生物技術(shù)XX生物科技公司生物技術(shù)研發(fā)實(shí)習(xí)報(bào)告一、摘要2023年6月5日至8月23日，我在XX生物科技公司生物技術(shù)研發(fā)崗位實(shí)習(xí)，為期8周。主要負(fù)責(zé)基因編輯工具的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，通過構(gòu)建并篩選CRISPRCas9突變體文庫，成功定位目標(biāo)基因關(guān)鍵功能域，獲得3個(gè)高效突變株（編輯效率提升至72%）。運(yùn)用分子克隆、測序及流式細(xì)胞術(shù)等技能，完成12組平行實(shí)驗(yàn)，數(shù)據(jù)重復(fù)率達(dá)95%以上。掌握的高通量篩選方法可應(yīng)用于其他基因功能研究。實(shí)驗(yàn)記錄顯示，優(yōu)化后的實(shí)驗(yàn)流程縮短了30%的周期時(shí)間，驗(yàn)證了標(biāo)準(zhǔn)化操作對效率的提升作用。二、實(shí)習(xí)內(nèi)容及過程1實(shí)習(xí)目的希望通過實(shí)踐掌握基因編輯的實(shí)際操作，了解實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化流程，提升動手能力，為以后工作積累經(jīng)驗(yàn)。2實(shí)習(xí)單位簡介公司主要做基因功能研究，實(shí)驗(yàn)室有分子克隆、細(xì)胞培養(yǎng)和測序等設(shè)備，團(tuán)隊(duì)氛圍挺開放，大家經(jīng)常討論實(shí)驗(yàn)問題。3實(shí)習(xí)內(nèi)容與過程6月5日到8月23日跟著導(dǎo)師做CRISPRCas9實(shí)驗(yàn)。初期學(xué)習(xí)質(zhì)粒構(gòu)建，7月10日獨(dú)立完成EcoRI和BamHI雙酶切，轉(zhuǎn)化感受態(tài)后拿到5個(gè)陽性克隆。8月1日開始篩選突變體，用流式細(xì)胞儀檢測，發(fā)現(xiàn)其中一個(gè)樣品的編輯效率特別高，大概能達(dá)到68%，比文獻(xiàn)報(bào)道的常規(guī)方法強(qiáng)不少。遇到最大困難是7月15號測序結(jié)果不對，花了兩天排查是酶切不完全還是電轉(zhuǎn)化效率低，最后發(fā)現(xiàn)是引物設(shè)計(jì)有問題，重新選了一對峰形好的才搞定。這讓我意識到細(xì)節(jié)太重要了。還參與了細(xì)胞系保種，用凍存液做了10代HEK293細(xì)胞，傳代次數(shù)和形態(tài)都記錄得明明白白。4實(shí)習(xí)成果與收獲系統(tǒng)學(xué)完了從設(shè)計(jì)gRNA到驗(yàn)證編輯效果的全流程，做出了3個(gè)候選突變株，導(dǎo)師說后續(xù)可以繼續(xù)優(yōu)化。最直觀的感受是實(shí)驗(yàn)記錄要趁早寫，我這次就養(yǎng)成了當(dāng)天的事當(dāng)天畢的習(xí)慣。行業(yè)里很多公司現(xiàn)在都用U6或tracrRNA的載體，但公司還是用傳統(tǒng)的，可能成本考慮吧。這讓我明白選擇技術(shù)路線要權(quán)衡很多因素。5問題與建議實(shí)習(xí)期間感覺管理上有點(diǎn)亂，比如耗材申領(lǐng)要等兩天，有時(shí)候師兄臨時(shí)要用就急得不行。建議可以搞個(gè)電子臺賬，按項(xiàng)目分配試劑柜，急需的放優(yōu)先級。另外培訓(xùn)上可以更系統(tǒng)些，我來了快兩周才拿到完整的SOP文檔，有些操作都是看師兄們怎么做學(xué)的。崗位匹配度上，我的分子實(shí)驗(yàn)底子還行，但細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)太少了，要是實(shí)習(xí)前能做點(diǎn)預(yù)實(shí)驗(yàn)就好了。三、總結(jié)與體會1實(shí)習(xí)價(jià)值閉環(huán)這8周像把書里的理論往實(shí)踐里灌，以前覺得PCR就是加熱冷卻循環(huán)，現(xiàn)在明白優(yōu)化退火溫度、Mg2+濃度這些細(xì)節(jié)能直接決定成敗。6月5號剛來時(shí)，我做的酶切都拖泥帶水，8月23號離開時(shí)能獨(dú)立設(shè)計(jì)包含正交實(shí)驗(yàn)的方案了。最扎心的是7月8號那個(gè)實(shí)驗(yàn)失敗，花了3天才找到問題出在試劑過期上，現(xiàn)在看這就是成長的印記。公司用的某些自動化設(shè)備，比如移液機(jī)器人，效率確實(shí)比我手動高，但小規(guī)模實(shí)驗(yàn)還是得靠人眼盯，這讓我意識到技術(shù)永遠(yuǎn)有邊界。2職業(yè)規(guī)劃聯(lián)結(jié)導(dǎo)師常說“做技術(shù)得有鈍感力”，比如8月10號那會兒測序結(jié)果跟預(yù)期差太多，第一反應(yīng)是抱怨試劑，后來發(fā)現(xiàn)是自己忽略了對照實(shí)驗(yàn)，調(diào)整思路后第二天就對了。這種從鉆牛角尖到抓主要矛盾的變化，讓我意識到研發(fā)崗需要既懂細(xì)節(jié)又看全局。未來打算補(bǔ)細(xì)胞培養(yǎng)這塊短板，9月開始會報(bào)個(gè)單細(xì)胞測序的線上課，順便攢材料申請個(gè)專利，畢竟這次做的那個(gè)高效率突變株，老板說很有轉(zhuǎn)化潛力。3行業(yè)趨勢展望實(shí)習(xí)里接觸到的基因編輯工具，像CRISPRVista這種新系統(tǒng)效率比傳統(tǒng)Cas9高，公司還在摸索階段。8月15號參加部門例會時(shí)，聽到隔壁組在試做堿基編輯，感覺像坐火箭似的，但技術(shù)成熟度確實(shí)要再看兩年。我們用的測序平臺還是Illumina的，雖然便宜但通量受限，未來應(yīng)該會向Nanopore這類長讀長技術(shù)遷移，這對我意義就是得趕緊把宏基因組分析學(xué)會，畢竟這可是我的弱項(xiàng)?，F(xiàn)在看，實(shí)驗(yàn)室的每臺儀器背后都藏著行業(yè)變革的種子，能參與其中哪怕只是個(gè)螺絲釘，也覺得挺帶勁的。四、致謝1感謝XX生物科技公司給我實(shí)習(xí)機(jī)會，讓我見識了真實(shí)的研發(fā)環(huán)境。2特別感謝導(dǎo)師，8月23號離開前幫我梳理的實(shí)驗(yàn)思路，現(xiàn)在回想起來還覺得特別受用。3和實(shí)驗(yàn)室的