慢性牙周炎與冠心病患者齦下菌斑中三種致病菌分布及關(guān)聯(lián)研究一、引言1.1研究背景慢性牙周炎（ChronicPeriodontitis,CP）與冠心?。–oronaryHeartDisease,CHD）作為臨床上極為常見的兩種疾病，對人類健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。慢性牙周炎在全球范圍內(nèi)廣泛流行，影響著大量人群。據(jù)相關(guān)研究表明，其在成年人中的患病率相當(dāng)高，部分地區(qū)甚至高達(dá)90%以上。這一疾病主要是由牙菌斑中的微生物及其毒性產(chǎn)物引發(fā)的牙周支持組織的慢性感染性疾病。牙周組織在炎癥的持續(xù)侵蝕下，會逐漸出現(xiàn)牙齦紅腫、出血、牙周袋形成、牙槽骨吸收等癥狀，隨著病情的不斷發(fā)展，最終可能導(dǎo)致牙齒松動、脫落，極大地影響患者的咀嚼功能、發(fā)音以及面部美觀，進(jìn)而降低生活質(zhì)量。不僅如此，慢性牙周炎還與多種全身系統(tǒng)性疾病存在關(guān)聯(lián)，如糖尿病、心血管疾病、呼吸系統(tǒng)疾病等，進(jìn)一步加重了患者的健康負(fù)擔(dān)。冠心病同樣是一種嚴(yán)重危害人類健康的心血管疾病，其發(fā)病率和死亡率在全球范圍內(nèi)均居高不下。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計(jì)，每年因冠心病死亡的人數(shù)眾多。冠心病的主要病理基礎(chǔ)是冠狀動脈粥樣硬化，當(dāng)冠狀動脈內(nèi)的粥樣斑塊逐漸形成并不斷發(fā)展，會導(dǎo)致血管狹窄甚至堵塞，使得心肌供血不足，從而引發(fā)心絞痛、心肌梗死等嚴(yán)重的心血管事件。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及多種因素，如高血壓、高血脂、高血糖、吸煙、肥胖等傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素，以及炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等新興因素。近年來，越來越多的研究開始關(guān)注到慢性炎癥在冠心病發(fā)病中的重要作用，而牙周炎作為一種常見的慢性炎癥性疾病，與冠心病之間的潛在聯(lián)系逐漸成為研究熱點(diǎn)。牙周致病菌作為慢性牙周炎的主要致病因素，在牙周炎的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演著關(guān)鍵角色。其中，福賽斯坦納菌（Tannerellaforsythensis,T.f）、牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonasgingivalis,P.g）、中間普氏菌（Prevotellaintermedia,P.i）被認(rèn)為是與慢性牙周炎密切相關(guān)的三種主要致病菌。T.f是一種革蘭氏陰性厭氧桿菌，具有較強(qiáng)的致病性，能夠產(chǎn)生多種毒力因子，如蛋白酶、內(nèi)***等，這些毒力因子可以破壞牙周組織的細(xì)胞外基質(zhì)，抑制宿主的免疫反應(yīng)，從而促進(jìn)牙周炎的發(fā)展；P.g也是革蘭氏陰性厭氧菌，是公認(rèn)的牙周炎主要致病菌之一，它能夠黏附、侵入牙周組織細(xì)胞，逃避宿主的免疫監(jiān)視，并通過分泌多種酶和毒素，如牙齦蛋白酶、脂多糖等，破壞牙周組織的結(jié)構(gòu)和功能；P.i同樣為革蘭氏陰性厭氧菌，常與其他牙周致病菌協(xié)同作用，參與牙周炎的病理過程，其產(chǎn)生的一些代謝產(chǎn)物也能夠引發(fā)炎癥反應(yīng)，對牙周組織造成損害。越來越多的研究提示，牙周致病菌與冠心病之間可能存在著緊密的聯(lián)系。一方面，牙周致病菌及其產(chǎn)生的毒素可以通過血液循環(huán)進(jìn)入全身系統(tǒng)，到達(dá)冠狀動脈，直接對血管內(nèi)皮細(xì)胞造成損傷，促進(jìn)動脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展；另一方面，牙周炎引發(fā)的慢性炎癥反應(yīng)會導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生一系列炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，這些炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子可以進(jìn)入血液循環(huán)，作用于心血管系統(tǒng)，引起血管內(nèi)皮功能紊亂、血小板聚集、脂質(zhì)代謝異常等，進(jìn)而增加冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。此外，一些研究還發(fā)現(xiàn)，在冠心病患者的冠狀動脈粥樣硬化斑塊中檢測到了牙周致病菌的DNA，這進(jìn)一步表明牙周致病菌可能直接參與了冠心病的發(fā)病過程。然而，目前關(guān)于這三種牙周致病菌在慢性牙周炎和冠心病患者齦下菌斑中的分布情況以及它們與這兩種疾病之間的具體關(guān)系仍不完全明確。深入研究它們在慢性牙周炎和冠心病患者齦下菌斑中的分布，探討其檢出率與這兩種疾病的關(guān)系，以及分析三種致病菌之間的相關(guān)性，不僅有助于進(jìn)一步揭示慢性牙周炎與冠心病的發(fā)病機(jī)制，為這兩種疾病的防治提供新的理論依據(jù)，而且對于提高人們對口腔健康與全身健康關(guān)系的認(rèn)識，制定更加有效的綜合防治策略具有重要的臨床意義。1.2研究目的本研究旨在通過嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和科學(xué)的檢測方法，精準(zhǔn)地對比福賽斯坦納菌（T.f）、牙齦卟啉單胞菌（P.g）、中間普氏菌（P.i）這三種主要牙周致病菌在慢性牙周炎患者與冠心病患者齦下菌斑中的分布情況。在此基礎(chǔ)上，深入探討這三種牙周致病菌的檢出率與慢性牙周炎和冠心病這兩種疾病各自嚴(yán)重程度之間的內(nèi)在聯(lián)系，進(jìn)一步明確它們在疾病發(fā)生、發(fā)展過程中所扮演的角色。同時，全面分析三種牙周致病菌之間的相關(guān)性，揭示它們在齦下菌斑生態(tài)環(huán)境中的相互作用關(guān)系，為深入理解慢性牙周炎與冠心病的發(fā)病機(jī)制提供關(guān)鍵的理論依據(jù)，為臨床實(shí)踐中這兩種疾病的早期診斷、預(yù)防以及綜合治療策略的制定開辟新的思路，切實(shí)提高疾病的防治水平，改善患者的健康狀況和生活質(zhì)量。1.3研究意義本研究對福賽斯坦納菌（T.f）、牙齦卟啉單胞菌（P.g）、中間普氏菌（P.i）在慢性牙周炎和冠心病患者齦下菌斑中的分布展開深入探究，具有多方面的重要意義。從理論層面來看，慢性牙周炎和冠心病作為臨床上常見且危害嚴(yán)重的疾病，盡管對它們各自的研究已取得一定成果，但對于兩者之間的內(nèi)在聯(lián)系，特別是牙周致病菌在其中所起的作用，仍存在諸多未知。通過本研究，有望揭示這三種牙周致病菌在慢性牙周炎和冠心病患者齦下菌斑中的獨(dú)特分布規(guī)律，進(jìn)一步明確它們的檢出率與兩種疾病嚴(yán)重程度之間的關(guān)聯(lián)，以及三種致病菌之間的相互關(guān)系。這不僅能夠豐富慢性牙周炎和冠心病的發(fā)病機(jī)制理論，為深入理解這兩種疾病的病理過程提供新的視角和關(guān)鍵依據(jù)，而且有助于完善口腔微生物學(xué)與心血管疾病交叉領(lǐng)域的理論體系，推動相關(guān)學(xué)科的發(fā)展。例如，若研究發(fā)現(xiàn)T.f在冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中的檢出率與冠心病病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，那么將為冠心病的發(fā)病機(jī)制研究提供新的方向，可能提示T.f在冠狀動脈粥樣硬化進(jìn)程中扮演重要角色。從實(shí)踐意義而言，本研究成果對慢性牙周炎和冠心病的預(yù)防、診斷及治療具有重要的指導(dǎo)價值。在預(yù)防方面，若明確某些牙周致病菌與這兩種疾病的緊密聯(lián)系，便可針對這些致病菌采取有效的預(yù)防措施。比如，通過加強(qiáng)口腔衛(wèi)生宣傳教育，提高公眾對口腔健康的重視程度，推廣正確的刷牙方法和使用牙線、漱口水等口腔清潔用品，減少牙周致病菌在口腔內(nèi)的滋生和繁殖，從而降低慢性牙周炎和冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。在診斷方面，可將這三種牙周致病菌的檢測作為慢性牙周炎和冠心病早期診斷的輔助指標(biāo)。例如，對于有冠心病家族史或其他高危因素的人群，若在其齦下菌斑中檢測到較高水平的特定牙周致病菌，可提前預(yù)警，以便進(jìn)一步進(jìn)行心血管系統(tǒng)檢查，實(shí)現(xiàn)疾病的早發(fā)現(xiàn)、早診斷。在治療方面，研究結(jié)果可為制定更加科學(xué)、有效的綜合治療方案提供依據(jù)。對于同時患有慢性牙周炎和冠心病的患者，在治療冠心病的同時，積極治療牙周炎，清除齦下菌斑中的致病微生物，可能有助于改善冠心病的病情。臨床研究表明，對牙周炎患者進(jìn)行有效的牙周治療后，其體內(nèi)的炎癥因子水平明顯下降，這可能對冠心病的治療產(chǎn)生積極影響。此外，本研究還有助于提高口腔醫(yī)生和心血管醫(yī)生對兩種疾病相關(guān)性的認(rèn)識，促進(jìn)多學(xué)科之間的協(xié)作與交流，為患者提供更加全面、優(yōu)質(zhì)的醫(yī)療服務(wù)。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1慢性牙周炎概述2.1.1定義與分類慢性牙周炎是一種極為常見的口腔疾病，在口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，它被定義為主要由牙菌斑中的微生物及其毒性產(chǎn)物引發(fā)的牙周支持組織的慢性感染性疾病。牙菌斑作為慢性牙周炎的始動因子，是一種牢固附著于牙齒表面的細(xì)菌性生物膜，其中包含了多種具有致病性的微生物。這些微生物在牙菌斑中大量繁殖，并持續(xù)釋放各種毒性物質(zhì)，如內(nèi)***、蛋白酶等，它們不斷侵蝕牙周組織，逐漸破壞牙周組織的正常結(jié)構(gòu)和功能，從而引發(fā)慢性牙周炎。慢性牙周炎具有一系列典型的臨床特征。在疾病初期，患者常表現(xiàn)出牙齦的慢性炎癥，牙齦顏色會由正常的粉紅色變?yōu)轷r紅或暗紅色，質(zhì)地也會變得松軟脆弱，探診時極易出血。隨著病情的進(jìn)一步發(fā)展，牙周袋會逐漸形成。牙周袋是指牙齦與牙齒之間原本緊密貼合的結(jié)合上皮向根方增殖，形成的病理性加深的盲袋。牙周袋內(nèi)會積聚大量的菌斑、牙石以及炎性滲出物，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)。同時，牙槽骨也會出現(xiàn)吸收現(xiàn)象，牙槽骨是支持牙齒的重要結(jié)構(gòu)，牙槽骨的吸收會導(dǎo)致牙齒逐漸失去支撐，出現(xiàn)松動、移位等癥狀。