1、.,1,我國乙肝疫苗現(xiàn)狀及存在的問題,梁爭論 中國藥品生物制品檢定所 2005年9月10日,.,2,內 容,一、國內乙肝疫苗生產(chǎn)和質量管理概況 二、不同種類乙肝疫苗免疫原性和效果比較 三、影響乙肝疫苗免疫原性和效果的主要因素 四、影響乙肝疫苗實際免疫效果的主要因素 五、乙肝疫苗與不良反應 六、目前乙肝疫苗存在的問題,.,3,一、國內乙肝疫苗生產(chǎn)和質量管理概況,1 預防性疫苗種類和劑量 釀酒酵母 5g/劑/0.5ml 、10g/劑/1.0ml 漢遜酵母 10g/劑/1.0ml, CHO疫苗 10g/劑/1.0ml、20g/劑/1.0ml 進口疫苗: GSK 10g/劑/0.5ml、20g/劑/1

2、.0ml 聯(lián)合疫苗： GSK、北京科興,問題：種類多；但缺乏應用于特殊人群的劑型和加免程序（如腎透析病人的劑量等）,.,4,2、國內上市前疫苗,預防性疫苗： 1.含前-S1CHO乙肝疫苗 臨床前 2.漢遜酵母改變工藝疫苗 完成臨床 3.進口注冊疫苗: 韓國綠十字公司漢遜酵母疫苗 臨床前 治療性疫苗： 免疫復合物疫苗 60 g/劑/1.0ml II期 多肽疫苗 II期 高劑量疫苗 60g/劑/1.0ml II期,.,5,表 我國乙肝疫苗生產(chǎn)廠家一覽表,問題：廠家多、規(guī)模小、競爭降價、不利于質量保證,3、生產(chǎn)廠家和品種,.,6,4、乙肝疫苗生產(chǎn)和質量管理,生產(chǎn): 2004年度共生產(chǎn)乙肝疫苗186批

3、，其中酵母疫苗 147 批，1億568萬支； CHO疫苗 39批 1344萬支。該年度我國生產(chǎn)的疫苗88.72%為酵母乙肝疫苗。 質量管理：國家一級管理 疫苗批簽發(fā)： 起始時間: 2002年1月 范圍: 國內及進口注冊的每一批乙肝疫苗(用于上市銷售) 內容: 資料審核+部分檢驗 監(jiān)督檢驗：成品全檢,.,7,二、不同種類乙肝疫苗免疫原性和效果比較,疫苗種類 抗體反應 母嬰阻斷 動物 人體 酵母 + + + CHO + + + 血源 + + + ? ? ?,.,8,表.不同乙肝抗原免疫動物抗體反應 抗原 ED50 g 稀釋度 酵母 1.0-1.5 6.7-10.0 血源 0.2-0.3 33.3-

4、50.0 CHO 0.2-0.3 33.3-50.0,動物抗體應答,.,9,圖 . 兒童免后抗體陽轉率隨訪比較,血源疫苗抗體陽轉率顯著優(yōu)于5g 酵母疫苗,血源疫苗抗體滴度顯著優(yōu)于5 g酵母疫苗,圖 .兒童免后 抗體GMT隨訪比較,人體抗體應答,.,10,不同種類疫苗母嬰傳播效果比較,母嬰阻斷效果,.,11,三、影響乙肝疫苗免疫原性和效果的主要因素,1 抗原特性 單克隆抗體表位不同 糖基化程度不同 2 誘導細胞免疫反應不同,作為第一及唯一成功的基因工程疫苗,對乙肝疫苗結構與免疫原性進行比較,對其他種類疫苗的研制具有一定意義,.,12,(一). 抗原表位 單抗表位分析方法的建立 1.自行制備5株單

5、克隆抗體：A1， B6，B9，B12及B13，其中A1，B13與P24和GP27均結合B6，B9，B12僅與P24單體結合，其中B6與酵母結合親和力最強。 2.應用二抗標記法放免檢測乙肝抗原表位 3.統(tǒng)計方法： A%= Acpm /（Acpm+Bcpm+Ccpm+Dcpm+Ecpm）,.,13,不同種類抗原表位密度的比較 表. 血源抗原表位密度分析 表面抗原 單抗 稀釋度 A1 B6 B9 B12 B13 41 19.3 19.2 24.0 16.0 20.0 42 19.6 18.9 25.3 15.5 20.7 43 19.8 19.5 26.4 14.9 19.5 44 19.1 20.

