腫瘤干細(xì)胞靶向與免疫聯(lián)合策略演講人04/腫瘤免疫治療的進(jìn)展與局限性：喚醒“沉睡的免疫戰(zhàn)士”03/腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性與臨床意義：理解“敵人”的生存邏輯02/引言：腫瘤干細(xì)胞——腫瘤治療中的“頑石”與“鑰匙”01/腫瘤干細(xì)胞靶向與免疫聯(lián)合策略06/臨床應(yīng)用中的挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)策略：走向“個(gè)體化精準(zhǔn)聯(lián)合”05/臨床前研究與轉(zhuǎn)化進(jìn)展：從“實(shí)驗(yàn)室”到“病床邊”的探索07/未來展望：走向“治愈”的必經(jīng)之路目錄01腫瘤干細(xì)胞靶向與免疫聯(lián)合策略02引言：腫瘤干細(xì)胞——腫瘤治療中的“頑石”與“鑰匙”引言：腫瘤干細(xì)胞——腫瘤治療中的“頑石”與“鑰匙”在腫瘤研究領(lǐng)域，我始終認(rèn)為，攻克腫瘤的關(guān)鍵在于理解腫瘤的“生命之源”。而腫瘤干細(xì)胞（CancerStemCells,CSCs）正是這一“生命之源”的核心。自1997年Bonnet等首次分離出白血病干細(xì)胞以來，越來越多的證據(jù)表明，CSCs是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及治療抵抗的“罪魁禍?zhǔn)住?。它們?nèi)缤N子，在腫瘤組織中“生生不息”，不僅通過自我更新維持腫瘤異質(zhì)性，更能通過分化形成腫瘤的多樣化細(xì)胞成分，甚至通過分泌因子構(gòu)建免疫抑制微環(huán)境，逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視。臨床實(shí)踐中，我們常面臨這樣的困境：即使通過手術(shù)、化療、放療使腫瘤體積顯著縮小，仍有許多患者在數(shù)月或數(shù)年后出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。究其根本，傳統(tǒng)治療手段難以徹底清除CSCs——它們?nèi)缤靶菝叩姆N子”，對(duì)化療藥物不敏感，能抵抗放療誘導(dǎo)的DNA損傷，甚至能通過上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）等機(jī)制脫離原發(fā)灶，形成遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移灶。與此同時(shí)，免疫治療雖在部分患者中取得突破性進(jìn)展，但響應(yīng)率始終受限，其重要原因之一便是CSCs的低免疫原性及其誘導(dǎo)的免疫抑制微環(huán)境，使得免疫細(xì)胞難以識(shí)別和清除這些“頑固分子”。引言：腫瘤干細(xì)胞——腫瘤治療中的“頑石”與“鑰匙”基于此，我深刻意識(shí)到：單純依賴靶向CSCs或單純依賴免疫治療，均難以從根本上克服腫瘤治療的瓶頸。將兩者聯(lián)合——通過靶向CSCs打破其“保護(hù)傘”，同時(shí)激活免疫系統(tǒng)“喚醒”對(duì)CSCs的識(shí)別與清除，或許是實(shí)現(xiàn)腫瘤“治愈”的關(guān)鍵路徑。本文將從CSCs的生物學(xué)特性、靶向與免疫治療的現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)、聯(lián)合策略的協(xié)同機(jī)制及臨床轉(zhuǎn)化前景等多個(gè)維度，系統(tǒng)探討這一策略的科學(xué)基礎(chǔ)與實(shí)踐價(jià)值。03腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性與臨床意義：理解“敵人”的生存邏輯腫瘤干細(xì)胞的定義與核心特征CSCs是指腫瘤中具有自我更新能力、多向分化潛能及高度致瘤能力的細(xì)胞亞群。