2026年生物技術(shù)實驗題目：分子生物學(xué)實驗技術(shù)與操作考核題一、選擇題（每題2分，共20題）1題：PCR技術(shù)的核心原理是什么？A.逆轉(zhuǎn)錄B.基因重組C.DNA擴(kuò)增D.基因測序2題：下列哪種酶主要用于DNA連接反應(yīng)？A.DNaseIB.RNA聚合酶C.DNA連接酶D.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)酶3題：凝膠電泳中，DNA片段的遷移速率主要取決于什么？A.電場強(qiáng)度B.DNA片段大小C.凝膠濃度D.DNA序列4題：RNA干擾（RNAi）技術(shù)主要通過抑制哪種分子來發(fā)揮作用？A.mRNAB.tRNAC.rRNAD.DNA5題：基因克隆中最常用的載體是？A.病毒B.質(zhì)粒C.細(xì)菌人工染色體（BAC）D.YAC6題：Westernblotting實驗中，首先需要用哪種抗體檢測目標(biāo)蛋白？A.一抗B.二抗C.三抗D.辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記抗體7題：CRISPR-Cas9技術(shù)的核心元件是什么？A.gRNAB.Cas9蛋白C.基因編輯器D.基因靶向序列8題：逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）主要用于檢測什么？A.基因表達(dá)B.DNA序列C.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)D.病毒感染9題：熒光定量PCR（qPCR）中，SYBRGreenI染料的作用是？A.擴(kuò)增DNAB.檢測熒光信號C.引物設(shè)計D.調(diào)節(jié)退火溫度10題：基因芯片技術(shù)主要用于？A.DNA測序B.基因表達(dá)分析C.基因克隆D.蛋白質(zhì)組學(xué)二、填空題（每空1分，共10空）1.PCR反應(yīng)體系中，通常需要加入______、______、______和______。2.DNA凝膠電泳中，溴化乙錠（EthidiumBromide）的作用是______。3.基因編輯技術(shù)CRISPR-Cas9中，gRNA的長度通常為______個核苷酸。4.Westernblotting實驗中，蛋白質(zhì)印跡的膜通常用______封閉。5.RT-PCR實驗中，逆轉(zhuǎn)錄酶的作用是將______轉(zhuǎn)錄為cDNA。6.基因芯片技術(shù)通過______檢測基因表達(dá)水平。7.熒光定量PCR中，融解曲線分析用于______。8.基因克隆過程中，載體質(zhì)粒通常需要攜帶______和______。9.RNA干擾（RNAi）的分子機(jī)制主要通過______和______實現(xiàn)。10.基因測序中，Sanger法的主要原理是______。三、簡答題（每題5分，共6題）1題：簡述PCR技術(shù)的步驟及其關(guān)鍵條件。2題：解釋凝膠電泳在分子生物學(xué)實驗中的作用及原理。3題：比較DNA測序的Sanger法和二代測序技術(shù)的優(yōu)缺點。4題：簡述CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域。5題：解釋W(xué)esternblotting實驗的步驟及其原理。6題：簡述RNA干擾（RNAi）的分子機(jī)制及其應(yīng)用。四、實驗設(shè)計題（每題10分，共2題）1題：設(shè)計一個實驗方案，用于檢測某基因在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)水平。實驗需要包括實驗?zāi)康?、原理、步驟、試劑及預(yù)期結(jié)果。2題：設(shè)計一個實驗方案，利用CRISPR-Cas9技術(shù)敲除某種病原菌的關(guān)鍵毒力基因。實驗需要包括實驗?zāi)康摹⒃?