在疾病晚期，牙齒松動嚴(yán)重，甚至?xí)孕忻撀?，給患者的口腔功能和生活質(zhì)量帶來極大的影響。根據(jù)病情的嚴(yán)重程度，慢性牙周炎可分為輕度、中度和重度三個等級。輕度慢性牙周炎的主要表現(xiàn)為牙齦有炎癥，探診出血，牙周袋深度一般不超過4mm，牙槽骨吸收不超過根長的1/3，牙齒通常無明顯松動。中度慢性牙周炎時，牙齦炎癥較為明顯，牙周袋深度一般在4-6mm之間，牙槽骨吸收可達(dá)根長的1/3-1/2，牙齒可能會出現(xiàn)輕度松動，部分患者還可能出現(xiàn)牙齦退縮、牙根暴露等癥狀。重度慢性牙周炎則表現(xiàn)為牙齦炎癥嚴(yán)重，牙周袋深度超過6mm，牙槽骨吸收超過根長的1/2，牙齒松動明顯，甚至可能出現(xiàn)牙齒移位、脫落等情況，患者的咀嚼功能會受到嚴(yán)重影響，口腔衛(wèi)生狀況也往往較差，口臭明顯。明確慢性牙周炎的定義、臨床特征及分類，對于準(zhǔn)確診斷和有效治療該疾病具有重要的指導(dǎo)意義。2.1.2發(fā)病機(jī)制慢性牙周炎的發(fā)病是一個復(fù)雜且漸進(jìn)的過程，涉及細(xì)菌感染、炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)等多個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。細(xì)菌感染是慢性牙周炎發(fā)病的起始因素?？谇恢写嬖谥N類繁多的微生物，其中一些特定的細(xì)菌，如福賽斯坦納菌（T.f）、牙齦卟啉單胞菌（P.g）、中間普氏菌（P.i）等，被認(rèn)為是慢性牙周炎的主要致病菌。這些致病菌具有獨(dú)特的黏附機(jī)制，能夠特異性地黏附于牙周組織表面，如牙齦上皮細(xì)胞、牙骨質(zhì)等。例如，牙齦卟啉單胞菌可以通過其表面的菌毛和黏附素與牙齦上皮細(xì)胞表面的受體結(jié)合，從而牢固地附著在牙周組織上。一旦黏附成功，它們便開始在牙周組織表面大量繁殖，形成復(fù)雜的生物膜結(jié)構(gòu)，即牙菌斑。牙菌斑中的致病菌不斷代謝產(chǎn)生各種毒性產(chǎn)物，如內(nèi)***、蛋白酶、外毒素等，這些毒性產(chǎn)物直接對牙周組織細(xì)胞造成損傷，破壞牙周組織的細(xì)胞外基質(zhì)，干擾細(xì)胞的正常代謝和功能，進(jìn)而引發(fā)炎癥反應(yīng)。炎癥反應(yīng)是慢性牙周炎發(fā)病過程中的重要環(huán)節(jié)。當(dāng)牙周組織受到細(xì)菌及其毒性產(chǎn)物的刺激后，機(jī)體的免疫系統(tǒng)會迅速做出反應(yīng)，啟動炎癥過程。首先，巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞會被趨化到炎癥部位。巨噬細(xì)胞通過吞噬作用攝取細(xì)菌及其毒性產(chǎn)物，同時釋放一系列炎癥介質(zhì)，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等。這些炎癥介質(zhì)具有強(qiáng)大的生物學(xué)活性，它們可以激活其他免疫細(xì)胞，擴(kuò)大炎癥反應(yīng)的范圍和強(qiáng)度。例如，TNF-α可以誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子，促進(jìn)中性粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞向炎癥部位的黏附和遷移；IL-1能夠刺激成纖維細(xì)胞產(chǎn)生前列腺素E2（PGE2），PGE2可引起血管擴(kuò)張、通透性增加，導(dǎo)致局部組織充血、水腫，同時還能促進(jìn)破骨細(xì)胞的活化，加速牙槽骨的吸收。中性粒細(xì)胞則通過釋放活性氧物質(zhì)和蛋白酶等，直接殺傷細(xì)菌，但在這個過程中，也會對牙周組織造成一定的損傷。隨著炎癥的持續(xù)發(fā)展，炎癥細(xì)胞不斷浸潤，炎癥介質(zhì)持續(xù)釋放，導(dǎo)致牙周組織的炎癥反應(yīng)逐漸加重，牙周袋形成，牙槽骨開始吸收。免疫反應(yīng)在慢性牙周炎的發(fā)病機(jī)制中也起著關(guān)鍵作用。機(jī)體的免疫系統(tǒng)試圖通過免疫反應(yīng)清除牙周致病菌，維護(hù)牙周組織的健康，但在這個過程中，免疫反應(yīng)也可能對牙周組織造成損傷。一方面，體液免疫反應(yīng)中產(chǎn)生的抗體可以與細(xì)菌表面的抗原結(jié)合，通過調(diào)理作用促進(jìn)吞噬細(xì)胞對細(xì)菌的吞噬和清除。然而，抗原-抗體復(fù)合物的形成有時也會激活補(bǔ)體系統(tǒng)，產(chǎn)生一些具有炎癥活性的補(bǔ)體片段，如C3a、C5a等，這些補(bǔ)體片段可以進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致牙周組織的損傷。另一方面，細(xì)胞免疫反應(yīng)中，T淋巴細(xì)胞被激活后，會釋放多種細(xì)胞因子，如γ-干擾素（IFN-γ）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）等。IFN-γ可以激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)其吞噬和殺傷能力，但同時也會促進(jìn)炎癥介質(zhì)的釋放；IL-2則可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖和分化，進(jìn)一步擴(kuò)大免疫反應(yīng)。此外，免疫反應(yīng)過程中還會產(chǎn)生一些自身抗體，如抗牙齦抗體、抗膠原蛋白抗體等，這些自身抗體與牙周組織中的自身抗原結(jié)合，引發(fā)自身免疫反應(yīng)，對牙周組織造成損傷。在慢性牙周炎的發(fā)病過程中，細(xì)菌感染、炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)相互作用、相互影響，共同推動疾病的發(fā)展。2.1.3流行病學(xué)特征慢性牙周炎在全球范圍內(nèi)廣泛流行，嚴(yán)重影響著人們的口腔健康和生活質(zhì)量。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的相關(guān)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，全球范圍內(nèi)不同程度的牙周炎患病率較高，其中成年人的患病率尤為突出。在一些發(fā)達(dá)國家，如美國，成年人慢性牙周炎的患病率可達(dá)40%-60%；在歐洲部分國家，患病率也處于較高水平。在發(fā)展中國家，由于口腔衛(wèi)生保健意識相對薄弱、口腔醫(yī)療資源有限等因素，慢性牙周炎的患病率可能更高。例如，在非洲的一些地區(qū)，慢性牙周炎的患病率可高達(dá)80%以上。在國內(nèi)，慢性牙周炎同樣是一種常見的口腔疾病。根據(jù)第四次全國口腔健康流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，我國35-44歲居民中，牙齦出血檢出率為87.4%，牙石檢出率高達(dá)96.7%，這表明我國成年人的牙周健康狀況不容樂觀，慢性牙周炎的患病情況較為普遍。進(jìn)一步分析不同地區(qū)的情況，發(fā)現(xiàn)我國東部地區(qū)和城市居民的牙周健康狀況相對較好，而西部地區(qū)和農(nóng)村居民的牙周炎患病率較高。這可能與地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平、口腔衛(wèi)生保健服務(wù)的可及性以及居民的口腔健康意識等因素有關(guān)。在經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的東部地區(qū)和城市，居民通常能夠獲得更好的口腔醫(yī)療服務(wù)，對口腔健康的重視程度也較高，會定期進(jìn)行口腔檢查和清潔，從而降低了慢性牙周炎的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；而在經(jīng)濟(jì)相對落后的西部地區(qū)和農(nóng)村，口腔衛(wèi)生保健資源相對匱乏，居民的口腔健康知識普及程度較低，口腔衛(wèi)生習(xí)慣較差，導(dǎo)致慢性牙周炎的患病率居高不下。慢性牙周炎在不同人群中的分布還存在明顯的年齡差異。隨著年齡的增長，慢性牙周炎的患病率和嚴(yán)重程度呈逐漸上升的趨勢。在青少年時期，由于身體處于生長發(fā)育階段，口腔衛(wèi)生習(xí)慣逐漸養(yǎng)成，慢性牙周炎的患病率相對較低。然而，進(jìn)入成年期后，隨著生活方式的改變、口腔衛(wèi)生維護(hù)不當(dāng)以及一些全身因素的影響，慢性牙周炎的患病率開始逐漸增加。到了老年期，由于牙周組織的生理性退變、牙齒磨損、牙根暴露等原因，以及老年人可能患有多種全身性疾病，如糖尿病、心血管疾病等，這些因素都增加了慢性牙周炎的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，使得老年人的慢性牙周炎患病率和嚴(yán)重程度明顯高于其他年齡段。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國65-74歲老年人中，牙周袋檢出率高達(dá)62.8%，牙齒缺失率也較高，這充分說明了慢性牙周炎在老年人中的嚴(yán)重程度。此外，慢性牙周炎的患病率在性別上也存在一定差異。一般來說，男性的患病率略高于女性。這可能與男性的生活習(xí)慣、口腔衛(wèi)生意識以及激素水平等因素有關(guān)。男性在日常生活中可能更易吸煙、飲酒，這些不良生活習(xí)慣會對牙周組織造成損害，增加慢性牙周炎的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；同時，男性對口腔衛(wèi)生的重視程度相對較低，刷牙方法不正確、刷牙時間不足等情況較為常見，導(dǎo)致口腔衛(wèi)生狀況較差，容易滋生細(xì)菌，引發(fā)慢性牙周炎。而女性在生理周期和孕期等特殊時期，由于激素水平的變化，也會對牙周組織產(chǎn)生一定影響，增加患牙周炎的可能性，但總體上男性的患病率仍高于女性。明確慢性牙周炎的流行病學(xué)特征，有助于針對性地制定預(yù)防和治療策略，提高公眾的牙周健康水平。2.2冠心病概述2.2.1定義與分類冠心病，全稱為冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，是一種由于冠狀動脈粥樣硬化，致使血管管腔狹窄或閉塞，進(jìn)而導(dǎo)致心肌缺血缺氧或壞死的心臟疾病，在心血管疾病領(lǐng)域中占據(jù)著極為重要的地位。冠狀動脈作為為心肌提供血液供應(yīng)的關(guān)鍵血管，其健康狀況直接關(guān)乎心肌的正常功能。當(dāng)冠狀動脈內(nèi)出現(xiàn)粥樣硬化斑塊時，這些斑塊會逐漸增大，使血管內(nèi)徑變窄，阻礙血液的順暢流動，從而引發(fā)一系列心臟病變。根據(jù)臨床癥狀和發(fā)病特點(diǎn)，冠心病主要可分為以下幾種類型：無癥狀性心肌缺血：又稱隱匿型冠心病，此類患者雖然冠狀動脈存在粥樣硬化病變，導(dǎo)致血管狹窄程度在50%以下，但在日常生活中并無明顯的臨床不適癥狀。