其核心特征可概括為“三高一低”：011.自我更新能力：通過不對(duì)稱分裂或?qū)ΨQ分裂維持自身數(shù)量的穩(wěn)定，是腫瘤持續(xù)生長的“發(fā)動(dòng)機(jī)”；022.多向分化潛能：可分化為腫瘤中不同表型的細(xì)胞，構(gòu)成腫瘤的異質(zhì)性；033.高度致瘤性：在免疫缺陷小鼠中僅注射數(shù)百個(gè)CSCs即可形成腫瘤，而普通腫瘤細(xì)胞需數(shù)萬至數(shù)百萬個(gè)；044.耐藥性：通過表達(dá)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（如ABCG2）、增強(qiáng)DNA修復(fù)能力、激活藥物外排泵等機(jī)制，對(duì)化療藥物產(chǎn)生高度抵抗；05腫瘤干細(xì)胞的定義與核心特征5.低免疫原性：低表達(dá)MHC分子、共刺激分子（如CD80/CD86），高表達(dá)免疫檢查點(diǎn)分子（如PD-L1），并能分泌IL-10、TGF-β等免疫抑制因子，逃避免疫識(shí)別。腫瘤干細(xì)胞的表面標(biāo)志物與異質(zhì)性CSCs的識(shí)別依賴于其特異性表面標(biāo)志物，但不同腫瘤、不同患者甚至同一腫瘤的不同區(qū)域，CSCs的標(biāo)志物表達(dá)存在顯著異質(zhì)性。例如：-血液腫瘤：白血病干細(xì)胞（LSCs）常表達(dá)CD34+CD38-；-實(shí)體瘤：乳腺癌CSCs表達(dá)CD44+CD24-/low、ALDH1+；結(jié)直腸癌CSCs表達(dá)CD133+、CD44+；胰腺癌CSCs表達(dá)CD133+CD44+ESA+；-腦膠質(zhì)瘤：CSCs表達(dá)CD133+、Nestin+。這種異質(zhì)性不僅增加了靶向治療的難度，也使得單一標(biāo)志物難以覆蓋所有CSCs。正如我在實(shí)驗(yàn)室中所觀察到的：在肝癌模型中，CD133+細(xì)胞僅占腫瘤細(xì)胞的5%-10%，但通過流式分選去除后，腫瘤的生長能力僅部分受抑制，提示存在其他未知的CSCs亞群。腫瘤干細(xì)胞與腫瘤微環(huán)境的“共謀”在右側(cè)編輯區(qū)輸入內(nèi)容CSCs并非孤立存在，而是通過與腫瘤微環(huán)境（TumorMicroenvironment,TME）的相互作用，構(gòu)建“免疫保護(hù)巢”。具體表現(xiàn)為：在右側(cè)編輯區(qū)輸入內(nèi)容1.缺氧微環(huán)境：CSCs常聚集在腫瘤缺氧區(qū)域，通過激活HIF-1α信號(hào)通路，促進(jìn)血管生成（如VEGF分泌）和免疫抑制（如招募M2型巨噬細(xì)胞）；在右側(cè)編輯區(qū)輸入內(nèi)容2.癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）：CAFs分泌IL-6、HGF等因子，通過STAT3、MAPK等通路維持CSCs的自我更新，同時(shí)形成物理屏障阻礙免疫細(xì)胞浸潤；這種“共謀”使得CSCs在TME中獲得雙重保護(hù)：既免于免疫清除，又抵抗治療殺傷。因此，打破CSCs與TME的相互作用，是聯(lián)合策略的重要靶點(diǎn)。3.免疫抑制細(xì)胞：CSCs招募調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）、髓系來源抑制細(xì)胞（MDSCs），抑制細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）和自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的功能。