、步驟、試劑及預(yù)期結(jié)果。五、計算題（每題5分，共2題）1題：某PCR實驗需要擴(kuò)增一個1.5kb的DNA片段，引物退火溫度為55℃，PCR循環(huán)數(shù)為30次。計算理論上該片段的產(chǎn)量。2題：某Westernblotting實驗中，已知目標(biāo)蛋白的分子量為50kDa，電泳時凝膠孔徑為0.8mm，電場強(qiáng)度為5V/cm。計算該蛋白的遷移時間。答案與解析一、選擇題答案與解析1.C（PCR的核心原理是DNA擴(kuò)增，通過變性、退火、延伸三個步驟實現(xiàn)）。2.C（DNA連接酶用于將DNA片段連接在一起，是基因克隆的關(guān)鍵酶）。3.B（凝膠電泳中，DNA片段大小是決定遷移速率的主要因素，片段越大遷移越慢）。4.A（RNAi通過降解mRNA抑制基因表達(dá)）。5.B（質(zhì)粒是基因克隆最常用的載體，因其易于操作和復(fù)制）。6.A（Westernblotting首先用一抗特異性結(jié)合目標(biāo)蛋白）。7.A（gRNA是CRISPR-Cas9系統(tǒng)的關(guān)鍵元件，負(fù)責(zé)靶向基因序列）。8.A（RT-PCR用于檢測mRNA表達(dá)水平，常用于基因表達(dá)研究）。9.B（SYBRGreenI染料通過結(jié)合雙鏈DNA發(fā)出熒光，用于實時檢測擴(kuò)增信號）。10.B（基因芯片技術(shù)通過微陣列檢測大量基因的表達(dá)水平）。二、填空題答案與解析1.TaqDNA聚合酶、dNTPs、引物、模板DNA2.染色DNA片段以便在紫外燈下觀察3.204.封閉劑（如牛血清白蛋白或脫脂奶粉）5.mRNA6.熒光探針7.鑒別PCR產(chǎn)物特異性8.抗原決定簇（Antigenicdeterminant）和復(fù)制起始點（Originofreplication）9.mRNA降解和翻譯抑制10.化學(xué)合成法測序三、簡答題答案與解析1題：PCR步驟包括變性（95℃）、退火（55℃）、延伸（72℃），關(guān)鍵條件包括Taq酶、dNTPs、引物、模板DNA和緩沖液。2題：凝膠電泳通過電場使帶電分子在凝膠中遷移，按大小分離DNA或蛋白質(zhì)，原理基于分子大小與電場力的關(guān)系。3題：Sanger法基于鏈終止子測序，精度高但通量低；二代測序通過并行測序提高通量，但準(zhǔn)確率稍低。4題：CRISPR-Cas9用于基因敲除、基因治療、疾病模型構(gòu)建等。5題：Westernblotting步驟包括電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、一抗孵育、二抗孵育、化學(xué)發(fā)光檢測。6題：RNAi通過小RNA（siRNA）降解mRNA或抑制翻譯，用于基因功能研究或藥物開發(fā)。四、實驗設(shè)計題答案與解析1題：-目的：檢測肝癌細(xì)胞中某基因的表達(dá)水平。-原理：RT-PCR擴(kuò)增目標(biāo)基因片段，qPCR定量表達(dá)水平。-步驟：①提取總RNA；②逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；③qPCR擴(kuò)增目標(biāo)基因；④用內(nèi)參基因（如GAPDH）校正。-試劑：TRIzol、逆轉(zhuǎn)錄酶、qPCR試劑盒、引物。-預(yù)期結(jié)果：肝癌細(xì)胞中目標(biāo)基因表達(dá)量顯著高于正常細(xì)胞。2題：-目的：敲除病原菌毒力基因。-原理：CRISPR-Cas9通過gRNA靶向切割基因，導(dǎo)致基因失活。-步驟：①設(shè)計gRNA靶向毒力基因；②構(gòu)建CRISPR-Cas9載體；③轉(zhuǎn)化病原菌；④篩選突變菌株。-試劑：gRNA、Cas9表達(dá)載體、感受態(tài)細(xì)胞。-預(yù)期結(jié)果：病原菌毒力減弱。五、計算題答案與解析1題：理論產(chǎn)量與循環(huán)數(shù)