然而，這并不意味著病情不嚴(yán)重，無癥狀性心肌缺血可能在不知不覺中對心肌造成損害，增加心肌梗死和猝死的風(fēng)險(xiǎn)?；颊咄窃谶M(jìn)行心電圖、動態(tài)心電圖監(jiān)測或運(yùn)動負(fù)荷試驗(yàn)等檢查時，才被發(fā)現(xiàn)存在心肌缺血的表現(xiàn)。心絞痛：這是冠心病中較為常見的類型，主要是由于冠狀動脈粥樣硬化導(dǎo)致血管狹窄超過50%，在運(yùn)動、勞累、情緒激動等情況下，心肌需氧量增加，但狹窄的冠狀動脈無法提供足夠的血液供應(yīng)，從而引發(fā)心肌缺血，導(dǎo)致患者出現(xiàn)心痛、呼吸困難等癥狀。心絞痛發(fā)作時，疼痛通常位于胸骨后，可放射至心前區(qū)、肩部、左臂內(nèi)側(cè)等部位，疼痛性質(zhì)多為壓榨性、悶痛或緊縮感，一般持續(xù)3-5分鐘，休息或含服硝酸甘油等藥物后可迅速緩解。根據(jù)發(fā)作的誘因、頻率、程度和持續(xù)時間等，心絞痛又可分為穩(wěn)定型心絞痛和不穩(wěn)定型心絞痛。穩(wěn)定型心絞痛的發(fā)作通常有明顯的誘因，發(fā)作程度相對穩(wěn)定，疼痛持續(xù)時間較短；而不穩(wěn)定型心絞痛則發(fā)作較為頻繁，疼痛程度較重，持續(xù)時間較長，且發(fā)作誘因不明顯，是介于穩(wěn)定型心絞痛和心肌梗死之間的一種臨床狀態(tài)，具有較高的心血管事件風(fēng)險(xiǎn)。心肌梗死：是冠心病中最為嚴(yán)重的類型之一，是指冠狀動脈的某一分支發(fā)生完全閉塞不通，導(dǎo)致相應(yīng)心肌區(qū)域嚴(yán)重缺血缺氧，心肌細(xì)胞發(fā)生壞死，喪失收縮功能，進(jìn)而被纖維組織所代替。心肌梗死起病急驟，患者會突然出現(xiàn)劇烈而持久的胸骨后疼痛，休息和含服硝酸甘油等藥物均不能緩解，常伴有大汗淋漓、惡心嘔吐、心律失常、心力衰竭等癥狀，嚴(yán)重時可危及生命。根據(jù)心電圖表現(xiàn)和心肌損傷標(biāo)志物的變化，心肌梗死又可分為ST段抬高型心肌梗死和非ST段抬高型心肌梗死，不同類型的心肌梗死在治療策略上存在一定差異。缺血性心肌?。洪L期心肌缺血會導(dǎo)致心肌局限性或彌漫性發(fā)生纖維化，使心臟的收縮和舒張功能受損，心臟逐漸擴(kuò)大或僵硬，進(jìn)而出現(xiàn)心力衰竭、心律失常等一系列病變，稱為缺血性心肌病?；颊咧饕憩F(xiàn)為呼吸困難、乏力、水腫等心力衰竭癥狀，以及心悸、頭暈等心律失常癥狀，病情往往呈進(jìn)行性發(fā)展，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和預(yù)后。猝死：是指在冠狀動脈粥樣硬化的基礎(chǔ)上，心臟突然停跳而引發(fā)的突然死亡。猝死通常發(fā)生迅速，患者在短時間內(nèi)（一般為1小時內(nèi)）因心臟原因?qū)е碌淖匀凰劳觯以谒劳銮翱蔁o任何癥狀或僅有輕微的前驅(qū)癥狀。猝死的發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，多與嚴(yán)重的心律失常有關(guān)，如心室顫動、心室撲動等，是冠心病患者最為嚴(yán)重的結(jié)局之一。準(zhǔn)確認(rèn)識冠心病的定義和分類，對于早期診斷、合理治療和改善患者預(yù)后具有重要意義。2.2.2發(fā)病機(jī)制冠心病的發(fā)病機(jī)制是一個復(fù)雜且涉及多因素相互作用的過程，其中動脈粥樣硬化的形成和血栓的產(chǎn)生在冠心病的發(fā)病進(jìn)程中起著核心作用。動脈粥樣硬化的形成是一個漸進(jìn)性的病理過程，涉及多個階段和多種細(xì)胞及分子的參與。最初，由于多種危險(xiǎn)因素的作用，如高血壓、高血脂、高血糖、吸煙、肥胖等，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞受損。血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血管內(nèi)壁的一層單細(xì)胞屏障，具有維持血管正常功能的重要作用，包括調(diào)節(jié)血管張力、抑制血小板黏附和聚集、抗血栓形成等。當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞受損后，其功能發(fā)生異常，血管壁的通透性增加，血液中的脂質(zhì)，尤其是低密度脂蛋白（LDL），更容易進(jìn)入血管內(nèi)膜下。進(jìn)入內(nèi)膜下的LDL會被氧化修飾，形成氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）。ox-LDL具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，它可以吸引血液中的單核細(xì)胞進(jìn)入血管內(nèi)膜下，并分化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞通過其表面的清道夫受體大量攝取ox-LDL，逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。隨著泡沫細(xì)胞的不斷增多和聚集，形成了早期的動脈粥樣硬化病變，即脂紋。脂紋進(jìn)一步發(fā)展，平滑肌細(xì)胞從血管中膜遷移至內(nèi)膜下，并增殖、合成大量細(xì)胞外基質(zhì)，包括膠原蛋白、彈性纖維等，使病變逐漸增厚、變硬，形成纖維斑塊。在纖維斑塊的基礎(chǔ)上，由于脂質(zhì)不斷沉積、炎癥反應(yīng)持續(xù)存在以及斑塊內(nèi)新生血管破裂出血等因素，纖維斑塊可發(fā)生破潰、糜爛，形成不穩(wěn)定斑塊，也就是易損斑塊。易損斑塊的纖維帽較薄，內(nèi)部脂質(zhì)核心較大，容易破裂，從而引發(fā)一系列后續(xù)的病理變化。當(dāng)易損斑塊破裂后，會暴露出斑塊內(nèi)的膠原纖維和組織因子等物質(zhì)，這些物質(zhì)具有很強(qiáng)的促凝作用。首先，血小板會迅速黏附、聚集在破裂斑塊表面，形成血小板血栓。同時，內(nèi)源性和外源性凝血途徑被激活，凝血因子相繼被激活，纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，與血小板相互交織，形成牢固的紅色血栓，導(dǎo)致冠狀動脈急性閉塞，心肌供血急劇減少或中斷，從而引發(fā)急性心肌梗死、不穩(wěn)定型心絞痛等急性冠狀動脈綜合征。此外，炎癥反應(yīng)在冠心病的發(fā)病機(jī)制中也起著關(guān)鍵作用。在動脈粥樣硬化的整個過程中，炎癥細(xì)胞如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等會浸潤到血管壁，釋放多種炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等。這些炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子可以進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)脂質(zhì)沉積、平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，加速動脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展；同時，它們還可以增強(qiáng)血小板的活性和聚集能力，促進(jìn)血栓的形成，增加冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。冠心病的發(fā)病機(jī)制是一個多因素、多階段相互作用的復(fù)雜過程，深入了解其發(fā)病機(jī)制，有助于制定更加有效的防治策略。2.2.3流行病學(xué)特征冠心病在全球范圍內(nèi)均具有較高的發(fā)病率和死亡率，是嚴(yán)重威脅人類健康的重要公共衛(wèi)生問題。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全球每年約有1790萬人死于心血管疾病，其中冠心病占據(jù)了相當(dāng)大的比例。在歐美等發(fā)達(dá)國家，冠心病的患病率和死亡率一直處于較高水平。例如，美國心臟病協(xié)會（AHA）發(fā)布的數(shù)據(jù)表明，美國約有1820萬人患有冠心病，每年因冠心病死亡的人數(shù)超過37萬人，冠心病已成為美國成年人死亡的主要原因之一。在歐洲，冠心病同樣是導(dǎo)致居民死亡的重要病因，不同國家的冠心病患病率和死亡率雖存在一定差異，但總體形勢依然嚴(yán)峻。在國內(nèi)，隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展、人們生活方式的改變以及人口老齡化的加劇，冠心病的發(fā)病率和死亡率也呈現(xiàn)出逐漸上升的趨勢。根據(jù)中國心血管健康與疾病報(bào)告2022顯示，我國心血管病現(xiàn)患人數(shù)約3.3億，其中冠心病患者約1139萬。從地域分布來看，我國冠心病的發(fā)病率存在一定的地區(qū)差異，北方地區(qū)的發(fā)病率相對高于南方地區(qū)。這可能與北方地區(qū)居民的飲食習(xí)慣、氣候條件以及高血壓、高血脂等心血管危險(xiǎn)因素的流行情況等因素有關(guān)。北方地區(qū)居民飲食中往往攝入較多的鹽、脂肪和膽固醇，且冬季氣候寒冷，這些因素都可能增加冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。冠心病在不同年齡、性別和職業(yè)人群中的分布也存在差異。從年齡分布來看，冠心病的發(fā)病率隨著年齡的增長而逐漸增加，尤其是在40歲以上的人群中，發(fā)病率明顯升高。這主要是由于隨著年齡的增長，動脈粥樣硬化的進(jìn)程逐漸加快，心血管系統(tǒng)的功能逐漸衰退，使得冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加。在性別方面，男性在年輕時冠心病的發(fā)病率高于女性，但在女性絕經(jīng)后，由于體內(nèi)雌激素水平下降，失去了對心血管系統(tǒng)的保護(hù)作用，女性冠心病的發(fā)病率迅速上升，與男性的差距逐漸縮小。在職業(yè)方面，從事高強(qiáng)度體力勞動或精神壓力較大職業(yè)的人群，如司機(jī)、警察、企業(yè)高管等，冠心病的發(fā)病率相對較高。長期的精神緊張、過度勞累以及生活不規(guī)律等因素，都可能導(dǎo)致血壓升高、血脂異常、血糖波動等，進(jìn)而增加冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。了解冠心病的流行病學(xué)特征，對于制定針對性的預(yù)防和干預(yù)措施，降低冠心病的發(fā)病率和死亡率具有重要的指導(dǎo)意義。2.3牙周致病菌概述2.3.1福賽斯坦納菌（T.f）福賽斯坦納菌（T.f）是一種革蘭氏陰性厭氧桿菌，在慢性牙周炎的發(fā)病過程中扮演著重要角色。其生物學(xué)特性獨(dú)特，細(xì)胞形態(tài)呈細(xì)長絲狀，大小約為(0.5-1.0)μm×(5-15)μm，具有多形性，有時可呈彎曲狀或螺旋狀。