沉淀就越少。滴定所耗NaOH的量直接反應(yīng)酶活力大小定義：在標(biāo)準(zhǔn)條件下（T：37℃，pH：8.2），酶與酪素反應(yīng)60min，水解1.725mg酪素所需的酶量為一個(gè)酶活力單位酶活力測(cè)定甲醛滴定法原理：蛋白酶與酪素在一定條件下發(fā)生水解，用甲醛固定水解產(chǎn)物的氨基，用NaOH溶液滴定羧基。根據(jù)樣品滴定與空白滴定所耗0.1mol/LNaOH溶液體積之差，計(jì)算每1mL酶液所生成的氨基氮的毫克數(shù)即為酶活力1mL0.1mol/LNaOH相當(dāng)于1.4mg氨基氮酶活力測(cè)定胰酶轉(zhuǎn)化倍數(shù)法原理：胰酶于定量的酪素反應(yīng)，水解一定時(shí)間后，用乙酸鹽（或乙酸）調(diào)節(jié)反應(yīng)溶液的pH至酪素等電點(diǎn)附近，使未水解的酪素沉淀析出，而水解的酪素則不會(huì)析出，酪蛋白被水解的量越大，表明胰酶的活力越高定義：1g胰酶完全轉(zhuǎn)化酪素的克數(shù)為工業(yè)胰酶的轉(zhuǎn)化活力制革常用酶制劑制革中常用的酶制劑，主要是蛋白水解酶，其次是脂肪酶目前，在準(zhǔn)備工段的各個(gè)工序幾乎都與酶的應(yīng)用，如浸水、脫脂、脫毛、軟化，也可用于鞣后藍(lán)濕革的軟化與脫脂工業(yè)用的蛋白酶一般純度不高制革常用酶制劑酶法鞣制是最近提出的一個(gè)新概念，盡管目前酶鞣制有點(diǎn)象天方夜譚不可預(yù)期，但這正好預(yù)示著酶一這種生物制劑在皮革工業(yè)中的應(yīng)用方興未艾。制革常用酶制劑中性蛋白酶枯草桿菌AS1.398中性蛋白酶主要用于脫毛，也可在軟化工序作為輔助酶軟劑和部位差處理劑用pH=7時(shí)最穩(wěn)定，pH>10或pH<5.5失活；pH=7時(shí)最適反應(yīng)溫度為45-50℃，60℃以上失活Cu2+，Hg2+，Al3+，Pb2+，EDTA抑制，Ca2+無(wú)影響放線菌166中性蛋白酶主要用于脫