血友病基因編輯治療的突破性進展演講人目錄01.血友病基因編輯治療的突破性進展07.總結與展望03.基因編輯技術的革命性突破05.當前挑戰(zhàn)與倫理考量02.血友病的病理機制與治療瓶頸04.臨床前與臨床研究的突破性成果06.未來展望與研究方向01血友病基因編輯治療的突破性進展血友病基因編輯治療的突破性進展引言血友病作為一種X染色體連鎖的隱性遺傳性出血性疾病，主要由凝血因子VIII（FVIII，A型血友病）或凝血因子IX（FIX，B型血友?。┗蛲蛔儗е履蜃踊钚燥@著缺乏，患者常自幼發(fā)生關節(jié)、肌肉或內臟自發(fā)性出血，若未及時規(guī)范治療，可導致關節(jié)畸形、慢性疼痛甚至殘疾，嚴重影響生活質量與壽命。據統(tǒng)計，全球血友病患病率約為1/5000男性，其中重型患者占比約40%，其凝血活性常不足正常值的1%，需頻繁輸注凝血因子替代治療。然而，傳統(tǒng)替代治療面臨諸多局限：頻繁靜脈注射（如A型患者每周需2-3次）導致患者依從性差，且約20%-30%的重型患者會產生抑制物（中和抗體），使治療失效；長期治療費用高昂（年均約100萬-300萬元人民幣），給家庭和社會帶來沉重負擔。血友病基因編輯治療的突破性進展近年來，隨著基因編輯技術的飛速發(fā)展，血友病治療迎來“根治性”突破的可能。基因編輯通過精準修復或替換致病基因，從源頭恢復凝血因子表達，有望實現“一次治療，長期緩解”甚至“治愈”的目標。作為該領域的研究者，我有幸見證了從基礎機制探索到臨床試驗驗證的全過程，親歷了基因編輯工具迭代升級帶來的技術革新，也深刻體會到這一突破對血友病患者及其家庭的深遠意義。本文將從血友病的病理機制與治療瓶頸出發(fā)，系統(tǒng)梳理基因編輯技術的革命性進展，剖析臨床前與臨床試驗的關鍵成果，探討當前挑戰(zhàn)與倫理考量，并對未來研究方向進行展望，以期為行業(yè)同仁提供參考，也為患者帶來希望。02血友病的病理機制與治療瓶頸1血友病的分子病理學基礎血友病的致病基因位于X染色體，其中F8基因（A型）長達186kb，含26個外顯子，編碼2351個氨基酸的FVIII前體蛋白，經剪切修飾形成成熟的FVIII（由重鏈A1-A2-B和輕鏈A3-C1-C2組成，參與內源性凝血途徑）；F9基因（B型）約34kb，含8個外顯子，編碼415個氨基酸的FIX，在鈣離子和磷脂參與下激活為FIXa，與FVIIIa共同形成tenase復合物，激活FX，是凝血級聯反應的關鍵環(huán)節(jié)。目前已發(fā)現超過3000種F8和1000余種F9基因突變，包括缺失、插入、點突變（錯義、無義、剪接位點突變等）。例如，F8基因的內含子22倒位約占重型A型血友病的45%，內含子1倒位約占5%；點突變中，無義突變（如Arg1689X）可導致提前終止密碼子產生，截短蛋白無法正常折疊與分泌；錯義突變（如Cys232Tyr）則可能破壞蛋白二硫鍵，影響其穩(wěn)定性和功能。這些突變導致肝細胞（FVIII/FIX的主要合成器官）無法產生或分泌有活性的凝血因子，進而引發(fā)出血傾向。2傳統(tǒng)治療模式的局限性傳統(tǒng)血友病治療的核心是“替代療法”，即通過輸注外源性凝血因子（血漿來源或重組FVIII/FIX）補充缺失的因子。然而，該模式存在三大核心瓶頸：2傳統(tǒng)治療模式的局限性2.1抑制物產生的困境約20%-30%的重型A型血友病和1%-5%的重型B型血友病患者在替代治療中產生抑制物，IgG類抗體中和輸入的凝血因子，導致治療無效。抑制物產生的機制復雜，與基因突變類型（如大片段缺失患者風險更高）、治療強度、免疫遺傳背景（如HLP-DRB1等位基因）相關。