病原體采樣標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)流程一、引言病原體采樣是感染性疾病診斷、疫情監(jiān)測、溯源分析及防控策略制定的核心環(huán)節(jié)。精準(zhǔn)、規(guī)范的采樣操作不僅能保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，還能有效降低生物安全風(fēng)險。本標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)流程（SOP）結(jié)合臨床實踐與生物安全規(guī)范，明確采樣各環(huán)節(jié)的操作要點，為實驗室檢測、公共衛(wèi)生調(diào)查等工作提供標(biāo)準(zhǔn)化指引。二、采樣前準(zhǔn)備（一）人員資質(zhì)與培訓(xùn)采樣人員需具備醫(yī)學(xué)檢驗、公共衛(wèi)生或相關(guān)專業(yè)背景，且通過生物安全培訓(xùn)（含個人防護(hù)、樣本處理、應(yīng)急處置）及采樣技能考核。高風(fēng)險病原體（如高致病性禽流感病毒、新型冠狀病毒）采樣需額外接受專項培訓(xùn)，確保掌握特殊防護(hù)與操作要求。（二）物資與設(shè)備準(zhǔn)備1.采樣器具：根據(jù)樣本類型選擇滅菌級器具，如咽拭子/鼻拭子（植絨拭子優(yōu)先，避免棉拭子纖維殘留）、無菌注射器（帶針/無針）、采樣管（含保存液，病毒采樣宜用滅活型或非滅活型保存液，細(xì)菌采樣用相應(yīng)培養(yǎng)基）、無菌容器（糞便、分泌物采集）。2.防護(hù)裝備：醫(yī)用防護(hù)服、N95口罩（或同級防護(hù)口罩）、護(hù)目鏡/面屏、雙層手套（外層為一次性無菌手套）、鞋套，高風(fēng)險操作需加穿正壓防護(hù)服。3.輔助物資：75%乙醇（皮膚消毒）、碘伏（黏膜消毒）、止血帶（血液采樣）、生物安全運輸箱（含冰排/干冰）、樣本標(biāo)簽（含唯一編號、采集時間、類型、患者信息）。（三）環(huán)境準(zhǔn)備1.采樣場所：通風(fēng)良好，配備手消毒劑、醫(yī)療廢物桶（雙層包裝）。疑似高風(fēng)險病原體污染區(qū)域需在生物安全柜內(nèi)操作，或設(shè)置臨時采樣帳篷（空氣流通、分區(qū)明確）。2.設(shè)備校驗：生物安全柜需定期（每月）進(jìn)行氣流與過濾效率檢測；采樣器具滅菌后需核查滅菌標(biāo)識（如化學(xué)指示卡變色）。三、采樣操作流程（一）呼吸道樣本（咽拭子、鼻拭子）1.咽拭子：患者頭部后仰，張口發(fā)“啊”音暴露咽喉部。采樣人員持植絨拭子，快速擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁（各3次），避免接觸舌面或口腔黏膜。操作后將拭子垂直插入含保存液的采樣管，折斷尾部（或旋緊蓋子），標(biāo)注信息。2.鼻拭子：患者頭部微仰，拭子沿鼻腔壁（與面部垂直方向）插入1~2cm（成人）或0.5~1cm（兒童），旋轉(zhuǎn)3圈后緩慢取出，立即放入采樣管，操作同咽拭子。（二）血液樣本1.靜脈血：選擇肘前靜脈，75%乙醇消毒皮膚（直徑≥5cm），待干后穿刺。采血量根據(jù)檢測需求（如核酸檢測需2~5mL，血清學(xué)檢測需5~10mL），抗凝劑選擇：病毒檢測用EDTA抗凝管，細(xì)菌培養(yǎng)用無菌無抗凝管。2.末梢血：碘伏消毒指尖/耳垂，待干后穿刺，用無菌吸管采集全血（避免擠壓組織液），注入含抗凝劑的微量管。（三）糞便樣本采集新鮮糞便（發(fā)病24小時內(nèi)優(yōu)先），用無菌勺取黃豆粒大?。