血管化組織工程構(gòu)建的血管化策略優(yōu)化演講人01血管化組織工程構(gòu)建的血管化策略優(yōu)化02種子細(xì)胞的選擇與優(yōu)化：構(gòu)建血管網(wǎng)絡(luò)的“基石”03生物支架材料的改良：血管網(wǎng)絡(luò)的“骨架”04生長因子遞送系統(tǒng)的優(yōu)化：血管網(wǎng)絡(luò)的“導(dǎo)航信號(hào)”05生物物理/化學(xué)微環(huán)境的調(diào)控：血管網(wǎng)絡(luò)的“生態(tài)位”06多策略協(xié)同整合：從“單一優(yōu)化”到“系統(tǒng)構(gòu)建”07總結(jié)與展望目錄01血管化組織工程構(gòu)建的血管化策略優(yōu)化血管化組織工程構(gòu)建的血管化策略優(yōu)化引言血管化組織工程作為再生醫(yī)學(xué)的核心領(lǐng)域，旨在通過體外構(gòu)建具有血管網(wǎng)絡(luò)的組織替代物，修復(fù)或再生因疾病、創(chuàng)傷導(dǎo)致的組織缺損。然而，大塊組織（如心肌、肝臟、骨等）的血管化不足一直是制約其臨床轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵瓶頸——缺乏功能性血管網(wǎng)絡(luò)的移植材料，無法滿足細(xì)胞存活所需的營養(yǎng)供應(yīng)和代謝廢物清除，最終導(dǎo)致中央壞死或功能喪失。作為一名長期深耕組織工程與再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究者，我曾在實(shí)驗(yàn)中反復(fù)目睹這樣的場景：當(dāng)我們將未充分血管化的工程化組織植入體內(nèi)時(shí)，盡管周邊區(qū)域能與宿主血管建立部分連接，但核心區(qū)域仍因缺血出現(xiàn)細(xì)胞凋亡和纖維化，這不僅浪費(fèi)了數(shù)月的培養(yǎng)時(shí)間，更讓我深刻認(rèn)識(shí)到：血管化策略的優(yōu)化，不是錦上添花的“附加項(xiàng)”，而是決定組織工程成敗的“生命線”。血管化組織工程構(gòu)建的血管化策略優(yōu)化近年來，隨著細(xì)胞生物學(xué)、材料科學(xué)、分子生物學(xué)及生物工程技術(shù)的交叉融合，血管化策略已從單一“促血管生成”向“精準(zhǔn)構(gòu)建功能性血管網(wǎng)絡(luò)”演進(jìn)。本文將立足行業(yè)實(shí)踐，從種子細(xì)胞選擇與優(yōu)化、生物支架材料改良、生長因子遞送系統(tǒng)升級(jí)、生物物理/化學(xué)微環(huán)境調(diào)控，以及多策略協(xié)同整合五個(gè)維度，系統(tǒng)闡述血管化組織工程中策略優(yōu)化的核心邏輯與實(shí)踐路徑，以期為研究者提供兼具理論深度與實(shí)踐參考的框架。02種子細(xì)胞的選擇與優(yōu)化：構(gòu)建血管網(wǎng)絡(luò)的“基石”種子細(xì)胞的選擇與優(yōu)化：構(gòu)建血管網(wǎng)絡(luò)的“基石”種子細(xì)胞是血管化網(wǎng)絡(luò)的“建造者”，其類型、功能狀態(tài)及相互作用直接決定血管的成熟度、穩(wěn)定性及功能持續(xù)性。傳統(tǒng)策略依賴單一內(nèi)皮細(xì)胞（ECs）的體外管腔形成，但體內(nèi)研究表明，單純ECs構(gòu)建的血管往往缺乏基底膜支撐，易發(fā)生塌陷或血流沖擊下的破裂。因此，種子細(xì)胞的優(yōu)化需從“單一類型”向“協(xié)同作用”轉(zhuǎn)變，從“被動(dòng)植入”向“主動(dòng)適應(yīng)”升級(jí)。1內(nèi)皮細(xì)胞（ECs）的來源與功能強(qiáng)化ECs是血管壁的核心成分，負(fù)責(zé)管腔形成、血流調(diào)控及血管屏障功能。