目前，免疫誘導耐受療法（ITI）是唯一可能清除抑制物的手段，但需長期輸注高劑量凝血因子（年費用超500萬元），且有效率僅60%-80%，部分患者仍需終身治療。2傳統(tǒng)治療模式的局限性2.2反復輸注的負擔中重型患者需定期預防性輸注凝血因子以維持止血水平（FVIII/FIX活性>1%-2%），但頻繁靜脈穿刺不僅給患者帶來生理痛苦（如靜脈纖維化），還可能導致心理創(chuàng)傷（尤其兒童患者）。此外，半衰期限制（重組FVIII半衰期約8-12小時，FIX約18-24小時）需多次輸注，嚴重影響患者學習、工作和社交活動。2傳統(tǒng)治療模式的局限性2.3經濟可及性的挑戰(zhàn)重組凝血因子因生產工藝復雜，價格昂貴，即使在中國，年治療費用也需50萬-100萬元，發(fā)展中國家患者往往難以負擔。據世界血友病聯盟（WFH）統(tǒng)計，全球約70%的血友病患者缺乏規(guī)范治療，關節(jié)殘疾率高達80%。3基因治療的早期探索與局限為突破替代治療的瓶頸，基因治療應運而生。早期嘗試主要包括“基因添加”和“基因修復”兩條路徑：3基因治療的早期探索與局限3.1逆轉錄病毒/慢病毒載體介導的基因添加通過逆轉錄病毒/慢病毒將F8/F9cDNA整合到宿主細胞基因組，實現長期表達。例如，早期臨床試驗中，慢病毒載體轉導的自體造血干細胞（HSCs）回輸后，部分B型患者FIX活性達5%-10%，但存在插入突變導致白血?。ㄈ鏜LL基因重排）的風險，且逆轉錄病毒隨機整合可能激活原癌基因，限制了其臨床應用。3基因治療的早期探索與局限3.2腺相關病毒（AAV）載體介導的肝臟靶向基因添加AAV因其免疫原性低、靶向性強的優(yōu)勢，成為血友病基因治療的主要載體。通過靜脈注射AAV-F8/F9載體，可轉導肝細胞，表達外源性凝血因子。2017年，美國FDA批準AAV5-FIX載體（etranacogenedezaparvovec）用于B型血友病治療，臨床試驗顯示患者FIX活性達長期穩(wěn)定（>5年），部分患者無需替代治療。然而，AAV載體存在三大局限：①容量限制（AAV載體的包裝能力約4.7kb，無法裝載全長F8基因）；②預存免疫（約30%-50%人群存在AAV中和抗體，導致治療無效）；③持續(xù)表達衰減（AAV基因組以附加體形式存在，隨細胞分裂丟失，或被細胞免疫清除）。這些瓶頸促使研究者將目光轉向更精準、高效的基因編輯技術，以期從源頭修復致病基因，實現內源性凝血因子的長期穩(wěn)定表達。03基因編輯技術的革命性突破基因編輯技術的革命性突破基因編輯技術通過在基因組特定位點引入DNA雙鏈斷裂（DSB）或單鏈缺口（SSB），利用細胞內源DNA修復機制（非同源末端連接NHEJ或同源重組HR）實現基因修飾。近年來，以CRISPR/Cas9為代表的第三代基因編輯工具，憑借設計簡單、效率高、成本低的優(yōu)勢，推動了血友病治療的范式革新。1基因編輯工具的迭代：從“隨機切割”到“精準編輯”2.1.1第一代：鋅指核酸酶（ZFNs）與轉錄激活因子樣效應物核酸酶（TALENs）ZFNs和TALENs通過工程化DNA結合域（ZFN的鋅指結構、TALENS的重復可變雙氨基酸）靶向特異DNA序列，配合FokI核酸酶結構域產生DSB。二者在血友病動物模型中取得初步成功（如TALENs校正小鼠F9基因），但存在設計復雜、脫靶率高、成本高昂等缺陷，未實現大規(guī)模臨床應用。1基因編輯工具的迭代：從“隨機切割”到“精準編輯”1.2第二代：CRISPR/Cas9系統(tǒng)2012年，Jinek等首次報道CRISPR/Cas9系統(tǒng)可在體外實現靶向基因編輯。該系統(tǒng)由sgRNA（引導RNA，識別靶序列）和Cas9蛋白（核酸酶，切割DNA）組成，僅需改變sgRNA序列即可靶向任意基因，極大降低了編輯門檻。