腫瘤干細(xì)胞與腫瘤微環(huán)境的“共謀”三、腫瘤干細(xì)胞靶向治療的現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)：從“理論”到“臨床”的鴻溝靶向腫瘤干細(xì)胞的主要策略基于CSCs的生物學(xué)特性，目前已發(fā)展出多種靶向策略，核心在于“清除種子”而非僅“修剪枝葉”：靶向腫瘤干細(xì)胞的主要策略表面標(biāo)志物靶向通過特異性抗體、抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）或CAR-T細(xì)胞靶向CSCs表面標(biāo)志物，直接殺傷CSCs。例如：-抗CD133抗體：如Salvagein（抗CD133單抗）在臨床試驗(yàn)中顯示出對(duì)肝癌CSCs的抑制作用；-抗CD44抗體：如RG7356（抗CD44單抗）可誘導(dǎo)淋巴瘤細(xì)胞凋亡；-CAR-T細(xì)胞：靶向CD19在B細(xì)胞白血病中取得成功，近年來研究者嘗試靶向CD133、CD44等實(shí)體瘤CSCs標(biāo)志物，如胰腺癌CD133-CAR-T在PDX模型中可顯著抑制腫瘤生長。靶向腫瘤干細(xì)胞的主要策略信號(hào)通路靶向-Hh通路抑制劑：如Vismodegib（Smoothened抑制劑）在基底細(xì)胞癌中有效，但對(duì)實(shí)體瘤CSCs的效果有限；CSCs的自我更新依賴于關(guān)鍵信號(hào)通路，包括Wnt/β-catenin、Notch、Hedgehog（Hh）、STAT3等。靶向這些通路的抑制劑已在臨床前研究中取得進(jìn)展：-Notch通路抑制劑：如γ-分泌酶抑制劑（GSIs）在乳腺癌和腦膠質(zhì)瘤中可抑制CSCs的自我更新；-Wnt通路抑制劑：如PRI-724（抑制β-catenin/CBPinteraction）在胰腺癌和結(jié)腸癌模型中可減少CSCs比例；-STAT3抑制劑：如Stattic（小分子STAT3抑制劑）可逆轉(zhuǎn)CSCs的耐藥性，增強(qiáng)化療敏感性。靶向腫瘤干細(xì)胞的主要策略微環(huán)境靶向通過破壞CSCs的“生存土壤”來間接抑制CSCs：-CAFs靶向：如靶向成纖維細(xì)胞激活蛋白（FAP）的抗體可減少CSCs的微環(huán)境支持；0103-缺氧靶向：如HIF-1α抑制劑（如PX-478）可降低CSCs的致瘤能力；02-免疫微環(huán)境調(diào)節(jié)：如CXCR4抑制劑（如Plerixafor）可阻斷CSCs的歸巢，減少轉(zhuǎn)移。04靶向腫瘤干細(xì)胞的主要策略代謝靶向CSCs的代謝模式與普通腫瘤細(xì)胞不同，主要依賴糖酵解（Warburg效應(yīng)）、氧化磷酸化及脂肪酸代謝。靶向代謝酶可特異性殺傷CSCs：01-糖酵解抑制劑：如2-DG（己糖激酶抑制劑）可抑制乳腺癌CSCs的能量代謝；02-氧化磷酸化抑制劑：如metformin（二甲雙胍）可通過抑制線粒體復(fù)合物I，減少CSCs的自我更新；03-脂肪酸合成抑制劑：如Orlistat（脂肪酸合成酶抑制劑）可誘導(dǎo)前列腺癌CSCs凋亡。04（二）靶向治療的臨床挑戰(zhàn)盡管靶向CSCs的策略在臨床前研究中展現(xiàn)出良好前景，但臨床轉(zhuǎn)化仍面臨諸多挑戰(zhàn)：05靶向腫瘤干細(xì)胞的主要策略靶點(diǎn)特異性不足CSCs的表面標(biāo)志物（如CD133）也表達(dá)于正常干細(xì)胞（如造血干細(xì)胞、腸干細(xì)胞），靶向這些標(biāo)志物可能導(dǎo)致“脫靶效應(yīng)”，損傷正常組織。例如，抗CD133抗體在治療肝癌時(shí)可能對(duì)造血干細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用，導(dǎo)致骨髓抑制。靶向腫瘤干細(xì)胞的主要策略異質(zhì)性與動(dòng)態(tài)性CSCs的標(biāo)志物表達(dá)具有時(shí)空異質(zhì)性，且在治療壓力下可能發(fā)生表型轉(zhuǎn)換（如非CSCs可逆轉(zhuǎn)化為CSCs）。這使得單一靶點(diǎn)難以覆蓋所有CSCs，而聯(lián)合多種靶向藥物又可能增加毒性。