6、5 25.4 15.9 19.1 均值（%）19.5 19.5 25.4 15.6 20.0,不同稀釋度結果穩(wěn)定，證明方法的可靠性,.,14,不同種類抗原表位密度的比較,.,15,不同種類抗原表位密度的比較,.,16,不同種類抗原表位密度的比較,.,17,表.不同種類乙肝抗原表位密度分析 表面 單抗 抗原 A1 B6 B9 B12 B13 血源 19.5 19.5 25.4 15.6 20.0 CHO 20.1 19.5 25.6 15.6 19.2 酵母（P） 16.5 32.5 16.4 15.5 19.2 酵母（A） 16.0 32.9 16.3 15.1 19.4,A1、B6、B9單抗

7、結合密度，酵母抗原與CHO、血源抗原顯著不同。酵母抗原與B6親和力強。,不同種類抗原表位密度的比較,.,18,圖 不同種類乙肝抗原表位密度分析,不同來源抗原的表位密度有差異，影響疫苗的免疫原性，來源于相同基因的乙肝抗原，因表達系統(tǒng)和后處理工藝不同，免疫原性和效果有所不同。,不同種類抗原表位密度的比較,.,19,(二). 糖基化程度 1.不同種類疫苗糖基化程度不同,.,20,2.CHO 抗原去糖基化研究 1). 去糖基化 通過基因點突變方法，將編碼148位蘇氨酸的密碼子轉化為編碼甘氨酸的密碼，將改造后的基因轉染到CHO細胞中，篩選出表達乙肝抗原的細胞株，得到CHO去糖基化疫苗，SDS-PAGE電

8、泳結果為與酵母抗原相同的一條P24帶。,.,21,2).去糖基化前后表位密度的改變 表. CHO 抗原與5株單克隆抗體結合率比較 單抗 800 400 200 50 12.5 （） 均值 a1 20.02 20.31 20.93 21.94 20.80 a5 18.52 19.35 18.82 15.23 17.98 a11 20.39 20.20 20.20 20.24 20.16 B9 21.52 20.40 20.40 22.85 21.29 B12 20.00 20.00 19.88 19.74 19.90,2.CHO 抗原去糖基化研究,.,22,2).去糖基化前后表位密度的改變 表.

9、 去糖基化CHO 抗原與5株單克隆抗體結合率比較 單抗 800 400 200 50 12.5 （） 均值 a1 25.35 27.76 28.61 29.48 27.80 a5 2.56 2.15 1.65 1.00 1.84 a11 28.17 28.01 29.44 29.67 28.82 B9 29.71 29.53 30.81 35.84 31.47 B12 14.21 12.55 9.49 4.05 10.08,2.CHO 抗原去糖基化研究,.,23,表. 酵母 抗原與5株單克隆抗體結合率比較 單抗 800 400 200 50 12.5 （） 均值 a1 30.48 30.91

10、36.77 37.94 34.02 a5 6.67 6.49 8.82 6.74 7.18 a11 40.00 41.82 40.22 44.33 41.59 B9 16.43 15.58 7.74 7.80 11.89 B12 6.43 5.19 6.45 3.20 5.32,2.CHO 抗原去糖基化研究,2).去糖基化前后表位密度的改變,.,24,圖. CHO抗原去糖基化表位密度比較,表位結合百分率（%）,CHO抗原去糖基化后,表位密度發(fā)生改變,與a11結合密度增高，與酵母抗原類似。,2.CHO 抗原去糖基化研究,2).去糖基化前后表位密度的改變,.,25,圖.不同糖基化程度抗原免疫小鼠細

11、胞免疫比較,去糖基化后細胞免疫增強,3). 細胞免疫改變,2.CHO 抗原去糖基化研究,.,26,圖.不同糖基化程度抗原免疫小鼠ED50（稀釋度）比較,去糖基化后體液免疫下降,4). 體液免疫改變,2.CHO 抗原去糖基化研究,.,27,圖.不同糖基化程度HBsAg熱加速抗原性比較,25,37,去糖基化影響抗原表位、細胞免疫和體液免疫，增強細胞免疫活性,但降低疫苗的抗體水平和穩(wěn)定性。,5).穩(wěn)定性改變,2.CHO 抗原去糖基化研究,.,28,圖 不同來源的乙肝表面抗原免疫小鼠后不同時間脾細胞誘生IL-2比較,Merck 酵母乙肝抗原誘導IL-2產(chǎn)生早,(三).不同種類疫苗誘導細胞免疫特點不同,