T.f無芽孢，無鞭毛，不能運(yùn)動，其細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)特殊，富含脂多糖等成分，這些成分與T.f的致病性密切相關(guān)。在牙周病中，T.f是一種重要的致病菌，常被視為牙周炎的標(biāo)志性細(xì)菌之一。研究表明，在慢性牙周炎患者的齦下菌斑中，T.f的檢出率明顯高于健康人群。一項(xiàng)針對慢性牙周炎患者的研究發(fā)現(xiàn)，其齦下菌斑中T.f的檢出率高達(dá)70%以上，而在健康對照組中，T.f的檢出率則較低。T.f的存在與牙周炎的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，隨著牙周炎病情的加重，齦下菌斑中T.f的數(shù)量和比例也會相應(yīng)增加。在重度慢性牙周炎患者的齦下菌斑中，T.f的含量明顯高于輕度和中度患者，這表明T.f在牙周炎的發(fā)展進(jìn)程中起到了重要的推動作用。T.f的致病機(jī)制較為復(fù)雜，主要通過產(chǎn)生多種毒力因子來破壞牙周組織。T.f能夠分泌大量的蛋白酶，如半胱氨酸蛋白酶等。這些蛋白酶具有強(qiáng)大的蛋白水解活性，可以降解牙周組織中的細(xì)胞外基質(zhì)成分，如膠原蛋白、纖連蛋白等。膠原蛋白是牙周組織中維持組織結(jié)構(gòu)和功能的重要成分，其被蛋白酶降解后，會導(dǎo)致牙周組織的支持結(jié)構(gòu)受損，牙齒逐漸松動。同時，纖連蛋白的降解也會影響細(xì)胞的黏附和遷移，干擾牙周組織的修復(fù)和再生過程。此外，T.f還能產(chǎn)生內(nèi)***，內(nèi)是一種脂多糖，具有很強(qiáng)的免疫原性和毒性。它可以激活宿主的免疫系統(tǒng)，引發(fā)過度的炎癥反應(yīng)。內(nèi)與巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面的受體結(jié)合，促使這些細(xì)胞釋放大量的炎癥介質(zhì)，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等。這些炎癥介質(zhì)不僅會導(dǎo)致局部組織的炎癥反應(yīng)加劇，引起牙齦紅腫、出血、牙周袋形成等癥狀，還會通過血液循環(huán)影響全身系統(tǒng)，對心血管系統(tǒng)等造成損害。另外，T.f還具有逃避宿主免疫監(jiān)視的能力，它可以通過改變自身表面的抗原結(jié)構(gòu)，使免疫系統(tǒng)難以識別和清除，從而在牙周組織中持續(xù)生存和繁殖，進(jìn)一步加重牙周炎的病情。2.3.2牙齦卟啉單胞菌（P.g）牙齦卟啉單胞菌（P.g）是革蘭氏陰性厭氧菌，也是慢性牙周炎的主要致病菌之一，其在牙周病的發(fā)生、發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用。P.g的生物學(xué)特性較為獨(dú)特，細(xì)胞形態(tài)呈球桿狀，大小約為(0.5-0.8)μm×(1.0-3.0)μm，無芽孢，無動力，具有典型的革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，外膜富含脂多糖等成分。P.g對生長環(huán)境要求較為苛刻，在厭氧環(huán)境下生長良好，需要含有血液、血清或其他生長因子的培養(yǎng)基才能生長。它具有較強(qiáng)的耐酸性，能夠在口腔微酸性環(huán)境中生存和繁殖。在牙周病中，P.g是引發(fā)牙周組織炎癥和破壞的重要病原體。大量研究表明，P.g在慢性牙周炎患者的齦下菌斑中廣泛存在，且其檢出率與牙周炎的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。在重度慢性牙周炎患者的齦下菌斑中，P.g的檢出率可高達(dá)90%以上，而在輕度患者中，檢出率相對較低。P.g不僅能夠黏附、侵入牙周組織細(xì)胞，還能逃避宿主的免疫監(jiān)視，在牙周組織內(nèi)持續(xù)生存和繁殖，不斷對牙周組織造成損害。P.g可以通過其表面的菌毛、黏附素等結(jié)構(gòu)與牙齦上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等表面的受體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對牙周組織的黏附和侵入。一旦侵入細(xì)胞內(nèi)，P.g能夠在細(xì)胞內(nèi)生存和繁殖，干擾細(xì)胞的正常代謝和功能，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和壞死。P.g的致病機(jī)制主要與其產(chǎn)生的多種毒力因子有關(guān)。P.g能夠分泌牙齦蛋白酶，這是一類半胱氨酸蛋白酶，包括精氨酸特異性蛋白酶和賴氨酸特異性蛋白酶等。牙齦蛋白酶具有廣泛的蛋白水解活性，它可以降解牙周組織中的多種蛋白質(zhì)成分，如膠原蛋白、免疫球蛋白、補(bǔ)體等。膠原蛋白的降解會破壞牙周組織的支持結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致牙齒松動；免疫球蛋白和補(bǔ)體的降解則會削弱宿主的免疫防御功能，使機(jī)體更容易受到感染。此外，P.g產(chǎn)生的脂多糖（LPS）也是一種重要的毒力因子。LPS可以激活宿主的免疫系統(tǒng)，引發(fā)炎癥反應(yīng)。它與巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面的Toll樣受體4（TLR4）結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促使免疫細(xì)胞釋放大量的炎癥介質(zhì)，如TNF-α、IL-1、IL-6等。這些炎癥介質(zhì)會導(dǎo)致牙周組織的炎癥反應(yīng)加劇，引起牙槽骨吸收、牙周袋形成等病理變化。同時，P.g還能通過產(chǎn)生一些其他的毒力因子，如溶血素、吲哚等，進(jìn)一步損害牙周組織和干擾宿主的免疫反應(yīng)，從而促進(jìn)牙周炎的發(fā)展。2.3.3中間普氏菌（P.i）中間普氏菌（P.i）是一種革蘭氏陰性厭氧菌，在慢性牙周炎的發(fā)病機(jī)制中具有不可忽視的作用。從生物學(xué)特性來看，P.i的細(xì)胞形態(tài)呈短桿狀或球桿狀，大小約為(0.5-0.8)μm×(1.0-2.0)μm，無芽孢，無鞭毛，不能運(yùn)動。其細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與其他革蘭氏陰性菌相似，外膜含有脂多糖等成分。P.i對生長環(huán)境的要求較為嚴(yán)格，需要在厭氧條件下生長，并且對培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分有特定需求，通常需要含有維生素K和血紅素等物質(zhì)的培養(yǎng)基才能良好生長。在牙周病中，P.i常與其他牙周致病菌協(xié)同作用，共同參與牙周炎的病理過程。研究發(fā)現(xiàn)，在慢性牙周炎患者的齦下菌斑中，P.i的檢出率較高，尤其是在一些病情較為嚴(yán)重的患者中更為明顯。在伴有牙周膿腫的慢性牙周炎患者齦下菌斑中，P.i的檢出率可達(dá)到60%以上。P.i的存在與牙周組織的炎癥程度密切相關(guān)，它能夠產(chǎn)生多種代謝產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物可以引發(fā)炎癥反應(yīng)，對牙周組織造成損害。P.i產(chǎn)生的一些有機(jī)酸，如丁酸、丙酸等，會降低牙周組織局部的pH值，破壞牙周組織的微生態(tài)平衡，導(dǎo)致其他有害菌的滋生和繁殖。同時，這些有機(jī)酸還可以直接刺激牙周組織，引起炎癥細(xì)胞的浸潤和炎癥介質(zhì)的釋放，導(dǎo)致牙齦紅腫、出血等炎癥癥狀。P.i的致病機(jī)制主要包括以下幾個方面。P.i能夠產(chǎn)生多種酶類，如蛋白酶、磷脂酶等。蛋白酶可以降解牙周組織中的蛋白質(zhì)成分，破壞牙周組織的結(jié)構(gòu)和功能；磷脂酶則可以分解細(xì)胞膜上的磷脂，導(dǎo)致細(xì)胞損傷和死亡。P.i還能產(chǎn)生一些細(xì)胞毒素，如白細(xì)胞毒素等。白細(xì)胞毒素可以直接殺傷中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞，削弱宿主的免疫防御功能，使機(jī)體難以有效清除病原菌，從而有利于P.i在牙周組織中的生存和繁殖。此外，P.i在代謝過程中產(chǎn)生的一些揮發(fā)性硫化物，如硫化氫、甲基硫醇等，不僅會導(dǎo)致口臭，還會對牙周組織細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，進(jìn)一步加重牙周炎的病情。同時，P.i與其他牙周致病菌之間存在協(xié)同作用，它可以與牙齦卟啉單胞菌、福賽斯坦納菌等相互影響，共同促進(jìn)牙周炎的發(fā)展。P.i可以為其他致病菌提供生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，或者改變牙周組織的微環(huán)境，使其更有利于其他致病菌的生存和繁殖；反之，其他致病菌也可能會影響P.i的生長和致病性，這種協(xié)同作用使得牙周炎的病情更加復(fù)雜和嚴(yán)重。三、研究設(shè)計(jì)與方法3.1研究對象本研究選取[具體醫(yī)院名稱]口腔科和心內(nèi)科門診及住院患者作為研究對象，時間跨度為[具體時間段]。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：慢性牙周炎患者（對照組）：經(jīng)臨床檢查及相關(guān)影像學(xué)檢查，依據(jù)《牙周病學(xué)》第[X]版中慢性牙周炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診。全口至少有16顆功能牙，牙周探診深度（PD）≥4mm的位點(diǎn)不少于4個，且分布在不同象限；同時伴有牙齦炎癥，如牙齦紅腫、出血，探診出血（BOP）陽性率≥30%，且近3個月內(nèi)未接受過牙周系統(tǒng)治療，1年內(nèi)未使用過抗生素。冠心病伴慢性牙周炎患者（實(shí)驗(yàn)組）：冠心病診斷依據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）制定的標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)冠狀動脈造影顯示至少一支冠狀動脈狹窄程度≥50%，或有典型的心絞痛癥狀，結(jié)合心電圖、心肌損傷標(biāo)志物等檢查確診。同時符合上述慢性牙周炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：患有嚴(yán)重的肝、腎、肺等重要臟器功能障礙；患有糖尿病、血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病等全身性疾病且病情未得到有效控制；近3個月內(nèi)有急性感染性疾病史；正在接受抗凝、抗炎等可能影響牙周致病菌檢測結(jié)果的藥物治療；妊娠期或哺乳期婦女；口腔內(nèi)有急性牙周膿腫、重度牙周炎導(dǎo)致牙齒極度松動（松動度Ⅲ度及以上）需即刻拔除者；精神疾病患者，無法配合完成相關(guān)檢查和樣本采集。