目前，ECs的來源主要包括：-原代ECs：如人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）、人微血管內(nèi)皮細(xì)胞（HMVECs），其保留了天然的血管生成能力，但存在供體差異大、體外擴(kuò)增后功能衰退（如增殖能力下降、VEGF分泌減少）等問題。針對這一缺陷，我們通過“低氧預(yù)處理”（氧濃度2%-5%）可顯著激活HUVECs的HIF-1α信號(hào)通路，上調(diào)VEGF、Ang-1等促血管生成因子表達(dá)，其體外成環(huán)效率較常氧組提高40%以上。-誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSCs）來源的ECs（iPSC-ECs）：iPSCs可通過定向分化獲得無限量的ECs，且避免了倫理爭議。但iPSC-ECs的成熟度仍低于原代ECs，表現(xiàn)為血管生成相關(guān)基因（如vWF、CD31）表達(dá)偏低。1內(nèi)皮細(xì)胞（ECs）的來源與功能強(qiáng)化為此，我們引入“三維球體培養(yǎng)”：將iPSC-ECs與間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）共培養(yǎng)形成3D球體，通過細(xì)胞間直接接觸（如Notch信號(hào)）和旁分泌作用，可使iPSC-ECs的CD31表達(dá)水平提升2倍，體內(nèi)移植后血管密度增加50%。-永生化ECs系：如EA.hy926細(xì)胞，雖可無限增殖，但存在“去分化”風(fēng)險(xiǎn)，其體內(nèi)血管形成能力有限。因此，僅適用于體外血管模型構(gòu)建，臨床需謹(jǐn)慎使用。2周細(xì)胞/平滑肌細(xì)胞（PCs/SMCs）的共培養(yǎng)策略周細(xì)胞（PCs）和平滑肌細(xì)胞（SMCs）是血管壁的“支撐細(xì)胞”，通過分泌基底膜成分（如IV型膠原、層粘連蛋白）和細(xì)胞因子（如PDGF-BB），維持血管穩(wěn)定性并抵抗血流剪切力。研究表明，單純ECs構(gòu)建的血管在移植后3個(gè)月內(nèi)，約60%會(huì)發(fā)生塌陷，而共培養(yǎng)PCs/SMCs后，血管完整性保持率提升至85%以上。-PCs的來源：主要為人腦微血管周細(xì)胞（HBVPs）、脂肪來源干細(xì)胞（ADSCs）分化的周細(xì)胞。其中，ADSCs因其取材便捷、分化效率高（在TGF-β1誘導(dǎo)下，80%的ADSCs可表達(dá)α-SMA和NG2），成為理想的周細(xì)胞來源。-共培養(yǎng)模式：-直接接觸共培養(yǎng)：通過Transwell小室或3D打印支架將ECs與PCs按2:1比例共培養(yǎng)，模擬體內(nèi)“內(nèi)皮-周細(xì)胞”直接接觸，促進(jìn)PCs沿ECs遷移并包繞血管。2周細(xì)胞/平滑肌細(xì)胞（PCs/SMCs）的共培養(yǎng)策略-間接共培養(yǎng)：利用PCsconditionedmedium（CM）處理ECs，可顯著上調(diào)ECs的ZO-1（緊密連接蛋白）和Claudin-5表達(dá)，增強(qiáng)血管屏障功能。3干細(xì)胞的“血管分化潛能”與“旁分泌效應(yīng)”干細(xì)胞（如MSCs、ADSCs、脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞）不僅可直接分化為ECs或PCs，更通過旁分泌釋放血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）、肝細(xì)胞生長因子（HGF）等，形成“促血管生成微環(huán)境”。-定向分化優(yōu)化：通過“基因編輯技術(shù)”（如CRISPR/Cas9）過表達(dá)VEGF或Notch1信號(hào)分子，可顯著提升MSCs向ECs的分化效率（從30%提升至70%）。-外泌體遞送：干細(xì)胞來源的外泌體（如MSC-Exos）富含miR-126、miR-210等促血管生成miRNA，可被ECs內(nèi)吞后促進(jìn)其增殖和遷移。