艾滋病病毒核酸標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、消毒隔離制度第一章制度總則1.1目的為最大限度降低艾滋病病毒（HIV）核酸標(biāo)本在采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、實(shí)驗(yàn)前處理及終末消毒環(huán)節(jié)中的職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)，防止實(shí)驗(yàn)室交叉污染，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可追溯，依據(jù)《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》《艾滋病防治條例》《人間傳染的病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（WS5892018）、《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》（原衛(wèi)生部第45號(hào)令）及《血源性病原體職業(yè)接觸防護(hù)導(dǎo)則》（GBZ/T2132008），特制定本制度。1.2適用范圍本制度適用于××市疾病預(yù)防控制中心（以下簡(jiǎn)稱“中心”）艾滋病確證中心實(shí)驗(yàn)室、抗病毒治療門診、VCT門診、美沙酮門診、監(jiān)管場(chǎng)所采血點(diǎn)、第三方合作物流公司、醫(yī)療廢物集中處置單位及所有參與HIV核酸標(biāo)本流調(diào)的工作人員，含在編人員、規(guī)培生、進(jìn)修生、外包保潔、安保、司機(jī)等。1.3管理原則“單人單管、單標(biāo)識(shí)、單流轉(zhuǎn)、單消毒、單復(fù)盤”五單原則；“誰(shuí)采集誰(shuí)登記、誰(shuí)轉(zhuǎn)運(yùn)誰(shuí)簽字、誰(shuí)接收誰(shuí)掃碼、誰(shuí)消毒誰(shuí)負(fù)責(zé)、誰(shuí)復(fù)盤誰(shuí)存檔”五誰(shuí)原則；“零丟失、零泄漏、零暴露、零差錯(cuò)、零延時(shí)”五零目標(biāo)。第二章組織與職責(zé)2.1生物安全委員會(huì)（BSC）主任由中心分管副主任擔(dān)任，委員含實(shí)驗(yàn)室、質(zhì)管、后勤、保衛(wèi)、工會(huì)、紀(jì)檢、醫(yī)務(wù)科、護(hù)理部負(fù)責(zé)人，每季度召開(kāi)一次HIV核酸標(biāo)本管理專題會(huì)議，對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)環(huán)節(jié)進(jìn)行FMEA（失效模式與影響分析）評(píng)分，≥8分立即啟動(dòng)整改。2.2實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人（PI）對(duì)標(biāo)本生物安全、檢測(cè)質(zhì)量、人員培訓(xùn)、消毒效果負(fù)直接法律責(zé)任；每月抽查10%轉(zhuǎn)運(yùn)箱內(nèi)壁，進(jìn)行HIV1RNA熒光定量檢測(cè)，結(jié)果>50copies/拭子視為污染，立即啟動(dòng)溯源與消毒再驗(yàn)證。2.3采樣組（護(hù)士/檢驗(yàn)士）負(fù)責(zé)受檢者身份核驗(yàn)、知情同意、采集、初級(jí)包裝、現(xiàn)場(chǎng)消毒、信息系統(tǒng)錄入、臨時(shí)冷藏；每完成50例需更換一次性防護(hù)面屏，防止氣溶膠積聚。2.4轉(zhuǎn)運(yùn)組（司機(jī)+押運(yùn)員）必須持“病原微生物運(yùn)輸培訓(xùn)合格證”和“危險(xiǎn)品運(yùn)輸從業(yè)資格證”，雙人在途，全程北斗+車載視頻，溫度實(shí)時(shí)上傳至中心“艾防云”平臺(tái)；出現(xiàn)>8℃或<10℃超溫5min，平臺(tái)自動(dòng)短信預(yù)警至PI及BSC主任。2.5消毒隔離組（保潔+院感）按“清潔區(qū)→半污染區(qū)→污染區(qū)”單向流程操作，使用0.5%過(guò)氧乙酸或有效氯1000mg/L消毒液，作用30min后，用ATP生物熒光檢測(cè)儀（3MCleanTrace）讀取RLU值，≤20視為合格，否則重復(fù)消毒并上報(bào)。