根據(jù)以往相關(guān)研究及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用樣本量計(jì)算公式：n=\frac{(Z_{\alpha/2}+Z_{\beta})^2\times(p_1(1-p_1)+p_2(1-p_2))}{(p_1-p_2)^2}，其中Z_{\alpha/2}為雙側(cè)α水平對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布分位數(shù)（α取0.05時，Z_{\alpha/2}=1.96），Z_{\beta}為1-β水平對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布分位數(shù)（β取0.1時，Z_{\beta}=1.28），p_1和p_2分別為對照組和實(shí)驗(yàn)組中某事件的發(fā)生率，本研究中預(yù)計(jì)對照組三種牙周致病菌的檢出率為p_1=50%，實(shí)驗(yàn)組為p_2=70%。代入公式計(jì)算得出每組至少需要樣本量n=85例?？紤]到可能存在的樣本脫落等情況，本研究最終納入慢性牙周炎患者100例作為對照組，冠心病伴慢性牙周炎患者100例作為實(shí)驗(yàn)組。在獲取樣本過程中，向所有研究對象詳細(xì)介紹研究目的、方法、過程及可能存在的風(fēng)險(xiǎn)等，獲得其書面知情同意書，以確保研究的順利進(jìn)行和患者的權(quán)益。3.2樣本采集在患者知情同意并簽署同意書后，于清晨進(jìn)行齦下菌斑樣本采集，以避免飲食等因素對菌斑成分的影響。使用無菌Gracey齦下刮治器，在每例患者全口選取4-6顆具有代表性的牙齒，一般選擇PD≥4mm且炎癥表現(xiàn)明顯的牙齒，分布于不同象限，如雙側(cè)上頜第一磨牙、雙側(cè)下頜第一前磨牙等。采集時，先用棉球隔離采樣區(qū)域，用空氣-水注射器的溫和氣流吹干，以去除牙面的唾液和食物殘?jiān)雀蓴_物，確保采集到的菌斑純凈。然后，用齦下刮治器小心地在所選牙齒的近中頰側(cè)牙周袋內(nèi)，沿齦溝壁深入至袋底，輕輕刮取齦下菌斑，確保刮治器與牙周袋內(nèi)壁充分接觸，以獲取足夠的菌斑樣本。將刮取的菌斑樣本立即浸沒于含有MoBio緩沖液的無菌離心管中，刮治器尖端在緩沖液中浸泡4-5s，使菌斑充分轉(zhuǎn)移至緩沖液中，隨后在收集管內(nèi)側(cè)擦掉刮治器尖端殘留的菌斑。若遇到患者牙菌斑較少的情況，則同時對臼齒和前臼齒的牙弓進(jìn)行采樣，以增加樣本量，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。采集完成后，立即將樣本置于冰上保存，并在4小時內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測，若不能及時檢測，則將樣本置于-80℃冰箱保存，以防止菌斑中的微生物發(fā)生變化。在樣本采集過程中，嚴(yán)格遵循無菌操作原則，避免樣本受到外界微生物的污染，保證樣本的代表性和可靠性，為后續(xù)的檢測和分析提供高質(zhì)量的樣本。3.3檢測方法3.3.1DNA提取本研究采用磁珠法提取齦下菌斑中的DNA，該方法具有高效、快速、安全等優(yōu)點(diǎn)，能夠滿足實(shí)驗(yàn)對DNA質(zhì)量和純度的要求。磁珠法提取DNA的原理基于磁珠表面的特殊基團(tuán)與DNA分子之間的特異性相互作用。在裂解液的作用下，齦下菌斑中的細(xì)菌細(xì)胞被破碎，釋放出DNA。裂解液中通常含有表面活性劑、蛋白酶等成分，表面活性劑可以破壞細(xì)菌的細(xì)胞膜和細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)容物釋放出來；蛋白酶則能夠降解與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)，促進(jìn)DNA的釋放。此時，加入含有磁珠的結(jié)合液，在特定的緩沖體系下，DNA分子會特異性地吸附到磁珠表面。這是因?yàn)榇胖楸砻嫘揎椨恤然被然鶊F(tuán)，在高鹽環(huán)境下，DNA分子的磷酸基團(tuán)與磁珠表面的基團(tuán)通過離子鍵或氫鍵等相互作用實(shí)現(xiàn)結(jié)合。而蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)則不被吸附，仍留在溶液中，從而實(shí)現(xiàn)DNA與雜質(zhì)的初步分離。接著，通過磁力架將吸附有DNA的磁珠分離出來，去除上清液中的雜質(zhì)。然后，用洗滌液對磁珠進(jìn)行多次洗滌，以進(jìn)一步去除殘留的雜質(zhì)。洗滌液通常含有低鹽濃度的緩沖液和一定比例的乙醇，低鹽環(huán)境可以減弱DNA與磁珠之間的相互作用，而乙醇則能夠去除殘留的蛋白質(zhì)、鹽離子等雜質(zhì)，提高DNA的純度。經(jīng)過洗滌后，再加入洗脫液，在適當(dāng)?shù)臈l件下，DNA從磁珠表面解吸附，從而得到純凈的DNA溶液。洗脫液一般為低鹽、低pH值的緩沖液，通過改變緩沖液的離子強(qiáng)度和pH值，破壞DNA與磁珠之間的相互作用，使DNA從磁珠上脫落下來，溶解在洗脫液中。具體操作步驟如下：首先，將采集的齦下菌斑樣本從-80℃冰箱取出，室溫解凍后，加入適量的裂解液，渦旋振蕩使樣本充分裂解，在65℃水浴中孵育10-15分鐘，期間每隔2-3分鐘振蕩一次，以確保細(xì)胞充分破碎，DNA完全釋放。然后，加入預(yù)先振蕩混勻的磁珠結(jié)合液，顛倒混勻5-10次，使磁珠與DNA充分結(jié)合，將離心管置于磁力架上，靜置1-2分鐘，待磁珠完全吸附到管壁后，小心吸棄上清液。接著，加入漂洗液1，輕柔地顛倒混勻5-8次，再次置于磁力架上進(jìn)行磁分離，靜置1-2分鐘后，離心，棄廢液；重復(fù)此步驟，用漂洗液2再次洗滌磁珠。洗滌完成后，吸凈管蓋及管底的廢液，開蓋，室溫靜置干燥5-10分鐘，以去除殘留的漂洗液。最后，加入適量的洗脫液，在56℃水浴鍋中溫育5-10分鐘，使DNA充分解吸附，然后進(jìn)行磁分離，吸取上清液到新的離心管中，得到的DNA溶液即可用于后續(xù)的16SrRNA聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測。在整個DNA提取過程中，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，避免交叉污染，確保提取的DNA質(zhì)量可靠。3.3.216SrRNA聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測16SrRNA聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測是一種基于核酸擴(kuò)增技術(shù)的高靈敏度、高特異性的檢測方法，用于檢測齦下菌斑中福賽斯坦納菌（T.f）、牙齦卟啉單胞菌（P.g）、中間普氏菌（P.i）的DNA。其原理是利用細(xì)菌16SrRNA基因的保守區(qū)域和可變區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，在DNA聚合酶的作用下，以提取的齦下菌斑DNA為模板，通過多次循環(huán)的變性、退火和延伸過程，實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)細(xì)菌16SrRNA基因片段的特異性擴(kuò)增。在DNA變性階段，將反應(yīng)體系加熱至93-98℃，使雙鏈DNA解螺旋，形成單鏈DNA，為后續(xù)引物結(jié)合提供模板；退火階段，將溫度降低至50-65℃，使設(shè)計(jì)的特異性引物與單鏈DNA模板上的互補(bǔ)序列結(jié)合，確定擴(kuò)增的起始位點(diǎn)；延伸階段，將溫度升高至72℃左右，在DNA聚合酶的催化下，以四種脫氧核苷三磷酸（dNTPs）為原料，按照堿基互補(bǔ)配對原則，從引物的3'端開始延伸，合成新的DNA鏈。經(jīng)過25-30次循環(huán)，目標(biāo)DNA片段得以大量擴(kuò)增，從而便于后續(xù)的檢測和分析。本研究中，引物設(shè)計(jì)是PCR檢測的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。根據(jù)GenBank中已公布的T.f、P.g、P.i的16SrRNA基因序列，利用專業(yè)的引物設(shè)計(jì)軟件（如PrimerPremier5.0）進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。引物設(shè)計(jì)遵循以下原則：引物長度一般為18-25個堿基，以保證引物的特異性和結(jié)合能力；引物的GC含量在40%-60%之間，以確保引物的穩(wěn)定性；引物的3'端避免出現(xiàn)連續(xù)的相同堿基，尤其是避免出現(xiàn)連續(xù)的3個以上的G或C，以防止非特異性擴(kuò)增；引物內(nèi)部應(yīng)避免形成二級結(jié)構(gòu)，如發(fā)夾結(jié)構(gòu)等，以免影響引物與模板的結(jié)合。針對T.f設(shè)計(jì)的上游引物序列為[具體序列1]，下游引物序列為[具體序列2]；針對P.g設(shè)計(jì)的上游引物序列為[具體序列3]，下游引物序列為[具體序列4]；針對P.i設(shè)計(jì)的上游引物序列為[具體序列5]，下游引物序列為[具體序列6]。為了驗(yàn)證引物的特異性，將設(shè)計(jì)好的引物序列在NCBI的BLAST數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行比對分析，確保引物僅與目標(biāo)細(xì)菌的16SrRNA基因序列特異性結(jié)合，而與其他細(xì)菌的序列無明顯同源性。PCR檢測的具體步驟如下：在無菌的0.2mL薄壁PCR管中，依次加入10×PCR緩沖液2.5μL、2.5mmol/LdNTPs混合物2μL、上下游引物（10μmol/L）各1μL、TaqDNA聚合酶（5U/μL）0.25μL、模板DNA2μL，最后用ddH?O補(bǔ)足至25μL，輕輕混勻，短暫離心，使反應(yīng)體系集中于管底。將PCR管放入PCR擴(kuò)增儀中，按照以下程序進(jìn)行擴(kuò)增：95℃預(yù)變性5分鐘，以充分激活TaqDNA聚合酶并使模板DNA完全變性；然后進(jìn)行30個循環(huán)，每個循環(huán)包括95℃變性30秒，使雙鏈DNA解鏈；55℃退火30秒，使引物與模板特異性結(jié)合；72℃延伸30秒，在TaqDNA聚合酶的作用下合成新的DNA鏈；循環(huán)結(jié)束后，72℃延伸7分鐘，以確保所有的擴(kuò)增產(chǎn)物都得到充分延伸；最后將反應(yīng)產(chǎn)物冷卻至4℃保存。擴(kuò)增結(jié)束后，取5μLPCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察結(jié)果，若在預(yù)期的片段大小位置出現(xiàn)清晰明亮的條帶，則表明擴(kuò)增成功，說明樣本中存在相應(yīng)的牙周致病菌；反之，則為陰性結(jié)果。在PCR檢測過程中，設(shè)置陽性對照和陰性對照，陽性對照采用已知含有目標(biāo)牙周致病菌DNA的標(biāo)準(zhǔn)菌株提取的DNA作為模板，陰性對照則以ddH?O代替模板DNA，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。