2026年生物實驗技術操作判斷題庫一、分子生物學實驗技術（共10題，每題2分）1.PCR擴增反應體系中，引物二聚體過多會導致特異性擴增降低。正確/錯誤2.凝膠電泳分離DNA時，DNA片段越小，遷移速度越快。正確/錯誤3.限制性內切酶識別和切割DNA序列具有特異性，不同酶的識別位點可能重疊。正確/錯誤4.RT-PCR技術可用于檢測基因表達水平，但無法區(qū)分轉錄本豐度差異。正確/錯誤5.基因芯片技術可以同時檢測成千上萬個基因的表達，但成本較高。正確/錯誤6.熒光定量PCR通過熒光信號累積曲線計算起始模板量，無需標準曲線。正確/錯誤7.DNA測序中，Sanger測序法適用于大規(guī)模測序項目。正確/錯誤8.CRISPR-Cas9技術通過單鏈向導RNA（gRNA）識別靶向序列進行基因編輯。正確/錯誤9.亞克隆是將PCR產(chǎn)物插入到載體中，通常使用EcoRI和HindIII雙酶切。正確/錯誤10.蛋白質印跡（WesternBlot）檢測目標蛋白時，一抗和二抗需使用不同物種來源。正確/錯誤二、細胞培養(yǎng)與遺傳轉化實驗技術（共10題，每題2分）11.動物細胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行，常用胰蛋白酶消化貼壁細胞。正確/錯誤12.植物組織培養(yǎng)中，愈傷組織分化需要光照和暗培養(yǎng)交替進行。正確/錯誤13.基因槍轉化法適用于植物，但效率低于農(nóng)桿菌介導轉化。正確/錯誤14.顯微注射技術可將外源DNA直接導入動物細胞核，操作復雜但成功率低。正確/錯誤15.干細胞培養(yǎng)需添加抑制因子（如CHIR99021）促進自我更新。正確/錯誤16.細胞凋亡過程中，線粒體膜電位降低，Caspase活性增強。正確/錯誤17.流式細胞術可檢測細胞周期，但無法區(qū)分凋亡細胞和壞死細胞。正確/錯誤18.細胞融合技術中，電融合比化學融合的效率更高。正確/錯誤19.轉染試劑（如Lipofectamine）需根據(jù)細胞類型選擇最佳濃度。正確/錯誤20.基因編輯后，脫靶效應可能發(fā)生在非靶向位點，需通過測序驗證。正確/錯誤三、生物化學實驗技術（共10題，每題2分）21.酶動力學實驗中，米氏常數(shù)（Km）表示酶與底物親和力，Km越小親和力越強。正確/錯誤22.比色法測定蛋白質濃度時，Bradford法比Lowry法更靈敏。正確/錯誤23.瓊脂糖凝膠電泳分離蛋白質時，分子量越小遷移速度越快。正確/錯誤24.高效液相色譜（HPLC）可分離復雜混合物，但無法檢測無紫外吸收物質。正確/錯誤25.氨基酸測序通過Edman降解法逐步測定多肽序列，但只能檢測C端氨基酸。正確/錯誤26.核磁共振（NMR）譜可用于蛋白質結構解析，但耗時較長。正確/錯誤27.質譜（MS）通過離子化效率區(qū)分同分異構體，但靈敏度受基質影響。正確/錯誤28.酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）中，TMB顯色法比HRP顯色法穩(wěn)定性更高。正確/錯誤29.糖化反應中，晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）的形成需加熱促進。正確/錯誤30.乳酸脫氫酶（LDH）釋放實驗可檢測細胞損傷，但無法區(qū)分凋亡和壞死。正確/錯誤四、微生物學實驗技術（共10題，每題2分）31.平板劃線法分離純培養(yǎng)時，第4區(qū)劃線應呈點狀分布。正確/錯誤32.革蘭氏染色中，染料脫色后紫色菌為革蘭氏陰性，紅色菌為陽性。正確/錯誤33.顯微鏡計數(shù)法測定菌液濃度時，需使用血球計數(shù)板和顯微鏡。正確/錯誤34.抗生素敏感性試驗中，紙片擴散法比瓊脂稀釋法更常用。正確/錯誤35.微生物基因組測序中，Illumina平臺適用于宏基因組分析。正確/錯誤36.選擇性培養(yǎng)基（如MAC）可抑制腸道菌群生長，富集目標細菌。正確/錯誤37.菌落雜交技術需用放射性或熒光標記探針檢測特定DNA片段。正確/錯誤38.發(fā)酵工程中，厭氧培養(yǎng)需使用厭氧罐并排除氧氣。正確/錯誤39.噬菌體治療中，溶原性噬菌體可整合宿主基因組。正確/錯誤40.微生物菌種保藏需定期轉種，冷凍干燥法優(yōu)于超低溫冷凍。正確/錯誤五、免疫學實驗技術（共10題，每題2分）41.間接ELISA中，一抗為特異性抗體，二抗為酶標抗體。正確/錯誤42.流式細胞術檢測細胞表面標志物時，需使用熒光標記抗體。正確/錯誤43.免疫印跡（WesternBlot）中，蛋白轉移后需封閉非特異性位點。正確/錯誤44.單克隆抗體生產(chǎn)需通過雜交瘤技術篩選陽性細胞。