第三章采集前準(zhǔn)備3.1物資清單（單人份）①一次性使用真空EDTA抗凝管（≥6mL，無(wú)RNA酶）×1；②一次性使用靜脈采血針（21G）×1；③一次性使用無(wú)菌螺旋口核酸保存管（含1mL裂解液，GITC終濃度4mol/L）×1；④一次性使用醫(yī)用橡膠檢查手套（無(wú)粉，≥5.5g）×2副；⑤一次性使用醫(yī)用防護(hù)口罩（N95）×1；⑥一次性使用防護(hù)面屏×1；⑦一次性使用防水隔離衣（PP+PE65g）×1；⑧一次性使用鞋套×1；⑨一次性使用醫(yī)用帽×1；⑩手消毒液（含75%乙醇+1%甘油）×1瓶；?條形碼標(biāo)簽（防水，耐80℃）×3；?生物危害標(biāo)簽（UN2814）×2；?冷鏈箱（PU發(fā)泡，壁厚≥35mm，容積6L）×1；?相變冰排（22℃，400g）×2；?溫度記錄儀（精度±0.1℃）×1；?“HIV核酸采樣包”封條×1。3.2信息系統(tǒng)登錄“艾防云”V3.4，進(jìn)入“核酸采樣”模塊，掃描受檢者身份證，自動(dòng)生成流水號(hào)“HIV23××080001”，同步寫入二維碼；若遇外籍人士無(wú)身份證，則手工錄入護(hù)照號(hào)，系統(tǒng)自動(dòng)生成臨時(shí)18位編碼。3.3知情同意使用中心統(tǒng)一模板《HIV核酸檢測(cè)知情同意書(shū)（2023版）》，含檢測(cè)目的、方法、風(fēng)險(xiǎn)、費(fèi)用、隱私保護(hù)、結(jié)果查詢方式、標(biāo)本保存時(shí)限（80℃，5年），受檢者簽字+紅手印，拒絕檢測(cè)者在系統(tǒng)點(diǎn)“拒檢”，打印回執(zhí)。第四章采集操作細(xì)則4.1身份核驗(yàn)雙人對(duì)照“身份證+預(yù)約碼+本人”，遇差異>0位字符，立即報(bào)告安保，啟動(dòng)《冒名頂替處置預(yù)案》：暫停采樣、報(bào)警、拍照、填寫《異常事件表》。4.2手衛(wèi)生執(zhí)行WHO“6步洗手法”≥40s，用3M愛(ài)護(hù)佳9250，自然干燥后戴第一層手套；手消毒后禁止再觸非無(wú)菌物品，否則視為污染，重新洗手。4.3穿刺使用一次性止血帶，一人一用一棄；穿刺前用75%乙醇+2%氯己定復(fù)合消毒，直徑≥5cm，干燥30s；禁止觸摸穿刺點(diǎn)，若誤觸，換針重消。4.3.1采血量成人≥4mL，兒童≥2mL；采血不暢時(shí)，允許輕揉同側(cè)肘窩，但禁止反復(fù)拍打；超過(guò)2min未成功，更換新管針，原針管作損傷性廢物。4.4分裝采血后立即輕柔顛倒EDTA管8次，防止凝集；在生物安全柜（BSCⅡA2，外排經(jīng)HEPA+活性炭）內(nèi)，用一次性移液管吸取1mL全血加入核酸保存管，再次顛倒10次；剩余全血用于CD4+/CD8+檢測(cè)，不得反向操作。4.5初級(jí)包裝核酸保存管外套50mL離心管（帶O型圈），管壁貼主條形碼；再置入95kPa運(yùn)輸袋（符合UN3373標(biāo)準(zhǔn)），內(nèi)層加吸水紙≥5g；袋口封條處貼生物危害標(biāo)簽+“HIV核酸”字樣；運(yùn)輸袋外表面用75%乙醇擦拭，30s后自然干。4.6現(xiàn)場(chǎng)消毒采血臺(tái)面用1000mg/L含氯消毒液擦拭，作用10min；一次性墊巾每采1人更換；止血帶集中置入5000mg/L含氯消毒液浸泡30min，清洗烘干備用；醫(yī)療廢物置入黃色利器盒+醫(yī)療廢物袋，鵝頸結(jié)封口，稱重打印標(biāo)簽，實(shí)時(shí)上傳“醫(yī)療廢物追溯系統(tǒng)”。4.7手脫卸執(zhí)行“脫卸七步曲”：①摘手套→②手消毒→③摘面屏→④手消毒→⑤脫隔離衣→⑥手消毒→⑦摘口罩；每步均需拍照上傳“艾防云”，AI識(shí)別動(dòng)作不規(guī)范自動(dòng)報(bào)警。第五章暫存與轉(zhuǎn)運(yùn)5.1暫存采樣點(diǎn)配置28℃醫(yī)用冷藏箱（海爾HYC390），箱內(nèi)預(yù)置“核酸標(biāo)本專用”塑料筐，每筐≤20份；溫度每10min記錄一次，超溫即短信預(yù)警；標(biāo)本在采樣點(diǎn)暫存≤4h。