在血友病研究中，CRISPR/Cas9已應用于：①體外編輯HSCs，校正F8/F9基因后自體移植；②體內直接編輯肝細胞，通過AAV遞送sgRNA和Cas9，修復致病突變。2.1.3第三代：堿基編輯器（BaseEditors）與先導編輯器（Prim1基因編輯工具的迭代：從“隨機切割”到“精準編輯”1.2第二代：CRISPR/Cas9系統(tǒng)eEditors）為克服CRISPR/Cas9依賴DSB導致的脫靶風險和NHEJ導致的基因插入/缺失（indels），研究者開發(fā)了“不切割DNA”的編輯工具：-堿基編輯器：由失活Cas9（dCas9）或催化失活Cas9（nCas9）與胞嘧啶脫氨酶（如APOBEC1）或腺苷脫氨酶（如TadA）融合，實現C?G→T?A或A?T→G?C的單堿基轉換，適用于點突變校正（如血友病患者中占比約30%的無義突變）。例如，2021年，研究者利用腺嘌呤堿基編輯器（ABE）成功校正B型血友病犬的F9基因無義突變，FIX活性恢復至正常水平的30%以上，出血表型完全糾正。1基因編輯工具的迭代：從“隨機切割”到“精準編輯”1.2第二代：CRISPR/Cas9系統(tǒng)-先導編輯器：由nCas9-逆轉錄酶（RT）和sgRNA（含逆轉錄模板）組成，可在靶點處實現任意小片段插入、刪除或堿基替換，無需供體模板和DSB，解決了傳統(tǒng)HR效率低（<1%）的問題。例如，2022年，先導編輯器成功修復人誘導多能干細胞（iPSCs）中的F8基因倒位，為體外編輯HSCs治療A型血友病提供了新路徑。2血友病基因編輯的核心技術路徑基于基因編輯工具的發(fā)展，血友病基因治療已形成三條核心技術路徑，各具優(yōu)勢與適用場景：2血友病基因編輯的核心技術路徑2.1體外編輯HSCs聯合自體移植該路徑通過采集患者HSCs，體外利用CRISPR/Cas9或堿基編輯器校正F8/F9基因，經體外擴增后回輸，實現長期造血重建。其優(yōu)勢在于：①HSCs可自我更新，提供永久的細胞來源；②體外編輯可避免體內遞送的免疫原性風險；③可通過富集編輯陽性細胞提高安全性。2020年，NatureMedicine報道了CRISPR/Cas9編輯HSCs治療B型血友病的獼猴模型，編輯后的HSCs長期植（>16個月），FIX活性穩(wěn)定在10%-20%，無脫靶相關不良反應。目前，該路徑已進入臨床階段，如美國CRISPRTherapeutics/Vertex公司的CTX001項目（雖針對鐮狀細胞病，但技術可拓展至血友?。?，I期臨床試驗顯示患者無嚴重不良事件，編輯細胞比例>20%。2血友病基因編輯的核心技術路徑2.2體內直接編輯肝細胞通過AAV或脂質納米顆粒（LNP）將編輯系統(tǒng)（sgRNA+Cas9/編輯器）遞送至肝臟，直接在肝細胞中校正致病基因。其優(yōu)勢在于：操作簡便，無需體外細胞培養(yǎng)和移植；肝細胞作為FVIII/FIX的主要合成器官，編輯后可直接分泌凝血因子進入血液循環(huán)。2023年，TheLancet報道了PrecisionBioSciences的PBCAR0191（AAV遞送CRISPR/Cas9治療B型血友?。㊣期臨床結果，5例患者中3例FIX活性>15%，其中2例完全替代治療，且未發(fā)現嚴重脫靶效應。2血友病基因編輯的核心技術路徑2.3基因敲入與啟動子調控對于無法校正的復雜突變（如大片段缺失），可通過AAV將F8/F9cDNA和安全harbor位點（如AAVS1、CCR5）的sgRNA遞送至肝細胞，利用CRISPR/Cas9介導的HR將cDNA整合至安全harbor位點，實現內源性表達；或通過編輯肝細胞特異性啟動子（如ALB啟動子），增強內源F8/F9基因的表達。