12、.,29,圖 .不同來源的乙肝表面抗原免疫小鼠后不同時間脾細胞誘生IFN-r比較,多種抗原、多時間點細胞免疫研究表明:不同來源的乙肝抗原所誘導的細胞免疫類型不同，酵母疫苗誘導細胞免疫尤其Th1類細胞反應的能力強且時間早，可解釋該類疫苗母嬰傳播阻斷保護率高的特點。,(三).不同種類疫苗誘導細胞免疫特點不同,.,30,HBsAg XSD（SI） 5 10 15 20 25 （天） 對照 ND ND 6.261.67 8.932.77 11.54 1.70 血源 7.183.11 25.033.02 6.230.87 79.5317.82* 78.9233.81* CHO 15.543.63 8.6

13、24.24 7.331.97 66.3627.75* 25.2911.36 Merck 12.551.48 9.286.20 14.995.46 37.9818.40* 42.9928.54 漢遜 27.9016.01* 14.938.62 11.882.83 ND 68.50 9.19 史克 29.627.44 10.619.47 28.072.80 30.6710.99 33.0610.06,(三).不同種類疫苗誘導細胞免疫特點不同,表. ConA誘導不同來源免疫小鼠脾細胞的HBsAg體外增殖試驗結果比較,.,31,表. 不同種類乙肝疫苗應用ConA SI比較 疫苗 免后天數(shù) 1 3 5

14、Yeast 0.95 8.65 5.44 HP 1.29 4.58 2.97 CHO 0.82 1.00 0.38 注:對照為1所得比值,(三).不同種類疫苗誘導細胞免疫特點不同,.,32,特點 酵母疫苗（Merck工藝）CHO疫苗 血源疫苗 漢遜疫苗 糖基化程度 無 高 低 無 動物抗體反應 低 中 高 中 抗體持久性 差 中 好 - 細胞免疫 以Th1為主 晚 晚 以Th1為主 母嬰傳播阻斷 90% 74% 54% 95%,不同種類乙肝疫苗的特點總結,1.酵母疫苗母嬰傳播阻斷率高 早期誘導特異性細胞免疫 2.CHO 疫苗穩(wěn)定性好 糖基化程度高 3.血源疫苗母嬰傳播阻斷率低 可能與人體的耐受

15、有關,.,33,四、影響乙肝疫苗實際免疫效果的主要因素,影響因素: 技術層面: 變異/細胞免疫/劑量/加免和再免/無、低應答 管理層面:領導/政策/資金/宣傳/首針及時率和覆蓋率 問題: 疫苗實際應用中抗體陽轉率低、病毒感染和攜帶率（除大、中城市外）未見明顯下降。 對策： 疫苗專項檢查,全國抽檢31批疫苗(SFDA) 分析及時接種率、全程接種率 城市：80-90%；平原農(nóng)村：50%；山區(qū)：低于30%,.,34,乙肝疫苗效力與效果的區(qū)別,疫苗效力： 阻斷雙陽性90% 其他人群 95%以上 疫苗效果： 疫苗效果=疫苗效力X覆蓋率 乙肝疫苗特點：首針及時率,.,35,疫苗效果與覆蓋率的關系,Effe

16、ctiveness=Efficacy X 疫苗覆蓋率 城市: 疫苗效果=95%X80%=76.00% 鄉(xiāng)鎮(zhèn): 疫苗效果=95%X50%=47.50% 農(nóng)村: 疫苗效果=95%X30%=28.50% 平原 =95%X35%=33.25% 丘陵=95%X18%=17.10% 山區(qū)=95%X7%=6.65%,.,36,疫苗效果與覆蓋率的關系,.,37,五、與疫苗有關的不良反應 (術語定義),SFDA： 不良反應：在按規(guī)定劑量和程序接種疫苗過程中，產(chǎn)生非預期或有害的反應 ，通常與疫苗接種有關。 不良事件（AE）：是指臨床試驗中受試者產(chǎn)生的非預期醫(yī)療事件，它與疫苗 /接種疫苗不一定有因果聯(lián)系。 嚴重不良

