1、a,1,細胞化學染色,滄州醫(yī)專醫(yī)學技術系 侯振江,a,2,細胞化學染色，是一種以形態(tài)為基礎，結合運用化學或生物化學技術對血細胞內各種化學成分作定位、定性及半定量分析的方法。 用于研究血細胞生理、病理和化學結構； 臨床上為某些血液病的診斷、鑒別診斷、療效觀察、預后監(jiān)測和發(fā)病機制的探討，提供重要依據(jù)。,a,3,血細胞化學染色的基本要求是在原位顯示細胞成分和結構，反應產物應是有色沉淀物，具有一定的穩(wěn)定性。 血細胞化學染色可顯示糖原、脂類、酶、蛋白質等。,a,4,（一）固定 固定有物理法與化學法， 物理法為干燥和火焰固定， 化學法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。,血細胞化學染色流程,a,5,（二）

2、顯示 1、偶氮偶聯(lián)法：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，產生分解產物，再與重氮鹽結合引起偶氮偶聯(lián)，使其形成不溶性的偶氮色素，以此證明酶的存在。 2、聯(lián)苯胺法：粒細胞和單核細胞中的過氧化物酶作用于過氧化氫，釋放新生態(tài)氧，使無色的聯(lián)苯胺形成藍色沉淀。,a,6,3、普魯士藍法：細胞內、外鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用，形成藍色亞鐵氰化鐵沉淀。 4、雪夫反應：過碘酸氧化細胞內糖類中乙二醇基形成乙醛基，醛基與雪夫試劑作用，使無色品紅形成紅色沉淀。 5、金屬沉著法 其他尚有物理學方法，如脂溶性染料染色（顯示脂質）、熒光顯示、放射自顯影以及體外活體染色亦常用于臨床血液細胞學診斷。,a,7,（三）細胞化學定量 粗略估

3、量，以染色反應的強弱，受色的深淺，人為地區(qū)別為陰性和各種程度的陽性。 百分法，只能反映細胞陽性率，不能反映受色強弱。 積分法，是常用的半定量法，將等級估量與百分率相結合它既反映了細胞陽性率的高低，又反映了細胞受色的強弱。,a,8,下面介紹幾種常用的細胞化學染色方法 這些方法學在白血病的鑒別診斷上具有重要意義。,a,9,一、過氧化物酶染色（POX）,（一）四甲基聯(lián)苯胺法(TMB) 【原理】 粒細胞和單核細胞的胞漿內的髓過氧化物酶（POX orMPO）分解過氧化氫，釋放新生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺氧化成藍色聯(lián)苯胺，后者進一步變成棕色化合物沉著于細胞質內。,a,10,POX,新生態(tài)氧 O,過氧化氫 （基質

4、中）,四甲基聯(lián)苯胺TMB （無色）,聯(lián)苯胺藍（藍色）,亞硝基鐵氰化鈉,藍色顆粒 （漿內酶部位）,粒、單核 細胞胞漿,【原理】,四甲基苯醌二胺,(棕色),自我脫氫氧化,a,11,【試劑】 1%TMB 亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液 1%過氧化氫溶液 稀過氧化氫溶液 瑞氏染色液,a,12,【操作】 1. 取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液10l，混合溶液呈淡棕黃色。 2. 在新鮮干燥的血片上，加混合溶液0.5ml, 放置lmin后，再加稀過氧化氫溶液0.7ml，染色6min 。 3. 瑞氏染液復染1520min 。 4. 油鏡鏡檢。,a,13,【結果】 細胞質內有藍黑色顆粒者為陽性。

5、 （） 無顆粒沉著； （） 顆粒細小 ，分布稀疏； （+） 顆粒較粗，局灶分布； （+） 顆粒粗大，分布較密，占胞質 1/22/3； （+） 顆粒粗大，呈團塊分布； （+） 全部胞質均部滿顆粒，可覆蓋胞核。,a,14,a,15,骨髓片POX染色,a,16,【臨床意義】 （1）粒系： POX主要分布在粒細胞和單核細胞內，隨著粒細胞成熟的程度而逐漸增強，中性分葉核粒細胞為強陽性。 嗜酸性粒細胞陽性程度最強，其陽性顆粒比中性粒細胞粗大，有折光。 堿性粒細胞為陰性。,a,17,（2）單核細胞： 原始單核細胞為陰性反應， 幼稚單核細胞和成熟單核細胞呈弱陽性反應，顆粒細小，彌散分布。,a,18,（3）其他

6、細胞 淋巴細胞、漿細胞、幼紅細胞、組織細 胞、巨核細胞均呈陰性反應。 （4）血小板過氧化物酶 主要定位于幼稚型巨核細胞的核膜上，可作為原巨核細胞的一種標志物，有助于FAB M7的識別。,a,19,（5）過氧化物酶染色 主要用于鑒別急性白血病類型， 急性髓細胞白血病多呈陽性反應，以M3和M2型反應最強，MI和M5型反應較弱， 故有助于區(qū)別M3和M5型。 急性淋巴細胞白血病呈POX陰性反應，故為急性髓細胞和淋巴細胞白血病鑒別的重要指標。,a,20,注意事項,涂片應新鮮制作、厚薄適宜。 TMB 配制在8588的乙醇溶液中染色效果較好，勿用9095乙醇，否則細胞表面蛋白質很快凝固，妨礙試劑向胞內滲入而

7、使顯色反應減弱或消失。 過氧化氫溶液需新鮮配制，其濃度與加入量不能隨意更改。涂片中粒細胞看不見陽性顆粒，紅細胞呈棕色或綠色，即表示過氧化氫過濃。若過氧化氫加于血片上不產生氣泡，則示無效。 染色液適宜pH值應為5.5，若pH值 10個鐵顆粒。 正常范圍：30% 90% ，平均60%， 多見型，少見型，無、型。,a,67,細胞內鐵,a,68,（3）環(huán)形鐵粒幼紅細胞： 指含鐵顆粒6個，其中2/3以上鐵顆粒圍繞核周排列成完整環(huán)形或不完整環(huán)形。 正常或非鐵粒幼細貧血無環(huán)形鐵粒幼細胞，鐵粒幼細貧血中環(huán)形鐵粒幼細胞6% 。,a,69,環(huán)形鐵粒幼細胞,a,70,【臨床意義】 1缺鐵性貧血時， 骨髓細胞外鐵明顯減少，為“一”“士”，細胞內鐵平均5.9%，僅為I型。 經有效鐵劑治療后，外鐵增多。 因此骨髓鐵染色是診斷缺鐵性貧血及指導鐵劑治療的重要方法。,a,71,2鐵粒幼細胞性貧血時， 外鐵“2”一“3”，內鐵平均70%，其鐵粒粗大，以 型為主，出現(xiàn)較多環(huán)形鐵粒幼細胞。 因此，本實驗是診斷鐵粒幼細胞貧血的有效方法。 MDS也可出現(xiàn)環(huán)形鐵粒幼細胞。,a,72,3.