正確/錯誤45.ELISPOT技術可檢測細胞因子分泌，但無法區(qū)分活細胞和死細胞。正確/錯誤46.免疫熒光染色中，DAPI染料可用于細胞核復染。正確/錯誤47.抗體效價滴定需通過系列稀釋法確定最佳工作濃度。正確/錯誤48.細胞因子芯片可同時檢測多種細胞因子，但交叉反應可能干擾結果。正確/錯誤49.補體依賴細胞毒試驗（CDC）需檢測抗體與補體結合活性。正確/錯誤50.免疫磁珠分選技術可富集目標細胞，但可能導致細胞活性下降。正確/錯誤答案與解析一、分子生物學實驗技術（答案與解析）1.正確解析：引物二聚體是引物自身或引物間非特異性結合產(chǎn)物，會競爭模板，降低特異性擴增效率。2.正確解析：電泳時，分子尺寸越小，受電場力影響越大，遷移速度越快。3.正確解析：不同限制性內切酶識別位點不同，但可能存在重疊序列，導致切割位點相互影響。4.錯誤解析：RT-PCR可區(qū)分轉錄本豐度差異，通過比較Ct值可量化表達水平。5.正確解析：基因芯片技術成本較高，但可高通量檢測基因表達。6.正確解析：熒光定量PCR通過實時監(jiān)測熒光信號累積計算模板量，無需標準曲線（但可用標準曲線校準）。7.錯誤解析：Sanger測序法適用于小規(guī)模測序，高通量測序常用NGS技術。8.正確解析：CRISPR-Cas9通過gRNA識別靶向DNA序列，Cas9蛋白切割DNA。9.正確解析：EcoRI和HindIII是常用雙酶切位點，可避免載體自身環(huán)化。10.正確解析：一抗和二抗需使用不同物種來源（如兔抗鼠、羊抗兔），避免交叉反應。二、細胞培養(yǎng)與遺傳轉化實驗技術（答案與解析）11.正確解析：胰蛋白酶消化可松解貼壁細胞，但需避免過度消化導致細胞損傷。12.正確解析：愈傷組織分化需光照（營養(yǎng)生長）和暗培養(yǎng)（誘導分化）交替。13.錯誤解析：農(nóng)桿菌介導轉化效率高于基因槍，但基因槍適用于非轉化材料（如木質部）。14.正確解析：顯微注射操作復雜，成功率低于電穿孔等現(xiàn)代技術，但適用性廣。15.正確解析：CHIR99021等抑制劑可抑制Notch信號，促進干細胞自我更新。16.正確解析：凋亡時線粒體膜電位降低，釋放Caspase激活因子。17.錯誤解析：流式細胞術通過凋亡標記（如AnnexinV）和PI染色區(qū)分凋亡與壞死。18.正確解析：電融合利用電場穿孔細胞膜，效率高于化學方法（如聚乙二醇）。19.正確解析：不同細胞對轉染試劑敏感度不同，需優(yōu)化濃度。20.正確解析：脫靶效應是基因編輯風險，需通過測序驗證編輯準確性。三、生物化學實驗技術（答案與解析）21.正確解析：Km反映酶與底物親和力，Km越小親和力越強。22.錯誤解析：Bradford法靈敏度高，但Lowry法更準確測定堿性蛋白。23.錯誤解析：瓊脂糖電泳分離蛋白質時，分子量越大遷移速度越快（因分子篩效應）。24.錯誤解析：HPLC可檢測無紫外吸收物質，通過熒光、質譜等檢測器。25.正確解析：Edman降解法逐個切除C端氨基酸，測定序列。26.正確解析：NMR解析蛋白質結構耗時，但無需純化。27.正確解析：質譜通過離子化效率區(qū)分分子，基質效應需優(yōu)化條件。28.錯誤解析：TMB顯色法穩(wěn)定性高，HRP顯色法靈敏度更高。29.正確解析：糖化反應需加熱促進美拉德反應和AGEs形成。30.錯誤解析：LDH釋放區(qū)分壞死（膜破裂）和凋亡（線粒體損傷）。四、微生物學實驗技術（答案與解析）31.正確解析：平板劃線法第4區(qū)應呈點狀，確保單菌落分離。32.正確解析：革蘭氏染色區(qū)分細胞壁結構，陰性菌脫色后呈紅色。33.正確解析：血球計數(shù)板和顯微鏡是顯微鏡計數(shù)法必需工具。34.正確解析：紙片擴散法操作簡便，臨床常用；瓊脂稀釋法精確。35.錯誤解析：Illumina平臺適用于全基因組測序，宏基因組用454或IonTorrent。36.正確解析：MAC培養(yǎng)基抑制革蘭氏陰性菌，富集腸桿菌科。37.正確解析：菌落雜交需標記探針雜交目標DNA片段。38.正確解析：厭氧培養(yǎng)需排除氧氣，厭氧罐可維持無氧環(huán)境。39.正確解析：溶原性噬菌體整合宿主基因組，形成prophage。40.錯誤解析：冷凍干燥法長期保藏優(yōu)于超低溫冷凍（-80℃）。五、免疫學實驗技術（答案與解析）41.正確解析：間接ELISA通過二抗放大信號，一抗特異性結合目標抗原。42.正確解析：流式細胞術需熒光抗體標記表面標志物。43.正確解析：封閉可減少非特異性結合，提高信號特異性。44.正確解析：雜交瘤技術通過融合B細胞和骨髓瘤細胞產(chǎn)生單克隆。45.錯誤解析：EL