5.2二級(jí)包裝將初級(jí)包裝后的標(biāo)本放入專用轉(zhuǎn)運(yùn)箱（德國(guó)Kuehne+Nagel，UN3373，95kPa測(cè)試通過(guò)），箱內(nèi)配置三層：底層相變冰排×2，中層標(biāo)本筐，頂層冰排×1；箱內(nèi)預(yù)置溫度記錄儀（ElitechRC4HC），記錄間隔1min；箱體四面貼“UN3373B類生物物質(zhì)”+“向上”+“HIV核酸”標(biāo)識(shí)；箱體總重量≤4kg。5.3交接采樣組與轉(zhuǎn)運(yùn)組在“生物安全交接區(qū)”完成雙簽字，掃碼后系統(tǒng)自動(dòng)生成《HIV核酸標(biāo)本交接單》（含標(biāo)本數(shù)量、溫度曲線、箱體編號(hào)、交接時(shí)間、雙方簽字、身份證號(hào)、車牌號(hào)）；交接單PDF加密上傳云端，保存≥5年。5.4運(yùn)輸路線固定路線：采樣點(diǎn)→××大道→××高架→中心西門→實(shí)驗(yàn)室卸貨平臺(tái)；全程28km，限速80km/h，避開(kāi)小學(xué)、幼兒園等人口密集區(qū)；雨雪天氣啟用備用路線，提前1h報(bào)備中心值班室。5.5運(yùn)輸時(shí)限夏季（59月）≤2h，冬季（104月）≤2.5h；超時(shí)需書(shū)面說(shuō)明，PI簽字確認(rèn)；若因車禍等突發(fā)事件>4h，立即啟動(dòng)《運(yùn)輸事故應(yīng)急預(yù)案》：①司機(jī)30s內(nèi)穿戴A級(jí)防護(hù)服；②設(shè)置50m警戒線，報(bào)告110、120、疾控中心；③用吸水棉處理泄漏，置入生物危害袋；④現(xiàn)場(chǎng)采集環(huán)境拭子，回實(shí)驗(yàn)室做HIVRNA檢測(cè)；⑤事故報(bào)告24h內(nèi)交BSC。第六章實(shí)驗(yàn)室接收與前處理6.1接收轉(zhuǎn)運(yùn)箱經(jīng)傳遞窗進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，接收員在生物安全柜內(nèi)開(kāi)箱，箱內(nèi)壁用75%乙醇擦拭；每份標(biāo)本掃碼核對(duì)，若破損或泄漏，立即啟動(dòng)《標(biāo)本泄漏處置流程》：①保持柜內(nèi)循環(huán)30min；②用一次性吸水材料覆蓋，0.5%過(guò)氧乙酸作用30min；③雙層封套，貼“泄漏”標(biāo)識(shí)，拍照上傳；④填寫《標(biāo)本泄漏記錄表》，BSC主任簽字，24h內(nèi)補(bǔ)采。6.2滅活采用“75℃水浴30min”法，水浴箱（ThermoSHZ22）每日用HIV1陽(yáng)性血漿做指示，滅活后滴度降低≥4log10視為合格；滅活后標(biāo)本移入BSL2Plus區(qū)域進(jìn)行核酸提取。6.3核酸提取使用羅氏COBAS?AmpliPrep/COBAS?TaqManHIV1Test，v2.0，每批次加1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照（1000copies/mL）、1個(gè)陰性對(duì)照、1個(gè)抑制對(duì)照；提取產(chǎn)物立即上機(jī)，剩余裂解液80℃保存，防止反復(fù)凍融。第七章消毒與隔離7.1消毒頻次實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、設(shè)備把手每批次一次；地面、墻面每日一次；天花板、空調(diào)回風(fēng)口每月一次；發(fā)生泄漏時(shí)隨時(shí)消毒。7.2消毒劑配制0.5%過(guò)氧乙酸：取20%原液25mL+975mL純水，現(xiàn)配現(xiàn)用，24h內(nèi)用完；有效氯1000mg/L：取含氯消毒片（500mg/片）2片+1000mL水，用余氯比色計(jì)驗(yàn)證，記錄RLU值。7.3隔離措施實(shí)驗(yàn)室劃分“三區(qū)兩緩”：清潔區(qū)、半污染區(qū)、污染區(qū)；各區(qū)間壓差10Pa，每日用數(shù)字壓差表校驗(yàn)；門貼虹膜鎖，僅授權(quán)人員進(jìn)入；外來(lái)人員須持48h內(nèi)核酸陰性報(bào)告，登記備案。7.4終末消毒每周六下午進(jìn)行，順序：設(shè)備關(guān)機(jī)→表面消毒→紫外線照射（1.5W/m3，60min）→過(guò)氧乙酸霧化（5mL/m3，密閉90min）→通風(fēng)30min→ATP檢測(cè)合格后方可重啟。