s2g），放入含保存液的無菌容器（或Cary-Blair培養(yǎng)基），攪拌均勻。若患者無便意，可用無菌肛拭子插入肛門3~5cm，旋轉(zhuǎn)采集后放入保存液。（四）分泌物/膿液樣本用無菌棉簽蘸取分泌物（如痰液、傷口膿液），避免接觸周圍正常組織。痰液需采集深部咳痰（清晨空腹為佳），若患者咳痰困難，可采用霧化誘導(dǎo)（需無菌生理鹽水霧化）。采集后將棉簽放入含保存液的采樣管，或直接接種培養(yǎng)基（細(xì)菌培養(yǎng)）。（五）環(huán)境樣本1.物體表面：用無菌棉拭子蘸取中和劑（如含氯消毒劑污染需用硫代硫酸鈉中和液），在10cm×10cm區(qū)域內(nèi)橫豎各擦拭5次，將拭子放入含中和液的采樣管，震蕩洗脫。2.空氣樣本：采用撞擊法（采樣器）或沉降法（打開平皿暴露15~30分鐘），采樣后立即送檢（沉降法平皿需倒置保存）。四、樣本處理與保存（一）即時處理采樣后1小時內(nèi)（病毒樣本≤2小時）處理，若無法即時檢測：病毒樣本：4℃暫存不超過24小時，-80℃長期保存（避免反復(fù)凍融）；細(xì)菌樣本：立即接種培養(yǎng)基（需氧菌2小時內(nèi)，厭氧菌15分鐘內(nèi)），或4℃暫存（不超過4小時）；血清樣本：室溫靜置30分鐘后離心（3000rpm，10分鐘），分離血清后-20℃保存。（二）運輸要求使用UN2814生物安全運輸箱（內(nèi)層防滲漏，外層防破損），箱內(nèi)放置冰排（保持2~8℃或-20℃以下，依樣本類型）。隨附《生物安全運輸聲明》，標(biāo)注樣本編號、類型、數(shù)量、接收方信息，運輸人員需經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)并備案。五、生物安全與風(fēng)險防控（一）個人防護(hù)采樣全程需佩戴防護(hù)裝備，操作后按“七步洗手法”清潔雙手，脫防護(hù)裝備時遵循“外污染內(nèi)清潔”原則（如先脫外層手套，再消毒手，依次脫防護(hù)服、口罩等）。（二）操作規(guī)范嚴(yán)禁在生物安全柜外處理高風(fēng)險樣本；樣本泄漏時，用吸水紙覆蓋，倒含氯消毒劑（____mg/L）作用30分鐘后清理，記錄并報告；醫(yī)療廢物雙層包裝，標(biāo)識“感染性廢物”，高壓滅菌（121℃，30分鐘）后處置。（三）應(yīng)急處置若發(fā)生針刺傷、黏膜污染，立即用清水/生理鹽水沖洗，報告主管并就醫(yī)。高風(fēng)險病原體暴露需啟動暴露后預(yù)防（如疫苗接種、抗病毒藥物干預(yù)）。六、質(zhì)量控制要點（一）采樣前核查器具滅菌有效期（如拭子包裝無破損、化學(xué)指示卡變色）；保存液無渾濁、無沉淀，標(biāo)簽完整；防護(hù)裝備無破損，生物安全柜氣流正常。（二）采樣中監(jiān)控避免樣本交叉污染（一人一換手套、一用一滅菌器具）；確保樣本量充足（如咽拭子可見分泌物附著，血液量達(dá)標(biāo)）；實時記錄（采集時間、方法、樣本狀態(tài)、患者癥狀）。（三）采樣后驗收實驗室接收樣本時核查：標(biāo)簽清晰、保存液無泄漏、運輸溫度合規(guī)，不符合要求的樣本需重新采集。七、常見問題與優(yōu)化建議1.樣本污染：多因操作不規(guī)范（如拭子接觸口腔黏膜）或環(huán)境不潔。優(yōu)化：加強(qiáng)人員培訓(xùn)，采樣前消毒環(huán)境，使用獨立包裝拭子。2.樣本量不足：如痰液黏稠難以采集。優(yōu)化：霧化誘導(dǎo)咳痰，或采用支氣管肺泡灌洗液替代。3.生物安全疏漏：如防護(hù)裝備穿脫錯誤。優(yōu)化：定期演練，設(shè)置“雙人核查”環(huán)節(jié)。結(jié)語病原體采樣SOP的嚴(yán)格執(zhí)行，是保障檢測質(zhì)量、防控生物