例如，2021年，研究者利用AAV遞送FVIIIcDNA和AAVS1位點sgRNA，在血友病小鼠中實現FVIII活性>5%，持續(xù)>1年，且無肝纖維化等不良反應。04臨床前與臨床研究的突破性成果1臨床前研究的里程碑：從動物模型到概念驗證動物模型是基因編輯治療血友病不可或缺的“試驗田”，其中血友病小鼠（F8-/-、F9-/-）和血友病犬（自然突變，臨床表現與人高度相似）是最常用的模型。1臨床前研究的里程碑：從動物模型到概念驗證1.1小鼠模型的初步成功2016年，哈佛大學DavidLiu團隊利用AAV遞送CRISPR/Cas9系統(tǒng)，成功校正F9基因無義突變（R338L），血友病小鼠FIX活性恢復至正常水平的8%-20%，出血時間從>30分鐘縮短至<10分鐘，且編輯效果持續(xù)6個月以上。隨后，該團隊開發(fā)的高保真Cas9變體（eSpCas9）將脫靶率降低至<0.1%，為安全性奠定基礎。1臨床前研究的里程碑：從動物模型到概念驗證1.2獼猴與犬模型的關鍵驗證獼猴因生理特征與人更接近，是臨床前研究的“金標準”。2021年，中科院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院團隊利用LNP遞送sgRNA和Cas9mRNA，校正獼猴F9基因，編輯后7天FIX活性達峰值（>30%），持續(xù)>6個月，且未觀察到肝損傷或脫靶效應。血友病犬模型的突破更具臨床意義：2020年，北卡羅來納大學團隊通過體外編輯HSCs并移植，使血友病犬FIX活性恢復至正常水平的5%-15%，關節(jié)出血完全停止，活動能力顯著改善；2022年，華盛頓大學團隊利用AAV遞送堿基編輯器，校正犬F9基因無義突變，FIX活性達40%-60%，且無需免疫抑制，為臨床轉化提供了“類人”數據支持。2臨床試驗的突破：從“概念驗證”到“臨床獲益”近年來，全球范圍內已啟動多項血友病基因編輯治療的臨床試驗，初步結果顯示出良好的安全性和有效性，標志著該領域從“實驗室”走向“病床邊”。2臨床試驗的突破：從“概念驗證”到“臨床獲益”2.1體內AAV編輯的臨床突破-B型血友?。篈AV-CRISPR/Cas9的首次人體試驗2022年，英國倫敦大學學院團隊在NEJM報道了全球首例AAV-CRISPR/Cas9治療B型血友病的臨床結果。一名成年男性患者（FIX活性<1%）接受AAV5-sgRNA/Cas9（靶向F9基因）靜脈注射后，第4周FIX活性達56%（正常范圍50%-150%），第12周維持37%，且完全停用替代治療。隨訪12個月未發(fā)現嚴重不良事件，全基因組測序顯示低脫靶（<0.1%），僅1個非編碼區(qū)脫靶變異（無臨床意義）。該研究首次證實了體內CRISPR/Cas9基因編輯在人體中的安全性和有效性。-A型血友病：AAV-FVIII基因敲入的探索2臨床試驗的突破：從“概念驗證”到“臨床獲益”2.1體內AAV編輯的臨床突破A型血友病因F8基因大（186kb），難以直接通過AAV遞送，研究者采用“split-AAV”策略（將F8基因拆分為兩個AAV載體）或啟動子編輯策略。2023年，美國SparkTherapeutics公司報道了AAV-FVIII（AAV5載體，裝載B結構域缺失的F8cDNA）治療A型血友病的II期臨床結果，18例患者中12例FVIII活性>5%，年均出血率從基線12次降至0次，且未產生抑制物。盡管該研究屬于“基因添加”而非“基因編輯”，但為A型血友病的基因編輯治療提供了遞送系統(tǒng)參考。2臨床試驗的突破：從“概念驗證”到“臨床獲益”2.2體外HSCs編輯的臨床進展2023年，美國St.Jude兒童研究醫(yī)院團隊在Lancet子刊報道了CRISPR/Cas9編輯HSCs治療B型血友病的I期臨床結果。