第八章職業(yè)暴露處置8.1暴露分級(jí)一級(jí)：皮膚完整，短時(shí)間接觸；二級(jí)：皮膚破損、黏膜接觸；三級(jí)：深部刺傷、大量血液。8.2處置流程“一擠二沖三消毒四報(bào)告五用藥六隨訪”：①一擠：近心端向遠(yuǎn)心端擠壓，禁止局部壓迫止血；②二沖：用大量生理鹽水沖洗≥5min；③三消毒：75%乙醇+2%碘伏，各作用1min；④四30min內(nèi)登錄“職業(yè)暴露系統(tǒng)”，填寫《暴露登記表》；⑤五用藥：BSC主任2h內(nèi)簽字，啟動(dòng)PEP（替諾福韋+恩曲他濱+多替拉韋），連續(xù)28天；⑥六隨訪：暴露后0、4、8、12周檢測(cè)HIV抗體，第12周陰性方可解除觀察。8.3費(fèi)用保障中心統(tǒng)一購(gòu)買“職業(yè)暴露意外保險(xiǎn)”，保額50萬(wàn)元；藥費(fèi)先由中心墊付，后續(xù)醫(yī)保報(bào)銷差額部分由中心承擔(dān)100%。第九章應(yīng)急預(yù)案9.1標(biāo)本丟失立即啟動(dòng)《標(biāo)本丟失應(yīng)急預(yù)案》：①2h內(nèi)報(bào)警，鎖定嫌疑人；②調(diào)取沿途監(jiān)控，發(fā)布協(xié)查通報(bào)；③在市級(jí)媒體發(fā)布公告，72h內(nèi)無(wú)果，上報(bào)國(guó)家疾控中心；④BSC對(duì)責(zé)任人進(jìn)行誡勉談話，年度考核一票否決。9.2運(yùn)輸車禍見(jiàn)5.5，補(bǔ)充：若泄漏至外界，需請(qǐng)第三方機(jī)構(gòu)對(duì)50m半徑環(huán)境采樣，HIVRNA檢測(cè)陰性方可解除封鎖。9.3信息系統(tǒng)故障“艾防云”平臺(tái)采用雙云熱備（阿里云+華為云），RPO≤15s；若雙云同時(shí)故障，啟用本地離線版Excel模板，手工掃碼，事后補(bǔ)錄；超過(guò)4h無(wú)法恢復(fù)，上報(bào)市衛(wèi)健委信息處。第十章培訓(xùn)與考核10.1崗前培訓(xùn)新員工≥8學(xué)時(shí)，含理論+實(shí)操+考核，合格分?jǐn)?shù)≥90分；培訓(xùn)內(nèi)容：標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、消毒、暴露處置、法律法規(guī)；考核方式：VR模擬穿刺+3D泄漏演練，不合格者不得上崗。10.2年度復(fù)訓(xùn)全員每年復(fù)訓(xùn)一次，新增案例分享：2022年復(fù)訓(xùn)引用“×省運(yùn)輸車禍泄漏事件”，通過(guò)桌面推演，找出3項(xiàng)漏洞，已整改。10.3考核結(jié)果與績(jī)效掛鉤：考核滿分100分，≥90分全額發(fā)放績(jī)效；8089分扣10%；<80分待崗1個(gè)月，只發(fā)基本工資；連續(xù)2年<80分，調(diào)離崗位。第十一章監(jiān)督與復(fù)盤11.1內(nèi)部審核質(zhì)管科每季度組織一次內(nèi)部審核，依據(jù)《生物安全檢查表》120項(xiàng)，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題開(kāi)具《不符合項(xiàng)報(bào)告》，責(zé)任科室7日內(nèi)整改并提交證據(jù)。11.2外部審核每?jī)赡杲邮車?guó)家疾控中心艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場(chǎng)評(píng)審，2021年評(píng)審結(jié)論“零不符合”，全國(guó)通報(bào)表?yè)P(yáng)；2023年接受WHOTDR現(xiàn)場(chǎng)督導(dǎo)，獲得“GoldStandard”認(rèn)證。11.3復(fù)盤機(jī)制每月最后一個(gè)周五下午召開(kāi)“HIV核酸安全復(fù)盤會(huì)”，采用“5Why+魚(yú)骨圖”工具，對(duì)當(dāng)月所有異常事件進(jìn)行根因分析，形成《復(fù)盤報(bào)告》，上傳中心OA，全員可查閱。第十二章記錄與檔案12.1記錄清單①《HIV核酸標(biāo)本交接單》；②《溫度記錄曲線》；③《消毒記錄表》；④《職業(yè)暴露登記表》；⑤《復(fù)盤報(bào)告》；⑥《培訓(xùn)考核成績(jī)單》；⑦《醫(yī)療廢物稱重單》；⑧《ATP檢測(cè)原始數(shù)據(jù)》。12.2保存期限紙質(zhì)記錄保存5