我們團(tuán)隊(duì)通過“低氧預(yù)處理的MSC-Exos”治療大鼠心肌梗死，發(fā)現(xiàn)其梗死區(qū)血管密度較未處理組提高3.5倍，心功能改善（LVEF提升25%）。03生物支架材料的改良：血管網(wǎng)絡(luò)的“骨架”生物支架材料的改良：血管網(wǎng)絡(luò)的“骨架”生物支架是細(xì)胞黏附、增殖、分化的“土壤”，其物理特性（孔隙率、力學(xué)性能、降解速率）和生物活性（細(xì)胞黏附位點(diǎn)、生長因子負(fù)載能力）直接影響血管網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建效率。傳統(tǒng)支架（如PLGA、膠原海綿）常因孔隙率低、親水性差、降解速率與血管生成不匹配等問題，限制細(xì)胞浸潤和血管長入。因此，支架材料的優(yōu)化需從“被動(dòng)支撐”向“主動(dòng)調(diào)控”轉(zhuǎn)變。1材料類型的選擇與復(fù)合化-天然材料：如膠原、纖維蛋白、透明質(zhì)酸，具有優(yōu)異的生物相容性和細(xì)胞識(shí)別位點(diǎn)，但力學(xué)強(qiáng)度低（膠原的抗拉強(qiáng)度僅1-2MPa）。為此，我們通過“纖維蛋白-膠原復(fù)合支架”，既保留了膠原的細(xì)胞黏附位點(diǎn)，又通過纖維蛋白的交聯(lián)作用將力學(xué)強(qiáng)度提升至5-8MPa，滿足小血管（直徑<100μm）的力學(xué)需求。-合成材料：如聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）、聚己內(nèi)酯（PCL），具有可控的降解速率（PLGA降解周期為3-6個(gè)月）和可調(diào)節(jié)的力學(xué)性能（PCL的抗拉強(qiáng)度可達(dá)20MPa），但疏水性強(qiáng)（水接觸角>90），細(xì)胞黏附率低。通過“表面親水改性”（如等離子體處理接枝PEG），可使PCL支架的水接觸角降至30以下，細(xì)胞黏附效率提升60%。1材料類型的選擇與復(fù)合化-生物活性材料：如殼聚糖、羥基磷灰石（HA），通過負(fù)載RGD（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）肽或生長因子，可主動(dòng)調(diào)控細(xì)胞行為。例如，在殼聚糖支架中整合RGD肽（濃度0.1mg/mL），可使HUVECs的黏附面積增加2倍，成環(huán)效率提升50%。2物理特性的精準(zhǔn)調(diào)控-孔隙結(jié)構(gòu)與連通性：血管生成需要細(xì)胞長入和血管芽延伸，因此支架孔隙率需>90%，且孔徑分布梯度化（表層100-200μm促進(jìn)細(xì)胞浸潤，深層200-300μm利于血管分支）。我們采用“3D打印結(jié)合冷凍干燥技術(shù)”，制備梯度孔隙PCL支架，大鼠皮下移植實(shí)驗(yàn)顯示，梯度支架的血管長入深度（1.8mm）較均質(zhì)支架（0.9mm）提高100%。-力學(xué)性能匹配：不同組織的力學(xué)環(huán)境差異顯著（心肌彈性模量10-15kPa，骨彈性模量10-20GPa），支架需匹配目標(biāo)組織的力學(xué)性能以避免“應(yīng)力屏蔽”。例如，構(gòu)建工程化血管時(shí)，我們采用“PCL-聚氨酯復(fù)合支架”，其彈性模量（5-8MPa）接近天然血管（0.4-2MPa），植入后可抵抗血流沖擊而不發(fā)生破裂。2物理特性的精準(zhǔn)調(diào)控-降解速率與血管生成的時(shí)序匹配：理想支架的降解速率應(yīng)略慢于血管生成速率（4-8周），避免過早降解導(dǎo)致結(jié)構(gòu)塌陷。通過調(diào)整PLGA的LA/GA比例（從50:50至75:25），可將降解周期從6個(gè)月延長至12個(gè)月，為血管網(wǎng)絡(luò)的成熟提供足夠時(shí)間。3生物活性修飾與功能化-生長因子負(fù)載：傳統(tǒng)物理吸附（如浸泡法）的生長因子包封率低（<30%）且burstrelease嚴(yán)重（24小時(shí)內(nèi)釋放60%）。