靶向腫瘤干細(xì)胞的主要策略耐藥性的產(chǎn)生長期使用靶向藥物可能導(dǎo)致CSCs通過信號(hào)通路代償激活（如Wnt抑制劑可上調(diào)Hh通路）、藥物外排泵表達(dá)增強(qiáng)等機(jī)制產(chǎn)生耐藥。例如，臨床前研究中，長期使用Notch抑制劑后，乳腺癌CSCs可通過激活EGFR通路維持自我更新。靶向腫瘤干細(xì)胞的主要策略缺乏有效的生物標(biāo)志物目前尚缺乏能夠準(zhǔn)確評(píng)估CSCs負(fù)荷及靶向治療效果的生物標(biāo)志物。例如，外周血中CSCs的數(shù)量與腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性仍需大規(guī)模臨床驗(yàn)證。04腫瘤免疫治療的進(jìn)展與局限性：喚醒“沉睡的免疫戰(zhàn)士”腫瘤免疫治療的主要類型免疫治療的核心是激活機(jī)體自身的免疫系統(tǒng)，識(shí)別和清除腫瘤細(xì)胞。近年來，免疫治療已成為腫瘤治療的重要支柱，主要包括以下幾類：腫瘤免疫治療的主要類型免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）-CTLA-4抑制劑：Ipilimumab在黑色素瘤中可延長患者總生存期（OS）。03-PD-1抑制劑：Pembrolizumab、Nivolumab在黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中取得顯著療效；02通過阻斷免疫檢查點(diǎn)分子（如PD-1/PD-L1、CTLA-4），解除T細(xì)胞的抑制狀態(tài)，恢復(fù)其抗腫瘤活性。例如：01腫瘤免疫治療的主要類型CAR-T細(xì)胞療法通過基因工程改造T細(xì)胞，使其表達(dá)靶向腫瘤抗原的嵌合抗原受體（CAR），特異性殺傷腫瘤細(xì)胞。例如：-CD19-CAR-T：在B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血?。˙-ALL）中完全緩解率可達(dá)80%以上；-BCMA-CAR-T：在多發(fā)性骨髓瘤中顯示出持久療效。腫瘤免疫治療的主要類型治療性腫瘤疫苗通過腫瘤抗原（如Neoantigen、病毒抗原）或抗原遞呈細(xì)胞（如DC細(xì)胞），激活特異性T細(xì)胞免疫反應(yīng)。例如：-Sipuleucel-T（Provenge）：前列腺癌抗原疫苗，可延長轉(zhuǎn)移性去勢抵抗性前列腺癌患者的OS。腫瘤免疫治療的主要類型細(xì)胞因子療法通過給予外源性細(xì)胞因子（如IL-2、IFN-α），增強(qiáng)免疫細(xì)胞的活性。例如，高劑量IL-2在黑色素瘤和腎癌中可誘導(dǎo)部分患者長期緩解。免疫治療的局限性盡管免疫治療在部分患者中取得“治愈”效果，但總體響應(yīng)率仍較低（實(shí)體瘤中約10%-30%），其主要局限性包括：免疫治療的局限性“冷腫瘤”的免疫排斥部分腫瘤（如胰腺癌、膠質(zhì)瘤）缺乏免疫細(xì)胞浸潤，被稱為“冷腫瘤”。其形成機(jī)制包括：-免疫抑制微環(huán)境：Tregs、MDSCs浸潤，高表達(dá)PD-L1、TGF-β等抑制因子；-抗原缺失：腫瘤細(xì)胞MHC分子表達(dá)低下，無法呈遞抗原；-物理屏障：腫瘤間質(zhì)纖維化阻礙免疫細(xì)胞浸潤。免疫治療的局限性腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸CSCs是免疫逃逸的主要“推手”：-低免疫原性：CSCs低表達(dá)腫瘤抗原（如MAGE、NY-ESO-1），難以被T細(xì)胞識(shí)別；-免疫抑制因子分泌：CSCs分泌IL-10、TGF-β等因子，抑制DC細(xì)胞成熟和T細(xì)胞活化；-免疫檢查點(diǎn)上調(diào)：CSCs高表達(dá)PD-L1、Galectin-9等，通過PD-1/TIM-3通路抑制T細(xì)胞功能。