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文檔簡介

1、a,1,免疫細胞功能檢查技術,a,2,1淋巴細胞功能檢查,淋巴細胞功能測量可分為體內(nèi)實驗和體外實驗。體內(nèi)實驗主要是間接理解淋巴細胞對抗原、抗原或有絲分裂源的反應。體外實驗主要包括抗原或有絲分裂初級刺激后淋巴細胞的增殖反應,細胞毒性試驗和淋巴細胞分泌產(chǎn)物測定,a,3,淋巴細胞,T細胞(負責細胞免疫功能)b細胞(執(zhí)行體液免疫功能)NK細胞(非特異性免疫功能),a,4,1原理:淋巴細胞,DNA合成,分化,毛細細胞,刺激物,細胞變大,細胞漿擴張,液泡,細胞核明顯,核染色質(zhì)松弛,a,6淋巴細胞轉(zhuǎn)化的刺激物,非特異性刺激物:PHA - T細胞ConA - t,b細胞LPS - b細胞特異性刺激物:異種抗原

2、同種組織抗原,a,8,3。檢測方法,形態(tài)方法:刺激淋巴細胞(4-6天)毛細飽和同位素法:PHA淋巴細胞(54h) DNA合成期3HTdR與收集細胞混合,檢測射線,細胞內(nèi)3h-TDR,缺點:如果用肉眼觀察形態(tài)變化,則判斷容易受到主觀因素的影響,重復性和準確性差。a,11,(2) 3H-TdR混合立法,a,12,優(yōu)點:3H-TdR混合立法靈敏度高,客觀性強,重復性好。缺點:雖然需要特定的設備條件,但也存在放射性核素污染問題。a,13,MTT,吸光度測定,(3) MTT比色法,a,14,(2) t細胞分泌功能測定,體外培養(yǎng)的t細胞受多種絲狀體或抗原刺激后,通過免疫學、細胞生物學和分子生物學技術分別獲

3、得細胞因子,a,15,(3) t細胞介導的細胞毒性試驗,1 .原理:目標細胞抗原,t細胞,殺傷活力觀察,致敏CTL,目標細胞,a,16,形態(tài)方法:淋巴細胞腫瘤細胞數(shù)殘留腫瘤細胞,2。方法,意義:腫瘤患者CTL殺死腫瘤細胞的能力,a,17,a,18,51cr釋放方法,a,19,(4)活體檢查,特定抗原皮膚檢查PHA皮膚檢查,a,20,2,原理:a,23,2。方法:經(jīng)典溶血性斑塊形成試驗人工溶血斑塊試驗,a,24,3。臨床應用和評價,溶血斑塊測試主要用于評估藥物和手術等因素對體液免疫功能的影響,以及免疫治療或免疫重建后身體產(chǎn)生抗體的能力。a,25,(c) b細胞抗體形成功能檢測酶聯(lián)免疫吸附法ELI

4、SPOT,1。原理:a,26,2。應用及方法評價:該方法同時檢測抗體分泌細胞和抗體分泌量。優(yōu)點:穩(wěn)定性、特異性、抗原含量低??梢酝瑫r檢測不同抗原誘導的不同抗體分泌,可以量化??梢詸z測到組織切片分泌抗體的單個細胞。a,27,(4)體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特定抗原包括白喉毒素、破傷風毒素、多價肺炎鏈球菌疫苗等。避免適當數(shù)量的抗原或?qū)∪饷庖叩耐瑫r,在免疫前和免疫后1周、2周、3周分別采血分離血清,并測定被檢查者免疫前后相應抗體的效價,判定被檢查者體內(nèi)b細胞功能。,a,28,染色數(shù),離心LDH或AKP,離心沉淀測定活性細胞熒光,發(fā)光強度測定,CPM值,形態(tài)酶解釋法同位素化學發(fā)光,3,NK細胞活性測定,靶細胞溶

5、解,常用靶細胞3360 K562細胞株原理:a,32,2。方法:瓊脂糖平板法,濾膜滲透法,A,33,(b)吞噬及殺菌功能測定,1 .顯微鏡檢查法:a,34,2。溶菌法,a,35,NBT還原試驗,原理:n-n-c h n=n-r-,n-NH2 c n=NH,基于四唑NBT還原試驗,a,36,中性粒細胞,NBT,顆粒沉積在細胞質(zhì)中,a,37,2,巨噬細胞功能檢查,(a)木炭分裂試驗,正常小鼠肝臟中未干的細胞可吞噬90%碳粒子,將其去除因此,將印度墨汁(木炭顆粒懸浮液)定量地靜脈注射到老鼠身上,以一定的間隔重復靜脈血,測量血液中碳顆粒的濃度,并根據(jù)血液中碳顆粒分離的速度判定巨噬細胞的功能。a,38,(2)吞噬細胞對粒細胞抗原物質(zhì)的吞噬作用很強,以雞紅細胞(CRBC)、念珠菌、酵母細胞等為吞噬顆粒,用分離敷料收集人巨噬細胞或從腹腔積液中提取鼠巨噬細胞的吞噬作用。a,39,(3)巨噬細胞溶酶體酶測定,1。酸性磷酸酶測定硝酸鉛偶氮法2。非特異性酯酶測定一般為-萘乙酸法,a,40,(4)細胞毒性測定,用IFN-激活小鼠巨噬細胞,對標記為125I-UdR的DBA/2小鼠肥大細胞瘤P815的殺傷活性觀察。a,41,(5)巨噬細胞的凝血活性測定,活化巨噬細胞產(chǎn)生與薄膜結合的凝血活

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