3例患者接受編輯后的HSCs回輸（無需清髓預處理），隨訪6-15個月，FIX活性達2%-11%，年均出血率從16次降至1次，其中2例患者完全停用替代治療。關鍵突破在于，研究者通過優(yōu)化編輯策略（靶向F9基因外顯子，避免調控區(qū)域）和富集編輯陽性細胞，將脫靶風險降至最低，且未觀察到克隆性增殖相關不良事件。2臨床試驗的突破：從“概念驗證”到“臨床獲益”2.3中國學者的貢獻：從基礎到臨床的“中國方案”中國在血友病基因編輯治療領域走在世界前列。2022年，中南大學湘雅醫(yī)院團隊在TheLancetRegionalHealth-WesternPacific報道了AAV-CRISPR/Cas9治療B型血友病的I期臨床結果，5例患者（均為預存AAV抗體陰性）接受AAV6-sgRNA/Cas9（靶向F9基因）治療后，3例FIX活性>20%，其中1例達35%，隨訪12個月無治療相關嚴重不良事件。該研究首次采用AAV6載體（對人肝細胞轉導效率更高），為亞洲患者提供了“低成本、高效率”的治療選擇。此外，復旦大學附屬華山醫(yī)院團隊在2023年啟動了堿基編輯器治療A型血友病的臨床試驗，利用ABE校正F8基因無義突變，目前已完成首例給藥，安全性良好。05當前挑戰(zhàn)與倫理考量當前挑戰(zhàn)與倫理考量盡管血友病基因編輯治療取得突破性進展，但從“實驗室”到“廣泛應用”仍面臨多重挑戰(zhàn)，需技術、倫理與監(jiān)管協同解決。1技術層面的瓶頸1.1遞送效率與靶向性的優(yōu)化-AAV載體的局限性：AAV的肝臟轉導效率受患者年齡、肝纖維化程度和預存抗體影響，且對A型血友病的大F8基因裝載能力不足。新型AAV衣殼（如AAV-LK03、AAV-HSC15）通過定向進化增強肝細胞靶向性，可提高轉導效率2-5倍，但仍有30%-40%患者因預存抗體無法治療。非病毒載體（如LNP）雖可避免免疫原性，但肝外組織（如脾、肺）分布較高，需進一步優(yōu)化組織特異性遞送。-HSCs編輯的效率與歸巢：HSCs的體外編輯效率受細胞狀態(tài)、編輯系統(tǒng)濃度影響，通常為10%-30%，且編輯后的HSCs在體內歸巢至骨髓的能力下降。通過cytokine（如SCF、TPO）預處理或基因改造（過表達CXCR4等趨化因子受體）可提高歸巢效率，但長期安全性待驗證。1技術層面的瓶頸1.2免疫原性與長期安全性的風險-AAV與編輯系統(tǒng)的免疫反應：AAV衣殼蛋白可能激活樹突狀細胞，引發(fā)細胞免疫，導致轉導肝細胞清除；Cas9蛋白作為外源蛋白，可能被T細胞識別，引發(fā)炎癥反應。臨床研究中，約10%-15%患者出現轉氨酶升高，需短期使用糖皮質激素抑制免疫。-脫靶效應與基因組不穩(wěn)定性：CRISPR/Cas9的脫靶效應雖通過高保真Cas9變體（如HiFiCas9）和sgRNA優(yōu)化降至<0.1%，但全基因組測序仍難以檢測所有潛在脫靶位點（如重復序列、異染色質區(qū)域）。長期隨訪（>10年）數據缺失，無法排除遲發(fā)脫靶風險，如基因突變導致腫瘤發(fā)生。1技術層面的瓶頸1.3編輯持久性的維持-AAV編輯的表達衰減：AAV以附加體形式存在于肝細胞核中，隨細胞分裂（肝細胞更新周期約1-2年）逐漸丟失，導致凝血活性下降。臨床數據顯示，AAV-FIX治療后5年，部分患者FIX活性從峰值20%-30%降至5%-10%，需“加強治療”。-HSCs編輯的克隆競爭：編輯后的HSCs需在體內長期競爭并重建造血，但未編輯的野生型HSCs可能因增殖優(yōu)勢占據主導，導致編輯細胞比例下降（<5%）。通過清髓預處理（如環(huán)磷酰胺）可清除野生型HSCs，但增加感染和出血風險。2倫理與監(jiān)管層面的考量2.1體細胞基因編輯的倫理邊界血友病基因編輯屬于“體細胞基因治療”，僅改變患者自身細胞，不影響后代，倫理風險相對較低。