免疫治療的局限性免疫相關(guān)不良事件（irAEs）免疫治療可能過度激活免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致正常組織損傷（如肺炎、結(jié)腸炎、內(nèi)分泌紊亂）。嚴(yán)重irAEs的發(fā)生率約10%-20%，甚至可能危及生命。免疫治療的局限性耐藥性的產(chǎn)生部分患者初始響應(yīng)后仍會(huì)出現(xiàn)耐藥，其機(jī)制包括：-抗原丟失：腫瘤細(xì)胞下調(diào)抗原表達(dá)（如CD19陰性突變）；-免疫檢查點(diǎn)新表達(dá)：如上調(diào)LAG-3、TIGIT等替代性檢查點(diǎn)；-T細(xì)胞耗竭：長期抗原刺激導(dǎo)致T細(xì)胞功能衰竭。五、腫瘤干細(xì)胞靶向與免疫聯(lián)合策略的協(xié)同機(jī)制：1+1>2的科學(xué)邏輯0103020405聯(lián)合策略的核心目標(biāo)3.打破微環(huán)境：通過兩者的協(xié)同作用，逆轉(zhuǎn)免疫抑制微環(huán)境，形成“免疫-腫瘤”的正反饋循環(huán)。2.激活免疫：通過免疫治療增強(qiáng)免疫系統(tǒng)對(duì)CSCs的識(shí)別與清除；1.清除CSCs：通過靶向治療直接殺傷CSCs或抑制其自我更新；腫瘤干細(xì)胞靶向與免疫聯(lián)合策略的核心目標(biāo)是“雙管齊下”：CBAD協(xié)同作用的分子機(jī)制靶向治療增強(qiáng)免疫原性，促進(jìn)免疫細(xì)胞浸潤1傳統(tǒng)化療藥物可誘導(dǎo)免疫原性細(xì)胞死亡（ICD），釋放腫瘤抗原（如ATP、HMGB1），激活DC細(xì)胞，促進(jìn)T細(xì)胞活化。而靶向CSCs的治療可通過以下機(jī)制增強(qiáng)免疫原性：2-上調(diào)MHC分子和抗原呈遞：如Wnt抑制劑可上調(diào)CD8+T細(xì)胞識(shí)別的腫瘤抗原（如NY-ESO-1），增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤殺傷；3-減少免疫抑制因子分泌：如Notch抑制劑可降低CSCs分泌的TGF-β，減少Tregs的浸潤；4-促進(jìn)血管正?；喝鏗IF-1α抑制劑可改善腫瘤血管結(jié)構(gòu)，促進(jìn)CD8+T細(xì)胞浸潤。協(xié)同作用的分子機(jī)制免疫治療清除CSCs，減少復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移STEP4STEP3STEP2STEP1免疫治療可通過以下機(jī)制靶向CSCs：-特異性識(shí)別CSCs抗原：如CAR-T細(xì)胞可靶向CSCs表面標(biāo)志物（如CD133、CD44），直接殺傷CSCs；-清除免疫抑制細(xì)胞：如ICIs可抑制Tregs和MDSCs的功能，減少CSCs的微環(huán)境保護(hù)；-誘導(dǎo)免疫記憶：記憶T細(xì)胞可長期監(jiān)視并清除復(fù)發(fā)的CSCs，降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。協(xié)同作用的分子機(jī)制信號(hào)通路的交叉調(diào)控CSCs的信號(hào)通路與免疫信號(hào)通路存在交叉調(diào)控，聯(lián)合治療可同時(shí)靶向兩者：-STAT3通路：CSCs通過STAT3通路維持自我更新，同時(shí)STAT3可抑制DC細(xì)胞成熟和T細(xì)胞活化。STAT3抑制劑可同時(shí)抑制CSCs的生長和免疫抑制；-PI3K/Akt通路：CSCs通過PI3K/Akt通路抵抗化療，同時(shí)PI3K/Akt可抑制NK細(xì)胞的活性。PI3K抑制劑可增強(qiáng)化療敏感性，同時(shí)激活NK細(xì)胞功能；-NF-κB通路：CSCs通過NF-κB通路分泌免疫抑制因子，NF-κB抑制劑可減少IL-6、TGF-β的分泌，逆轉(zhuǎn)免疫抑制。