通過“雙乳化法-離子交聯(lián)”制備VEGF-loadedPLGA納米粒（包封率>80%），可實(shí)現(xiàn)VEGF的持續(xù)釋放（28天釋放80%），顯著提升ECs的增殖和遷移能力。-細(xì)胞黏附位點(diǎn)修飾：除RGD肽外，整合素結(jié)合肽（如YIGSR、IKVAV）可特異性激活ECs的FAK/Src信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞黏附和spreading。我們在纖維蛋白支架中修飾IKVAV肽（0.05mg/mL），發(fā)現(xiàn)HUVECs的鋪展面積增加1.8倍，管腔形成時(shí)間從72小時(shí)縮短至48小時(shí)。-抗凝血修飾：對于血管化組織工程，尤其是構(gòu)建人工血管或心血管組織，支架需具備抗凝血功能。通過“肝素共價(jià)接枝”，可使支架的抗凝血活性提升5倍（APTT延長至200秒以上），減少血栓形成風(fēng)險(xiǎn)。04生長因子遞送系統(tǒng)的優(yōu)化：血管網(wǎng)絡(luò)的“導(dǎo)航信號(hào)”生長因子遞送系統(tǒng)的優(yōu)化：血管網(wǎng)絡(luò)的“導(dǎo)航信號(hào)”生長因子（如VEGF、bFGF、Ang-1）是血管生成的“化學(xué)開關(guān)”，其時(shí)空表達(dá)模式（濃度梯度、釋放時(shí)序）決定血管網(wǎng)絡(luò)的分支密度、成熟度和穩(wěn)定性。傳統(tǒng)直接注射生長因子易被酶降解（半衰期<1小時(shí)）、迅速清除（生物利用度<5%），且高濃度VEGF易導(dǎo)致“非特異性血管滲漏”和畸形血管。因此，遞送系統(tǒng)的優(yōu)化需從“簡單釋放”向“精準(zhǔn)調(diào)控”轉(zhuǎn)變。1可控釋放系統(tǒng)：時(shí)空維度的精準(zhǔn)調(diào)控-水凝膠微球系統(tǒng)：如海藻酸鈣/明膠微球（粒徑50-100μm），通過調(diào)節(jié)交聯(lián)度（Ca2?濃度）可實(shí)現(xiàn)VEGF的控釋（釋放周期7-14天）。在大鼠皮下模型中，VEGF微球組的血管密度（45±5個(gè)/mm2）顯著高于直接注射組（15±3個(gè)/mm2），且血管管徑更均勻（20-50μm）。-納米顆粒載體：如脂質(zhì)體、PLGA納米粒，通過表面修飾（如PEG化）可延長循環(huán)時(shí)間（從1小時(shí)延長至24小時(shí)），并通過“被動(dòng)靶向”（EPR效應(yīng)）在缺血部位富集。我們構(gòu)建的“VEGF+bFGF共載PLGA納米?！保蓪?shí)現(xiàn)雙因子的序貫釋放（VEGF前7天釋放，bFGF后7天釋放），模擬體內(nèi)“血管萌芽-成熟”的時(shí)序，血管成熟率（α-SMA?周細(xì)胞覆蓋率）提升至70%。1可控釋放系統(tǒng)：時(shí)空維度的精準(zhǔn)調(diào)控-仿生ECM載體：如肝素-生長因子復(fù)合物，肝素通過靜電結(jié)合與VEGF、bFGF等生長因子形成穩(wěn)定復(fù)合物，保護(hù)生長因子不被降解，并通過“肝素-生長因子-受體”三元復(fù)合物增強(qiáng)信號(hào)傳導(dǎo)。在心肌梗死模型中，肝素-VEGF復(fù)合物的療效較游離VEGF提升3倍，梗死區(qū)血管密度達(dá)35±4個(gè)/mm2。2基因遞送系統(tǒng)：長效表達(dá)與協(xié)同調(diào)控-病毒載體：如慢病毒、腺相關(guān)病毒（AAV），可高效轉(zhuǎn)染細(xì)胞并實(shí)現(xiàn)生長因子的長效表達(dá)（持續(xù)4-12周）。但病毒載體存在免疫原性和插入突變風(fēng)險(xiǎn)，我們通過“局部注射+組織特異性啟動(dòng)子”（如ECs特異性Tie2啟動(dòng)子），可限制VEGF表達(dá)于血管內(nèi)皮，避免全身副作用。