17、事件（SAE）：是指與死亡、入院治療、住院期延長、持續(xù)性殘疾 或無自理能力等與臨床試驗有關的有生命危險的事件。 衛(wèi)生部： 預防接種一般反應：是指在免疫接種后發(fā)生的，由疫苗本身所固有的特性引 起的，對機體只會造成一過性生理功能障礙的反應，主要由發(fā)熱和局部紅腫 ，同時可能伴有全身不適、倦怠、食欲不振、乏力等綜合癥狀。 預防接種異常反應：是指使用合格疫苗在實施規(guī)范接種過程中，或實施規(guī)范 接種后造成受種者機體組織器官、功能損害，相關各方均無過錯誤的藥品不 良反應。,.,38,WHO疫苗接種后不良反應的分類,類型 分類及舉例 疫苗反應 接種疫苗時引起或誘發(fā)。由疫苗固有性質引起 的反應 實施差錯 由疫苗準

18、備、處理或接種差錯引起的反應 偶合癥 預防接種后發(fā)生、但并非由疫苗本質引起的疾病 或癥狀 注射反應 由注射本身或注射疫苗焦慮引起，而非疫苗本 質引起的反應 原因不明 反應原因不能確定,中國計劃免疫，2004；10（5）：315,.,39,與疫苗有關的不良反應,乙肝疫苗接種后常見不良反應包括： 注射部位紅腫 、疼痛 以及乏力、發(fā)熱等系統(tǒng)癥 狀，罕見的嚴重不良反應有過敏性休克、脫髓鞘 等，嚴重的不良反應發(fā)生率約為1/600，000。 我國乙肝疫苗評價缺乏上市后評價系統(tǒng)和病列對照研究疫苗的系統(tǒng)資料。,.,40,國內1994-2003年間涉及乙肝疫苗不良反應的 39篇報道均為罕見的嚴重不良反應事件；個

19、案報告資料不夠全面、詳細（約1/3的報道未說明疫苗生產(chǎn)廠家、種類和免疫針次），且所有報道均未表明不良反應是否得到相關機構的鑒別、反饋等。,與疫苗有關的不良反應,.,41,不良反應管理制度亟待完善,.,42,CDC/接種單位，人員,預防接種異常反應報告卡,縣級衛(wèi)生 行政部門,縣級藥管局,市級衛(wèi)生 行政部門,市級藥管局,省級衛(wèi)生 行政部門,衛(wèi)生部,省級藥管局,SFDA,核實/處理,核實/處理,突 發(fā) 公 共 衛(wèi) 生 事 件 應 急 條 例,藥 品 不 良 反 應 監(jiān) 測 報 告 制 度,預防接種異常反應報告、鑒別、反饋管理圖,重大事件調查/處理,監(jiān)測/評價,.,43,六、現(xiàn)有乙肝疫苗存在的問題,(

20、一). 現(xiàn)有疫苗劑量和免疫策略函待改進 (二). 臨床試驗不規(guī)范 (三). 首針及時率和全程覆蓋率急待提高 (四). 疫苗企業(yè)注冊標準和說明書存在的問題 (五). 不良反應(SAE)無有效的報告、 鑒別、處理以及反饋制 度；(網(wǎng)絡) (六). 加強科研,.,44,（一）.現(xiàn)有疫苗劑量和免疫策略函待改進,1.疫苗劑量偏低:包括母嬰阻斷、新生兒、成人等 2.未制定加強免疫和再免策略 3.應加強計劃免疫外人群的疫苗接種 4 缺少國家層面的成本效益分析,.,45,圖.成人5g/劑國產(chǎn)酵母疫苗免疫效果(檢定所),應增加生產(chǎn)高劑量酵母乙肝疫苗以滿足成人需要,成人乙肝疫苗免疫效果,3.應加強計劃免疫外人群的疫苗接種,.,46,成人與兒童乙肝疫苗免疫持久性比較,乙肝疫苗免疫后抗HBs陽轉率與年齡的關系 免后 兒童 成人 時間 陽轉率（%） 陽轉率（%） 7 97.34 83.3 12 90.00 69.6 24 77.99 32.7 36 71.44 20.8 48 65.69 60 64.54,中華計劃免疫雜志