聯(lián)合策略的體外與體內(nèi)研究證據(jù)近年來，大量臨床前研究證實(shí)了聯(lián)合策略的有效性：聯(lián)合策略的體外與體內(nèi)研究證據(jù)體外研究-CSCs與免疫細(xì)胞共培養(yǎng)模型：研究表明，靶向CSCs的藥物（如Wnt抑制劑）可增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞對(duì)CSCs的殺傷作用，而PD-1抗體可進(jìn)一步增強(qiáng)這種殺傷效應(yīng)；-腫瘤類器官模型：在胰腺癌類器官中，聯(lián)合CD133-CAR-T和Notch抑制劑可顯著減少CSCs比例，并促進(jìn)IFN-γ等細(xì)胞因子的分泌。聯(lián)合策略的體外與體內(nèi)研究證據(jù)體內(nèi)研究21-小鼠移植瘤模型：在結(jié)腸癌PDX模型中，聯(lián)合Wnt抑制劑（PRI-724）和PD-1抗體可顯著抑制腫瘤生長，延長小鼠生存期，且腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞浸潤顯著增加；-人源化小鼠模型：在CDX人源化小鼠模型中，聯(lián)合CD44-CAR-T和PD-L1抗體可完全清除腫瘤，且無復(fù)發(fā)。-自發(fā)腫瘤模型：在MMTV-PyMT乳腺癌模型中，聯(lián)合STAT3抑制劑和CTLA-4抗體可減少肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量，并誘導(dǎo)長期免疫記憶；305臨床前研究與轉(zhuǎn)化進(jìn)展：從“實(shí)驗(yàn)室”到“病床邊”的探索臨床前研究的模型與策略為了評(píng)估聯(lián)合策略的有效性和安全性，研究者建立了多種臨床前模型：臨床前研究的模型與策略細(xì)胞系模型-CSCs富集模型：通過無血清培養(yǎng)、球形成實(shí)驗(yàn)富集CSCs，用于評(píng)估靶向藥物對(duì)CSCs的自我更新和分化能力的影響；-共培養(yǎng)模型：將CSCs與PBMCs（外周血單個(gè)核細(xì)胞）共培養(yǎng)，評(píng)估免疫細(xì)胞對(duì)CSCs的殺傷作用及聯(lián)合藥物的協(xié)同效應(yīng)。臨床前研究的模型與策略動(dòng)物模型-移植瘤模型：包括皮下移植瘤、原位移植瘤和轉(zhuǎn)移瘤模型，用于評(píng)估聯(lián)合治療的抗腫瘤活性和轉(zhuǎn)移抑制效果；-基因工程模型：如KPC小鼠（胰腺癌）、MMTV-PyMT小鼠（乳腺癌）等自發(fā)腫瘤模型，用于模擬腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，評(píng)估聯(lián)合治療的長期療效；-人源化小鼠模型：將人免疫細(xì)胞植入免疫缺陷小鼠，用于評(píng)估聯(lián)合治療在人類免疫系統(tǒng)背景下的效果。關(guān)鍵轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展基于臨床前研究的證據(jù)，多項(xiàng)聯(lián)合策略已進(jìn)入臨床前轉(zhuǎn)化階段：關(guān)鍵轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展靶向信號(hào)通路與ICIs聯(lián)合-Wnt抑制劑+PD-1抗體：在肝癌患者來源的PDX模型中，聯(lián)合PRI-724和Pembrolizumab可顯著抑制腫瘤生長，且安全性可控；-Notch抑制劑+CTLA-4抗體：在腦膠質(zhì)瘤模型中，聯(lián)合GSIs和Ipilimumab可延長小鼠生存期，且無顯著神經(jīng)毒性。