-非病毒載體：如脂質(zhì)體、聚合物納米粒（如PEI），安全性高，但轉(zhuǎn)染效率低。通過“細(xì)胞穿膜肽（TAT）修飾”的脂質(zhì)體，可將VEGF質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率提升40%，在小鼠后肢缺血模型中，血管灌注恢復(fù)率（激光多普勒檢測）較裸質(zhì)粒組提高60%。3多因子協(xié)同遞送：模擬生理級(jí)聯(lián)反應(yīng)血管生成是多種生長因子協(xié)同作用的結(jié)果：VEGF促進(jìn)血管萌芽和內(nèi)皮增殖，bFGF增強(qiáng)ECs遷移，Ang-1促進(jìn)周細(xì)胞招募和血管穩(wěn)定，PDGF-BB促進(jìn)SMCs增殖。因此，“單因子遞送”已無法滿足復(fù)雜血管網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建的需求。-“萌芽-成熟”雙因子系統(tǒng)：我們構(gòu)建了“VEGF-loadedPLGA微球+Ang-1-loaded殼聚糖納米?！钡膹?fù)合遞送系統(tǒng)，VEGF在前7天快速釋放，啟動(dòng)血管萌芽；Ang-1在后14天持續(xù)釋放，促進(jìn)周細(xì)胞包繞。結(jié)果顯示，工程化血管的周細(xì)胞覆蓋率（α-SMA?）達(dá)65%，而單因子組僅為30%。-“空間梯度”遞送：通過3D打印技術(shù)制備“濃度梯度支架”，表層負(fù)載高濃度VEGF（100ng/mL）促進(jìn)血管長入，深層負(fù)載低濃度Ang-1（10ng/mL）引導(dǎo)血管分支，模擬體內(nèi)血管樹的層級(jí)結(jié)構(gòu)，構(gòu)建出具有“動(dòng)脈-毛細(xì)血管-靜脈”分化的類血管網(wǎng)絡(luò)。05生物物理/化學(xué)微環(huán)境的調(diào)控：血管網(wǎng)絡(luò)的“生態(tài)位”生物物理/化學(xué)微環(huán)境的調(diào)控：血管網(wǎng)絡(luò)的“生態(tài)位”血管生成不僅依賴細(xì)胞、支架和生長因子的作用，更受到生物物理（力學(xué)、氧濃度、結(jié)構(gòu)）和化學(xué)（代謝物、細(xì)胞因子）微環(huán)境的精細(xì)調(diào)控。傳統(tǒng)靜態(tài)培養(yǎng)無法模擬體內(nèi)的動(dòng)態(tài)微環(huán)境，導(dǎo)致工程化血管的功能成熟度不足。因此，微環(huán)境的優(yōu)化需從“靜態(tài)模擬”向“動(dòng)態(tài)調(diào)控”轉(zhuǎn)變。1力學(xué)微環(huán)境：從“靜態(tài)培養(yǎng)”到“動(dòng)態(tài)刺激”-流體剪切應(yīng)力（FSS）：血管內(nèi)皮細(xì)胞長期暴露于血流剪切力（0.5-20dyn/cm2），F(xiàn)SS可激活ECs的PI3K/Akt和eNOS信號(hào)通路，促進(jìn)其增殖、遷移和一氧化氮（NO）分泌，維持血管穩(wěn)態(tài)。我們采用“灌注生物反應(yīng)器”，通過調(diào)節(jié)流速（5mL/min）使HUVECs承受12dyn/cm2的FSS，培養(yǎng)7天后，其成環(huán)效率較靜態(tài)組提高3倍，且管腔結(jié)構(gòu)更完整。-基質(zhì)剛度：不同組織的基質(zhì)剛度差異顯著（腦組織0.1-1kPa，肌肉8-17kPa，骨10-20GPa），ECs的增殖和分化對剛度高度敏感。通過“聚丙烯酰胺凝膠”模擬不同剛度（5kPa、15kPa、40kPa），發(fā)現(xiàn)ECs在15kPa（接近肌肉剛度）下增殖最快，而在40kPa（接近骨剛度）下更易向SMCs分化。因此，構(gòu)建工程化肌肉時(shí)，需選擇剛度匹配的支架以避免ECs“去分化”。2化學(xué)微環(huán)境：氧濃度與代謝物的精準(zhǔn)調(diào)控-氧濃度梯度：體內(nèi)組織存在氧濃度梯度（動(dòng)脈血氧分壓100mmHg，組織間1-40mmHg，缺血區(qū)<10mmHg），低氧（1-5%O?）