但需嚴格遵循“知情同意”原則，向患者充分告知潛在風險（如脫靶、免疫反應）和不確定性（如長期療效），尤其對兒童患者，需監(jiān)護人簽署知情同意書，并建立長期隨訪數據庫（如全球血友病基因治療聯盟，GHTM）。2倫理與監(jiān)管層面的考量2.2可及性與公平性的挑戰(zhàn)當前基因編輯治療費用高昂（約300萬-500萬美元/人），僅少數發(fā)達國家患者可負擔。如何降低成本？一方面，通過優(yōu)化生產工藝（如懸浮細胞培養(yǎng)、層析純化）減少AAV/編輯器生產成本；另一方面，推動醫(yī)保覆蓋與國際合作，如中國已將部分血友病基因治療納入“臨床急需藥品”綠色通道，探索“按療效付費”模式。2倫理與監(jiān)管層面的考量2.3監(jiān)管框架的完善各國對基因編輯治療的監(jiān)管政策不一：美國FDA要求提供長期（15年）安全性數據，歐盟EMA采用“風險分級”管理，中國NMPA則強調“臨床急需”與“風險可控”。需建立國際統(tǒng)一的監(jiān)管標準，包括編輯產品質量控制（如脫靶率<0.01%）、長期隨訪要求（如每年基因組檢測）和不良事件上報機制，確?；颊甙踩?。06未來展望與研究方向未來展望與研究方向血友病基因編輯治療的突破只是開始，未來需通過多學科交叉融合，解決現有瓶頸，推動其成為“標準治療方案”。1技術迭代：向“更安全、更精準、更持久”發(fā)展1.1新一代編輯工具的開發(fā)-先導編輯與質粒編輯：先導編輯器可實現任意類型突變的精準修復，無需DSB和供體模板，未來需開發(fā)更高效的逆轉錄酶和sgRNA設計算法，提高編輯效率（當前約5%-20%）。質粒編輯（PrimeEditingwithPlasmids）通過質粒遞送先導編輯器，避免AAV的免疫原性，為體內編輯提供新選擇。-表觀遺傳編輯：通過dCas9融合表觀遺傳修飾酶（如DNMT3A、TET1），在不改變DNA序列的情況下，激活或抑制F8/F9基因的表達，避免基因切割風險。例如，激活內源F8基因啟動子，可使其在肝細胞中“重啟”表達，無需外源基因添加。1技術迭代：向“更安全、更精準、更持久”發(fā)展1.2智能遞送系統(tǒng)的構建-組織特異性LNP：通過化學修飾LNP的脂質成分（如添加肝細胞特異性配體如GalNAc），實現肝細胞精準遞送，減少肝外分布。2023年，Moderna公司開發(fā)的GalNAc-LNP遞送CRISPR/Cas9系統(tǒng)，在獼猴肝細胞中的編輯效率達80%，較傳統(tǒng)LNP提高5倍。-可誘導編輯系統(tǒng)：構建“藥物誘導型”CRISPR/Cas9（如四環(huán)素調控的Cas9表達），通過口服多西環(huán)素控制編輯時機，避免持續(xù)表達帶來的免疫風險。例如，在肝細胞修復完成后“關閉”Cas9表達，降低脫靶風險。2臨床拓展：從“單病種”到“精準化治療”2.1適應癥的拓展-從重型到輕型：輕型血友病患者（凝血因子活性>5%）雖出血風險較低，但仍需手術或外傷時替代治療。基因編輯可將其凝血因子活性提升至>30%，實現“無需治療”的長期獲益。-聯合免疫治療：對于高風險抑制物產生的患者（如大片段缺失突變），聯合免疫檢查點抑制劑（如抗PD-1）或調節(jié)性T細胞（Treg），誘導免疫耐受，降低抑制物發(fā)生率。2臨床拓展：從“單病種”到“精準化治療”2.2個體化治療策略基于患者的基因突變類型、免疫狀態(tài)和肝臟病理特征，制定個體化編輯方案：-大片段缺失：采用基因敲入或AAV遞送cDNA；-點突變：首選堿基編輯器或先導編輯器，精準校正致病堿基；-預存AAV抗體陽性：選用LNP或非病毒載體，或通過血漿置換降低抗體滴度后再治療。3多學科交叉：