關(guān)鍵轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展靶向表面標(biāo)志物與CAR-T聯(lián)合-CD133-CAR-T+PD-1抗體：在胰腺癌PDX模型中，聯(lián)合CD133-CAR-T和Pembrolizumab可完全清除腫瘤，并減少CAR-T細(xì)胞的耗竭；-CD44-CAR-T+CTLA-4抗體：在胃癌模型中，聯(lián)合CD44-CAR-T和Ipilimumab可顯著抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，并誘導(dǎo)長期免疫記憶。關(guān)鍵轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展微環(huán)境調(diào)節(jié)與免疫治療聯(lián)合-CAFs靶向+PD-1抗體：在胰腺癌模型中，靶向FAP的抗體聯(lián)合Pembrolizumab可減少CAFs的數(shù)量，改善免疫微環(huán)境，增強(qiáng)PD-1抗體的療效；-缺氧靶向+CAR-T：在肝癌模型中，HIF-1α抑制劑聯(lián)合CD133-CAR-T可改善腫瘤缺氧，促進(jìn)CAR-T細(xì)胞浸潤，提高腫瘤清除率。生物標(biāo)志物的探索01020304為了實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療，研究者正在探索聯(lián)合策略的生物標(biāo)志物：-CSCs負(fù)荷標(biāo)志物：如外周血中CD133+細(xì)胞數(shù)量、腫瘤組織中ALDH1+細(xì)胞比例；-免疫微環(huán)境標(biāo)志物：如腫瘤浸潤C(jī)D8+T細(xì)胞密度、PD-L1表達(dá)水平、Tregs比例；-分子標(biāo)志物：如Wnt通路基因突變（如APC、β-catenin）、STAT3磷酸化水平。06臨床應(yīng)用中的挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)策略：走向“個(gè)體化精準(zhǔn)聯(lián)合”主要挑戰(zhàn)盡管聯(lián)合策略前景廣闊，但在臨床應(yīng)用中仍面臨以下挑戰(zhàn)：主要挑戰(zhàn)毒性疊加與安全性管理231靶向藥物與免疫治療均可能引起不良反應(yīng)，聯(lián)合治療可能增加毒性風(fēng)險(xiǎn)。例如：-靶向藥物的毒性：如Wnt抑制劑可引起胃腸道反應(yīng)、肝功能損傷；STAT3抑制劑可引起貧血、白細(xì)胞減少；-免疫治療的毒性：如ICIs可引起irAEs（如肺炎、結(jié)腸炎）；CAR-T細(xì)胞可引起細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）和神經(jīng)毒性。主要挑戰(zhàn)給藥時(shí)序與劑量的優(yōu)化A聯(lián)合治療的給藥時(shí)序和劑量對(duì)療效至關(guān)重要。例如：B-先靶向后免疫：靶向治療可減少CSCs負(fù)荷，上調(diào)免疫原性，隨后免疫治療可增強(qiáng)清除效果；C-先免疫后靶向：免疫治療可激活免疫系統(tǒng)，靶向治療可防止CSCs逃逸；D-同步給藥：可能增加毒性，但可能產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。E目前，最佳給藥時(shí)序尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，需根據(jù)腫瘤類型、藥物機(jī)制和患者個(gè)體情況制定。主要挑戰(zhàn)生物標(biāo)志物的缺乏缺乏能夠預(yù)測聯(lián)合治療療效的生物標(biāo)志物，導(dǎo)致患者選擇困難。例如，PD-L1表達(dá)水平是ICIs療效的預(yù)測標(biāo)志物，但無法預(yù)測聯(lián)合靶向治療的療效。主要挑戰(zhàn)耐藥性的應(yīng)對(duì)-免疫逃逸增強(qiáng)：如CSCs上調(diào)LAG-3、TIGIT等替代性檢查點(diǎn)；-微環(huán)境重塑：如CAFs通過分泌IL-6激活STAT3通路，促進(jìn)CSCs自我更新。