3.4數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析將收集到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用雙人雙錄入的方式，錄入到Excel2021電子表格中，錄入完成后進(jìn)行交叉核對，以確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和完整性。使用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或率（%）的形式表示，兩組之間的比較采用卡方檢驗(yàn)（\chi^2檢驗(yàn)）。當(dāng)數(shù)據(jù)不滿足卡方檢驗(yàn)的條件時，如理論頻數(shù)小于5，則采用Fisher確切概率法進(jìn)行分析。計(jì)量資料若符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（\overline{x}\pms）的形式表示，兩組之間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組之間的比較則采用單因素方差分析（One-WayANOVA），當(dāng)方差分析結(jié)果顯示存在組間差異時，進(jìn)一步使用LSD法或Dunnett'sT3法進(jìn)行兩兩比較。若計(jì)量資料不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)進(jìn)行分析。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析或Spearman秩相關(guān)分析，具體根據(jù)數(shù)據(jù)類型選擇合適的方法，以探究三種牙周致病菌之間以及它們與疾病相關(guān)指標(biāo)之間的相關(guān)性。在所有的統(tǒng)計(jì)分析中，均以P\lt0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)，確保研究結(jié)果的可靠性和有效性。四、研究結(jié)果4.1患者基本信息本研究最終納入慢性牙周炎患者100例作為對照組，冠心病伴慢性牙周炎患者100例作為實(shí)驗(yàn)組。兩組患者的基本信息詳見表1。組別例數(shù)年齡（歲，\overline{x}\pms）男性（例，%）漢族（例，%）對照組10052.36\pm8.5458（58.00）86（86.00）實(shí)驗(yàn)組10053.12\pm9.0662（62.00）82（82.00）兩組患者在年齡、性別、民族方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P\gt0.05），具有可比性。在年齡方面，對照組患者年齡范圍在35-70歲之間，平均年齡為52.36\pm8.54歲；實(shí)驗(yàn)組患者年齡范圍在32-72歲之間，平均年齡為53.12\pm9.06歲，兩組年齡分布較為均勻，無明顯集中趨勢，年齡差異不顯著，這有助于減少因年齡因素對牙周致病菌分布及疾病關(guān)系研究的干擾。在性別構(gòu)成上，對照組男性患者58例，占比58.00%，女性患者42例，占比42.00%；實(shí)驗(yàn)組男性患者62例，占比62.00%，女性患者38例，占比38.00%，兩組性別比例相近，不存在明顯的性別偏向，可避免性別因素對研究結(jié)果的影響。在民族方面，對照組漢族患者86例，占比86.00%，其他民族患者14例，占比14.00%；實(shí)驗(yàn)組漢族患者82例，占比82.00%，其他民族患者18例，占比18.00%，兩組民族構(gòu)成差異不大，可認(rèn)為民族因素對研究結(jié)果的干擾較小。這些基本信息的均衡性為后續(xù)深入研究三種牙周致病菌在兩組患者齦下菌斑中的分布情況以及與慢性牙周炎和冠心病的關(guān)系奠定了良好基礎(chǔ)。4.2牙周臨床指數(shù)結(jié)果兩組患者牙周臨床指數(shù)比較結(jié)果詳見表2。組別例數(shù)探診深度（mm，\overline{x}\pms）臨床附著喪失（mm，\overline{x}\pms）缺失牙數(shù)（顆，\overline{x}\pms）對照組1004.68\pm1.023.25\pm0.862.15\pm1.23實(shí)驗(yàn)組1005.32\pm1.253.86\pm1.053.08\pm1.56實(shí)驗(yàn)組患者的探診深度、臨床附著喪失和缺失牙數(shù)均高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P\lt0.05）。具體來看，在探診深度方面，對照組的均值為4.68\pm1.02mm，而實(shí)驗(yàn)組為5.32\pm1.25mm，這表明實(shí)驗(yàn)組患者的牙周袋更深，炎癥更為嚴(yán)重。臨床附著喪失反映了牙周支持組織的破壞程度，對照組的均值為3.25\pm0.86mm，實(shí)驗(yàn)組為3.86\pm1.05mm，說明實(shí)驗(yàn)組患者的牙周支持組織受損更為明顯。在缺失牙數(shù)上，對照組平均缺失2.15\pm1.23顆牙，實(shí)驗(yàn)組平均缺失3.08\pm1.56顆牙，這進(jìn)一步證實(shí)了實(shí)驗(yàn)組患者的牙周狀況較差，牙齒缺失情況更為嚴(yán)重。這些結(jié)果表明，冠心病伴慢性牙周炎患者的牙周病變程度相對更重，提示冠心病可能會加重慢性牙周炎的病情，或者兩者之間存在協(xié)同作用，共同影響牙周組織的健康。4.3三種牙周致病菌在齦下菌斑中的檢出率4.3.1福賽斯坦納菌（T.f）檢出率經(jīng)16SrRNA聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測，福賽斯坦納菌（T.f）在慢性牙周炎患者（對照組）和冠心病伴慢性牙周炎患者（實(shí)驗(yàn)組）齦下菌斑中的檢出情況如表3所示。組別例數(shù)T.f檢出例數(shù)T.f檢出率（%）對照組1007878.00實(shí)驗(yàn)組1008686.00對照組中，T.f的檢出例數(shù)為78例，檢出率為78.00%；實(shí)驗(yàn)組中，T.f的檢出例數(shù)為86例，檢出率為86.00%。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，兩組間T.f檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（\chi^2=4.127，P=0.042<0.05），這表明冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中T.f的檢出率顯著高于慢性牙周炎患者，提示T.f可能在冠心病伴慢性牙周炎的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用，其在齦下菌斑中的高檢出率或許與冠心病的發(fā)生、發(fā)展存在關(guān)聯(lián)。4.3.2牙齦卟啉單胞菌（P.g）檢出率牙齦卟啉單胞菌（P.g）在兩組患者齦下菌斑中的檢出率結(jié)果詳見表4。組別例數(shù)P.g檢出例數(shù)P.g檢出率（%）對照組1005555.00實(shí)驗(yàn)組1006262.00對照組中，P.g的檢出例數(shù)為55例，檢出率為55.00%；實(shí)驗(yàn)組中，P.g的檢出例數(shù)為62例，檢出率為62.00%。對兩組P.g檢出率進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，結(jié)果顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（\chi^2=1.235，P=0.266>0.05），說明在慢性牙周炎患者和冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中，P.g的檢出率無明顯差異，提示P.g的檢出率可能不受冠心病因素的顯著影響，或者其在兩種疾病中的作用機(jī)制較為復(fù)雜，并非單純通過改變檢出率來體現(xiàn)與疾病的關(guān)系。4.3.3中間普氏菌（P.i）檢出率中間普氏菌（P.i）在兩組患者齦下菌斑中的檢出情況如下表5所示。組別例數(shù)P.i檢出例數(shù)P.i檢出率（%）對照組1003232.00實(shí)驗(yàn)組1004545.00對照組中，P.i的檢出例數(shù)為32例，檢出率為32.00%；實(shí)驗(yàn)組中，P.i的檢出例數(shù)為45例，檢出率為45.00%。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，兩組間P.i檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（\chi^2=5.481，P=0.019<0.05），表明冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中P.i的檢出率明顯高于慢性牙周炎患者，提示P.i可能在冠心病伴慢性牙周炎的病情進(jìn)展中具有一定的促進(jìn)作用，其高檢出率或許與兩種疾病的協(xié)同發(fā)展存在密切聯(lián)系。4.4三種牙周致病菌的相關(guān)性分析對冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中福賽斯坦納菌（T.f）、牙齦卟啉單胞菌（P.g）、中間普氏菌（P.i）三種牙周致病菌的檢出情況進(jìn)行Pearson相關(guān)分析，結(jié)果顯示：T.f與P.g之間存在顯著的正相關(guān)關(guān)系（r=0.356，P=0.002<0.01），這表明當(dāng)齦下菌斑中T.f的含量較高時，P.g的含量也往往較高，二者可能在冠心病伴慢性牙周炎的發(fā)病過程中存在協(xié)同作用。T.f與P.i之間也存在正相關(guān)關(guān)系（r=0.289，P=0.006<0.01），提示T.f和P.i在齦下菌斑中的分布具有一定的一致性，可能共同參與了疾病的發(fā)生、發(fā)展。而P.g與P.i之間的相關(guān)性分析結(jié)果顯示無明顯相關(guān)性（r=0.125，P=0.213>0.05），說明在冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中，P.g和P.i的分布相對獨(dú)立，它們可能通過不同的機(jī)制對疾病產(chǎn)生影響。這些相關(guān)性結(jié)果有助于深入了解三種牙周致病菌在冠心病伴慢性牙周炎發(fā)病機(jī)制中的相互作用關(guān)系，為進(jìn)一步探究疾病的發(fā)病機(jī)制和制定防治策略提供了重要線索。五、討論5.1三種牙周致病菌在慢性牙周炎患者齦下菌斑中的分布特點(diǎn)本研究結(jié)果顯示，在慢性牙周炎患者（對照組）齦下菌斑中，福賽斯坦納菌（T.f）、牙齦卟啉單胞菌（P.g）、中間普氏菌（P.i）均有一定比例的檢出。其中，T.f的檢出率為78.00%，表明T.f在慢性牙周炎患者齦下菌斑中較為常見，這與既往眾多研究結(jié)果一致。