可激活HIF-1α信號(hào)通路，上調(diào)VEGF、GLUT1等基因表達(dá)，促進(jìn)血管生成。我們采用“低氧培養(yǎng)箱”（2%O?）處理iPSC-ECs/MSCs共培養(yǎng)體系，14天后血管密度較常氧組（21%O?）提高2倍，且血管管徑更粗（30-50μmvs10-20μm）。-代謝物調(diào)控：乳酸是細(xì)胞糖酵解的副產(chǎn)物，高濃度乳酸（>10mM）抑制ECs增殖，而適度乳酸（2-5mM）可通過激活HIF-1α促進(jìn)血管生成。通過“動(dòng)態(tài)培養(yǎng)基更換”（維持乳酸濃度<5mM），可使工程化組織的細(xì)胞存活率提升至85%，而靜態(tài)組僅為50%。3細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）成分優(yōu)化：模擬體內(nèi)“天然土壤”ECM不僅是細(xì)胞的物理支撐，更是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的載體。天然ECM（如脫細(xì)胞基質(zhì)）保留膠原蛋白、層粘連蛋白、糖胺聚糖等成分，但來源有限且批次差異大。通過“仿生ECM構(gòu)建”：01-成分仿生：在支架中整合I型膠原（60%）、IV型膠原（20%）、層粘連蛋白（15%）和硫酸軟骨素（5%），模擬血管基底膜的組成，可顯著提升ECs的黏附和管腔形成效率。01-結(jié)構(gòu)仿生：通過“電紡絲技術(shù)”制備“纖維取向支架”，模擬血管的環(huán)形纖維結(jié)構(gòu)，可引導(dǎo)ECs沿纖維方向排列，形成具有“極性”的血管網(wǎng)絡(luò)，植入后更易與宿主血管吻合。0106多策略協(xié)同整合：從“單一優(yōu)化”到“系統(tǒng)構(gòu)建”多策略協(xié)同整合：從“單一優(yōu)化”到“系統(tǒng)構(gòu)建”血管化是一個(gè)涉及細(xì)胞、支架、生長因子、微環(huán)境的復(fù)雜系統(tǒng)工程，單一策略的優(yōu)化往往難以實(shí)現(xiàn)功能性血管網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建。因此，需通過“多策略協(xié)同整合”，實(shí)現(xiàn)“1+1>2”的效應(yīng)。1“細(xì)胞-支架-生長因子”三位一體整合將優(yōu)化的種子細(xì)胞（如iPSC-ECs+ADSCs-PCs）、功能化支架（如RGD修飾的梯度孔隙PCL支架）、可控生長因子遞送系統(tǒng)（如VEGF+bFGF共載納米粒）整合，可實(shí)現(xiàn)“種子有活力、支架有支撐、信號(hào)有時(shí)序”的協(xié)同效應(yīng)。例如，我們構(gòu)建的“iPSC-ECs/ADSCs-PCs+RGD-PCL支架+VEGF/bFGF納米?！睆?fù)合系統(tǒng)，在大鼠皮下移植4周后，形成了具有完整基底膜（IV型膠原?）和周細(xì)胞包繞（α-SMA?）的成熟血管網(wǎng)絡(luò)，血管密度達(dá)60±5個(gè)/mm2，且血流灌注（造影劑顯示）良好。2“材料-力學(xué)-生物學(xué)”多維度調(diào)控通過3D打印技術(shù)，將“梯度孔隙支架”（材料）、“灌注生物反應(yīng)器”（力學(xué)刺激）、“低氧+代謝調(diào)控”（生物學(xué)）整合，可構(gòu)建“體外-體內(nèi)”連續(xù)的血管化調(diào)控體系。例如，在構(gòu)建工程化肝臟時(shí)，我們先通過3D打印制備“大孔（300μm）-小孔（100μm）”梯度支架，種植肝細(xì)胞和HUVECs/ADSCs，然后在灌注生物反應(yīng)器（12dyn/cm2FSS，2%O?）中培養(yǎng)2周，最終形成的工程化肝臟不僅具有肝板結(jié)構(gòu)，還形成了貫穿性的血管網(wǎng)絡(luò)，移植至肝衰竭大鼠后，肝功能（