-CSCs表型轉(zhuǎn)換：如非CSCs在治療壓力下轉(zhuǎn)化為CSCs；聯(lián)合治療仍可能出現(xiàn)耐藥，其機(jī)制包括：應(yīng)對(duì)策略個(gè)體化治療策略基于患者的腫瘤類型、分子特征、免疫微環(huán)境狀態(tài)，制定個(gè)體化聯(lián)合方案：1-分子分型：如Wnt通路激活的結(jié)直腸癌患者，優(yōu)先選擇Wnt抑制劑聯(lián)合PD-1抗體；2-免疫微環(huán)境分型：如“冷腫瘤”患者，先通過靶向治療改善微環(huán)境（如CAFs靶向），再聯(lián)合免疫治療；3-患者狀態(tài)評(píng)估：根據(jù)患者的體能狀態(tài)、合并癥調(diào)整藥物劑量和給藥時(shí)序。4應(yīng)對(duì)策略毒性管理策略03-劑量調(diào)整：根據(jù)不良反應(yīng)的嚴(yán)重程度（如CTCAE分級(jí)），調(diào)整藥物劑量或暫停治療；02-預(yù)處理：對(duì)于高風(fēng)險(xiǎn)患者（如基礎(chǔ)肺?。o予糖皮質(zhì)激素預(yù)防肺炎；01建立多學(xué)科協(xié)作團(tuán)隊(duì)（腫瘤科、免疫科、病理科、影像科），密切監(jiān)測患者的不良反應(yīng)：04-支持治療：對(duì)于CRS患者，給予IL-6受體拮抗劑（如Tocilizumab）；對(duì)于irAEs患者，給予免疫抑制劑（如環(huán)磷酰胺）。應(yīng)對(duì)策略生物標(biāo)志物的開發(fā)通過多組學(xué)技術(shù)（基因組、轉(zhuǎn)錄組、蛋白組、代謝組）尋找聯(lián)合治療的預(yù)測性生物標(biāo)志物：-液體活檢：通過檢測外周血中CSCs標(biāo)志物、循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）動(dòng)態(tài)監(jiān)測療效；-空間轉(zhuǎn)錄組：分析腫瘤組織中CSCs與免疫細(xì)胞的空間分布，評(píng)估微環(huán)境狀態(tài)；-人工智能：利用機(jī)器學(xué)習(xí)整合臨床、病理和分子數(shù)據(jù)，預(yù)測聯(lián)合治療的療效和毒性。02010304應(yīng)對(duì)策略克服耐藥性的策略A開發(fā)新型聯(lián)合方案，克服耐藥性：B-多靶點(diǎn)聯(lián)合：同時(shí)靶向CSCs的多個(gè)信號(hào)通路（如Wnt+Notch抑制劑），減少代償激活；C-多免疫檢查點(diǎn)聯(lián)合：如PD-1抗體聯(lián)合LAG-3抗體，阻斷多個(gè)抑制通路；D-聯(lián)合其他治療：如放療可誘導(dǎo)ICD，增強(qiáng)免疫治療的療效；化療可減少腫瘤負(fù)荷，促進(jìn)免疫細(xì)胞浸潤。07未來展望：走向“治愈”的必經(jīng)之路技術(shù)方向的創(chuàng)新單細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用單細(xì)胞測序（scRNA-seq）可解析CSCs的異質(zhì)性和免疫微環(huán)境的復(fù)雜性，為聯(lián)合策略提供精準(zhǔn)靶點(diǎn)。例如，通過scRNA-seq可識(shí)別CSCs的新亞群及其特異性標(biāo)志物，開發(fā)更精準(zhǔn)的靶向藥物。技術(shù)方向的創(chuàng)新雙特異性抗體的開發(fā)雙特異性抗體可同時(shí)靶向CSCs表面標(biāo)志物和免疫檢查點(diǎn)分子，實(shí)現(xiàn)“精準(zhǔn)靶向+免疫激活”。例如，抗CD133×PD-L1雙特異性抗體可同時(shí)結(jié)合CSCs和T細(xì)胞，促進(jìn)T細(xì)胞對(duì)CSCs的殺傷。技術(shù)方向的創(chuàng)新納米遞送系統(tǒng)的應(yīng)用納米顆粒