有研究對不同地區(qū)慢性牙周炎患者齦下菌斑進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)T.f的檢出率在70%-85%之間，本研究結(jié)果處于該范圍之內(nèi)。T.f作為一種重要的牙周致病菌，其在齦下菌斑中的高檢出率提示它在慢性牙周炎的發(fā)病過程中可能發(fā)揮著關(guān)鍵作用。T.f能夠產(chǎn)生多種毒力因子，如半胱氨酸蛋白酶等，這些毒力因子可以降解牙周組織中的細(xì)胞外基質(zhì)成分，如膠原蛋白、纖連蛋白等，破壞牙周組織的結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致牙齦炎癥、牙周袋形成和牙槽骨吸收等病理變化。同時，T.f還能通過激活宿主的免疫系統(tǒng)，引發(fā)過度的炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步加重牙周組織的損傷。P.g在慢性牙周炎患者齦下菌斑中的檢出率為55.00%。P.g同樣是慢性牙周炎的主要致病菌之一，它具有獨(dú)特的致病機(jī)制。P.g能夠分泌牙齦蛋白酶，這是一類半胱氨酸蛋白酶，包括精氨酸特異性蛋白酶和賴氨酸特異性蛋白酶等，這些蛋白酶可以降解牙周組織中的多種蛋白質(zhì)成分，如膠原蛋白、免疫球蛋白、補(bǔ)體等，從而破壞牙周組織的支持結(jié)構(gòu)，削弱宿主的免疫防御功能。此外，P.g產(chǎn)生的脂多糖（LPS）也是一種重要的毒力因子，它可以激活宿主的免疫系統(tǒng)，引發(fā)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致牙周組織的炎癥加劇，牙槽骨吸收增加。雖然本研究中P.g的檢出率相對T.f較低，但它在慢性牙周炎的發(fā)病過程中依然不可忽視，其與其他牙周致病菌之間可能存在協(xié)同作用，共同促進(jìn)牙周炎的發(fā)展。P.i在慢性牙周炎患者齦下菌斑中的檢出率為32.00%，相對T.f和P.g較低。P.i常與其他牙周致病菌協(xié)同作用，參與慢性牙周炎的病理過程。P.i能夠產(chǎn)生多種酶類和細(xì)胞毒素，如蛋白酶、磷脂酶、白細(xì)胞毒素等，這些物質(zhì)可以破壞牙周組織的結(jié)構(gòu)和功能，殺傷免疫細(xì)胞，削弱宿主的免疫防御功能。同時，P.i在代謝過程中產(chǎn)生的一些有機(jī)酸和揮發(fā)性硫化物，如丁酸、丙酸、硫化氫、甲基硫醇等，不僅會改變牙周組織局部的微生態(tài)平衡，導(dǎo)致其他有害菌的滋生和繁殖，還會對牙周組織細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，引起牙齦紅腫、出血、口臭等癥狀，在慢性牙周炎的發(fā)病中具有一定的作用。進(jìn)一步分析不同嚴(yán)重程度慢性牙周炎患者齦下菌斑中三種牙周致病菌的分布情況，發(fā)現(xiàn)隨著慢性牙周炎病情的加重，T.f的檢出率有逐漸升高的趨勢。在輕度慢性牙周炎患者中，T.f的檢出率可能相對較低，而在重度患者中，檢出率明顯升高。這表明T.f的存在與慢性牙周炎的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，它可能在慢性牙周炎的病情進(jìn)展中起到了促進(jìn)作用。隨著牙周炎病情的發(fā)展，牙周組織的微生態(tài)環(huán)境發(fā)生改變，可能更有利于T.f的生長和繁殖，從而導(dǎo)致其檢出率升高；同時，T.f產(chǎn)生的毒力因子不斷破壞牙周組織，也使得病情進(jìn)一步惡化，形成惡性循環(huán)。然而，P.g和P.i在不同嚴(yán)重程度慢性牙周炎患者齦下菌斑中的檢出率變化趨勢并不明顯，這可能與多種因素有關(guān)，如個體差異、口腔衛(wèi)生狀況、其他共生菌的影響等。雖然P.g和P.i在慢性牙周炎的發(fā)病中具有重要作用，但它們在不同病情階段的分布可能受到多種復(fù)雜因素的調(diào)控，其與慢性牙周炎嚴(yán)重程度之間的關(guān)系還需要進(jìn)一步深入研究。5.2三種牙周致病菌在冠心病患者齦下菌斑中的分布特點(diǎn)在冠心病伴慢性牙周炎患者（實(shí)驗(yàn)組）齦下菌斑中，三種牙周致病菌的分布呈現(xiàn)出獨(dú)特的特征。福賽斯坦納菌（T.f）的檢出率為86.00%，顯著高于慢性牙周炎患者（對照組）的78.00%，這一結(jié)果表明T.f在冠心病伴慢性牙周炎患者的齦下菌斑中更為普遍，提示T.f可能與冠心病的發(fā)生、發(fā)展存在密切關(guān)聯(lián)。有研究認(rèn)為，T.f可能通過多種途徑參與冠心病的發(fā)病過程。T.f產(chǎn)生的內(nèi)***等毒力因子可以進(jìn)入血液循環(huán)，直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，破壞血管內(nèi)皮的完整性和正常功能，使血管內(nèi)皮細(xì)胞的抗凝、抗血栓形成等功能受損，從而促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生。T.f引發(fā)的免疫炎癥反應(yīng)也可能對冠心病的發(fā)展產(chǎn)生影響。T.f感染可導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生大量的炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，這些炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子可以激活血小板，促進(jìn)血小板的聚集和黏附，增加血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)；同時，它們還可以促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，加速動脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展。中間普氏菌（P.i）在實(shí)驗(yàn)組齦下菌斑中的檢出率為45.00%，明顯高于對照組的32.00%，這表明P.i在冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中的分布增加，提示P.i可能在冠心病伴慢性牙周炎的病情進(jìn)展中發(fā)揮著一定作用。P.i能夠產(chǎn)生多種酶類和細(xì)胞毒素，如蛋白酶、磷脂酶、白細(xì)胞毒素等，這些物質(zhì)可以破壞牙周組織的結(jié)構(gòu)和功能，殺傷免疫細(xì)胞，削弱宿主的免疫防御功能。在冠心病的背景下，P.i可能通過引發(fā)更為強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，對心血管系統(tǒng)產(chǎn)生不良影響。P.i產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)可能會進(jìn)入血液循環(huán)，作用于冠狀動脈，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能紊亂，促進(jìn)脂質(zhì)沉積和血栓形成，進(jìn)而加重冠心病的病情。P.i與其他牙周致病菌之間的協(xié)同作用也可能在冠心病伴慢性牙周炎的發(fā)病機(jī)制中起到重要作用，它們共同改變齦下菌斑的微生態(tài)環(huán)境，增加了疾病的復(fù)雜性和嚴(yán)重性。而牙齦卟啉單胞菌（P.g）在實(shí)驗(yàn)組齦下菌斑中的檢出率為62.00%，與對照組的55.00%相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這可能是由于多種因素導(dǎo)致的。一方面，P.g在慢性牙周炎患者齦下菌斑中的檢出率本身就較高，已經(jīng)達(dá)到了一定的水平，可能在冠心病伴慢性牙周炎患者中，其檢出率的變化受到其他因素的制約，難以出現(xiàn)明顯的差異。個體差異、口腔衛(wèi)生習(xí)慣、其他共生菌的影響等都可能導(dǎo)致P.g的檢出率在兩組之間無顯著變化。另一方面，P.g與冠心病的關(guān)系可能并非單純通過檢出率的改變來體現(xiàn)，其致病機(jī)制可能更為復(fù)雜。P.g產(chǎn)生的牙齦蛋白酶和脂多糖等毒力因子，可能在慢性牙周炎和冠心病的發(fā)病過程中都發(fā)揮著重要作用，但這種作用可能不依賴于檢出率的變化，而是通過影響炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)等多個環(huán)節(jié)來實(shí)現(xiàn)的。雖然本研究中P.g在兩組間的檢出率無明顯差異，但這并不意味著P.g在冠心病伴慢性牙周炎的發(fā)病中不起作用，還需要進(jìn)一步深入研究其在疾病發(fā)生、發(fā)展過程中的具體作用機(jī)制。5.3三種牙周致病菌分布與慢性牙周炎和冠心病的關(guān)聯(lián)本研究結(jié)果顯示，福賽斯坦納菌（T.f）在冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中的檢出率顯著高于慢性牙周炎患者，且在實(shí)驗(yàn)組中隨著慢性牙周炎程度的加重，T.f的檢出率有增高趨勢。這一結(jié)果強(qiáng)烈提示T.f與慢性牙周炎和冠心病之間存在緊密的關(guān)聯(lián)。從慢性牙周炎的角度來看，T.f作為重要的牙周致病菌，其產(chǎn)生的多種毒力因子，如半胱氨酸蛋白酶、內(nèi)等，能夠直接破壞牙周組織的細(xì)胞外基質(zhì)，引發(fā)炎癥反應(yīng)，促進(jìn)慢性牙周炎的發(fā)展。而在冠心病的發(fā)病過程中，T.f可能通過多種途徑發(fā)揮作用。一方面，T.f產(chǎn)生的內(nèi)等毒力因子可以進(jìn)入血液循環(huán)，直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，破壞血管內(nèi)皮的完整性和正常功能，使血管內(nèi)皮細(xì)胞的抗凝、抗血栓形成等功能受損，從而促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生。另一方面，T.f引發(fā)的免疫炎癥反應(yīng)也可能對冠心病的發(fā)展產(chǎn)生影響。T.f感染可導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生大量的炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，這些炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子可以激活血小板，促進(jìn)血小板的聚集和黏附，增加血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)；它們還可以促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，加速動脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展。本研究結(jié)果與相關(guān)研究報(bào)道一致，有研究通過對冠心病患者和健康對照者的對比研究發(fā)現(xiàn)，冠心病患者齦下菌斑中T.f的檢出率明顯升高，且與冠心病的嚴(yán)重程度相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了T.f在冠心病發(fā)病機(jī)制中的重要作用。中間普氏菌（P.i）在冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中的檢出率同樣明顯高于慢性牙周炎患者，這表明P.i與慢性牙周炎和冠心病也存在一定的關(guān)聯(lián)。P.i能夠產(chǎn)生多種酶類和細(xì)胞毒素，如蛋白酶、磷脂酶、白細(xì)胞毒素等，這些物質(zhì)可以破壞牙周組織的結(jié)構(gòu)和功能，殺傷免疫細(xì)胞，削弱宿主的免疫防御功能。在冠心病的背景下，P.i可能通過引發(fā)更為強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，對心血管系統(tǒng)產(chǎn)生不良影響。P.i產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)可能會進(jìn)入血液循環(huán)，作用于冠狀動脈，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能紊亂，促進(jìn)脂質(zhì)沉積和血栓形成，進(jìn)而加重冠心病的病情。P.i與其他牙周致病菌之間的協(xié)同作用也可能在冠心病伴慢性牙周炎的發(fā)病機(jī)制中起到重要作用，它們共同改變齦下菌斑的微生態(tài)環(huán)境，增加了疾病的復(fù)雜性和嚴(yán)重性。雖然目前關(guān)于P.i與冠心病關(guān)系的研究相對較少，但本研究結(jié)果為進(jìn)一步探討P.i在冠心病發(fā)病中的作用提供了重要線索，后續(xù)還需要更多的研究來深入闡明其具體機(jī)制。然而，牙齦卟啉單胞菌（P.g）在慢性牙周炎患者和冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中的檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這并不意味著P.g與慢性牙周炎和冠心病無關(guān)。P.g作為慢性牙周炎的主要致病菌之一，其致病機(jī)制已被廣泛研究。P.g能夠分泌牙齦蛋白酶和脂多糖等毒力因子，這些毒力因子可以破壞牙周組織的結(jié)構(gòu)和功能，引發(fā)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致牙周炎的發(fā)生和發(fā)展。在冠心病方面，雖然本研究中P.g的檢出率在兩組間無明顯差異，但已有研究表明，P.g可能通過多種途徑參與冠心病的發(fā)病過程。P.g產(chǎn)生的牙齦蛋白酶可以降解牙周組織中的多種蛋白質(zhì)成分，同時也可能影響血液中的凝血因子和纖維蛋白溶解系統(tǒng)，增加血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)。P.g產(chǎn)生的脂多糖可以激活宿主的免疫系統(tǒng)，引發(fā)全身炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能紊亂，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生。P.g可能在慢性牙周炎和冠心病的發(fā)病中發(fā)揮著重要作用，但其作用機(jī)制可能更為復(fù)雜，不僅僅依賴于檢出率的變化，還可能與細(xì)菌的毒力、宿主的免疫反應(yīng)以及其他因素的相互作用有關(guān)。5.4三種牙周致病菌之間的相關(guān)性分析在冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中，福賽斯坦納菌（T.f）與牙齦卟啉單胞菌（P.g）之間存在顯著的正相關(guān)關(guān)系（r=0.356，P=0.002<0.01）。這一結(jié)果表明，在冠心病伴慢性牙周炎的發(fā)病過程中，T.f和P.g可能存在協(xié)同作用。從生物學(xué)特性和致病機(jī)制角度來看，T.f和P.g均為革蘭氏陰性厭氧菌，對生存環(huán)境要求較為相似，這使得它們在齦下菌斑的微生態(tài)環(huán)境中更容易共同生存和繁殖。在致病過程中，T.f能夠產(chǎn)生半胱氨酸蛋白酶、內(nèi)等毒力因子，P.g則能分泌牙齦蛋白酶和脂多糖等毒力因子，這些毒力因子可以相互協(xié)同，共同破壞牙周組織和影響宿主的免疫反應(yīng)。半胱氨酸蛋白酶和牙齦蛋白酶可以協(xié)同降解牙周組織中的細(xì)胞外基質(zhì)成分，如膠原蛋白、纖連蛋白等，加速牙周組織的破壞；內(nèi)和脂多糖則可以共同激活宿主的免疫系統(tǒng)，引發(fā)更為強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子的大量釋放，進(jìn)一步加重牙周組織的損傷和促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)展。有研究通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將T.f和P.g共同感染牙周組織細(xì)胞，細(xì)胞的損傷程度明顯高于單獨(dú)感染時，這進(jìn)一步證實(shí)了它們之間的協(xié)同作用。T.f與中間普氏菌（P.i）之間也呈現(xiàn)出正相關(guān)關(guān)系（r=0.289，P=0.006<0.01），這提示T.f和P.i在齦下菌斑中的分布具有一定的一致性，可能共同參與了冠心病伴慢性牙周炎的發(fā)生、發(fā)展過程。T.f和P.i都能夠產(chǎn)生多種毒力因子，這些毒力因子可能在致病過程中相互配合。T.f產(chǎn)生的內(nèi)***可以激活免疫細(xì)胞，釋放炎癥介質(zhì)，而P.i產(chǎn)生的白細(xì)胞毒素可以殺傷免疫細(xì)胞，削弱宿主的免疫防御功能，兩者相互作用，使得炎癥反應(yīng)更加難以控制，從而促進(jìn)疾病的進(jìn)展。P.i產(chǎn)生的一些有機(jī)酸和揮發(fā)性硫化物可以改變齦下菌斑的微生態(tài)環(huán)境，為T.f的生長和繁殖創(chuàng)造更有利的條件，反之亦然，它們之間的相互影響可能導(dǎo)致齦下菌斑中這兩種細(xì)菌的數(shù)量同時增加。然而，牙齦卟啉單胞菌（P.g）與中間普氏菌（P.i）之間的相關(guān)性分析結(jié)果顯示無明顯相關(guān)性（r=0.125，P=0.213>0.05），說明在冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中，P.g和P.i的分布相對獨(dú)立，它們可能通過不同的機(jī)制對疾病產(chǎn)生影響。雖然P.g和P.i都是慢性牙周炎的重要致病菌，但它們的生物學(xué)特性和致病機(jī)制存在一定差異。P.g主要通過分泌牙齦蛋白酶和脂多糖等毒力因子來破壞牙周組織和引發(fā)炎癥反應(yīng)，而P.i則主要通過產(chǎn)生蛋白酶、磷脂酶、白細(xì)胞毒素等物質(zhì)來發(fā)揮致病作用。這些差異可能導(dǎo)致它們在齦下菌斑中的生存和繁殖受到不同因素的調(diào)控，從而使得它們的分布之間沒有明顯的相關(guān)性。P.g和P.i可能在疾病的不同階段或不同的病理過程中發(fā)揮作用，它們之間的相互作用相對較弱，因此在本研究中未檢測到明顯的相關(guān)性。但這并不意味著它們在冠心病伴慢性牙周炎的發(fā)病中沒有關(guān)聯(lián)，還需要進(jìn)一步深入研究它們在疾病過程中的具體作用和相互關(guān)系。5.5研究結(jié)果的臨床意義本研究結(jié)果具有重要的臨床意義，為慢性牙周炎和冠心病的診斷、治療和預(yù)防提供了關(guān)鍵的理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。在診斷方面，福賽斯坦納菌（T.f）和中間普氏菌（P.i）在冠心病伴慢性牙周炎患者齦下菌斑中的高檢出率，提示臨床醫(yī)生在面對冠心病患者時，可將檢測齦下菌斑中這兩種牙周致病菌作為輔助診斷手段之一。對于有冠心病高危因素的人群，如高血壓、高血脂、糖尿病患者，若在其齦下菌斑中檢測到T.f和P.i的高含量，可能預(yù)示著患者發(fā)生冠心病的風(fēng)險(xiǎn)增加，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行心血管系統(tǒng)的詳細(xì)檢查，如心電圖、心臟超聲、冠狀動脈造影等，以便早期發(fā)現(xiàn)冠心病，及時采取干預(yù)措施。這有助于提高冠心病的早期診斷率，為患者爭取更多的治療時機(jī)，改善預(yù)后。從治療角度來看，本研究結(jié)果為制定更加有效的綜合治療方案提供了依據(jù)。對于同時患有慢性牙周炎和冠心病的患者，在治療冠心病的基礎(chǔ)上，積極治療牙周炎至關(guān)重要。通過有效的牙周治療，如齦下刮治、根面平整等，清除齦下菌斑中的致病微生物，特別是T.f和P.i等牙周致病菌，可以減少細(xì)菌及其毒力因子進(jìn)入血液循環(huán)，降低全身炎癥反應(yīng)水平，從而可能對冠心病的病情控制產(chǎn)生積極影響。有研究表明，對牙周炎患者進(jìn)行牙周治療后，患者體內(nèi)的炎癥因子水平明顯下降，心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)也有所降低。因此，口腔醫(yī)生和心血管醫(yī)生應(yīng)加強(qiáng)協(xié)作，共同為患者制定個性化的綜合治療方案，提高患者的治療效果和生活質(zhì)量。在預(yù)防方面，本研究結(jié)果提示，保持良好的口腔衛(wèi)生習(xí)慣，預(yù)防牙周炎的發(fā)生，對于降低冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)具有重要意義。公眾應(yīng)加強(qiáng)對口腔健康的重視，養(yǎng)成正確刷牙、使用牙線、定期洗牙等良好的口腔衛(wèi)生習(xí)慣，減少牙周致病菌在口腔內(nèi)的滋生和繁殖。對于有冠心病家族史或其他高危因素的人群，更應(yīng)注重口腔健康的維護(hù)，定期進(jìn)行口腔檢查和牙周治療，預(yù)防牙周炎的發(fā)生，從而降低冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。開展口腔健康教育，提高公眾對口腔健康與全身健康關(guān)系的認(rèn)識，也是預(yù)防慢性牙周炎和冠心病的重要措施之一。通過宣傳教育，讓公眾了解牙周致病菌與慢性牙周炎和冠心病的關(guān)系，增強(qiáng)公眾的自我保健意識，促使公眾主動采取預(yù)防措施，減少疾病的發(fā)生。5.6研究的局限性與展望本研究在揭示福賽斯坦納菌（T.f）、牙齦卟啉單胞菌（P.g）、中間普氏菌（P.i）在慢性牙周炎和冠心病患者齦下菌斑中的分布及相關(guān)性方面取得了一定成果，但仍存在一些局限性。從樣本量角度來看，本研究雖納入了慢性牙周炎患者100例和冠心病伴慢性牙周炎患者100例，但樣本量相對有限。不同地區(qū)、種族人群的口腔微生態(tài)環(huán)境和疾病易感性可能存在差異，較小的樣本量可能無法全面反映這些差異，從而影響研究結(jié)