1、免疫凝集反應(yīng)及臨床應(yīng)用,劉 靜 2014.11.26,.,細菌、螺旋體、紅細胞或細胞性抗原等顆粒性抗原，或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后，它們與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生特異性反應(yīng)，在一定條件下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。,凝集反應(yīng)定義,.,反應(yīng)階段： 抗原抗體的特異性結(jié)合階段 出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象,凝集反應(yīng),反應(yīng)特點： IgM的作用比IgG大數(shù)百倍 IgG與抗原結(jié)合后，常不出現(xiàn)凝集反應(yīng)，稱不完全抗體,.,可見反應(yīng)形成,.,電解質(zhì)：稀釋液或緩沖液（8.5g/L NaCl） pH：pH6pH9（ pH3為細菌抗原的等電點） 溫度：1540，37最適（ 4特例 ） 反應(yīng)時間：不同反應(yīng)時

2、間不同 外力：震蕩或攪拌,環(huán)境因素,.,分類：直接與間接凝集反應(yīng),.,顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。 包括： 玻片凝集試驗 試管凝集試驗,直接凝集反應(yīng) direct agglutination,.,玻片凝集試驗： 定性 已知抗體檢測抗原 簡便、快速 菌種的診斷或分型 ABO血型的鑒定,.,試管凝集試驗： 半定量 已知抗原檢測抗體 易引起抗原的非特異性凝集 肥達試驗,.,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,棄掉0.5,試管凝集試驗原理,結(jié)果,1 2 3 4 5 6 7,菌液,.,+,很小的凝集顆粒,混濁,-,無凝集現(xiàn)象,與對照相同,+,小、部分凝集塊,中

3、等混濁,+,大多凝集管底,輕度混濁,+,大的凝集塊,清亮,凝集程度,沉淀,上清,試管凝集試驗結(jié)果判斷,.,管底沉淀,凝集程度,最高稀釋比例,待測血清的滴度,試管凝集試驗 結(jié)果判斷,.,將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象,間接凝集反應(yīng) indirect agglutination,.,RBC、白陶土、活性炭、某些細菌、聚苯乙烯膠乳顆粒 良好載體有如下幾點基本要求：在生理鹽水或緩沖液無自凝傾向；大小均勻；比重與介質(zhì)相似，短時間內(nèi)不能沉淀；無化學(xué)或血清學(xué)活性；吸附抗原（或抗體）后，不影響其活性。 目前應(yīng)用最廣的是人的O型紅細胞

4、和綿羊紅細胞。而后者應(yīng)用更廣，因為其來源方便。另外綿羊紅細胞的表面有大量的（約1 000個以上）糖蛋白受體，極易吸附某些抗原物質(zhì)，吸附性能好。,載體種類,.,正向間接凝集試驗 反向間接凝集試驗 間接凝集抑制試驗 協(xié)同凝集試驗,間接凝集反應(yīng),.,用抗原致敏載體-檢測抗體,正向間接凝集反應(yīng),.,反向間接凝集反應(yīng),用抗體致敏載體-檢測抗原,.,間接凝集抑制反應(yīng),用抗原致敏載體-檢測抗原,有凝集顆粒為陰性,.,反向間接凝集試驗，載體為金黃色葡萄球菌 金黃色葡萄球菌的細胞壁成分A蛋白，和IgG的Fc段結(jié)合，使Fab段暴露在菌體表面， Fab段仍然保持正常的抗體活性。 利用這種特性可以將特異性IgG結(jié)合在

5、菌體上，形成致敏顆粒，檢測特異性抗原。,協(xié)同凝集反應(yīng),.,原理圖,IgG,SPA,SPA- IgG,待測抗原,SPA- IgG-待測抗原凝集顆粒,混合,加入,.,間接血凝試驗 膠乳凝集試驗 明膠凝集試驗,按載體分類間接凝集試驗,.,以紅細胞為載體的間接凝集試驗。 將已知抗原(或抗體）致敏紅細胞，與相應(yīng)抗體（或抗原）特異結(jié)合，出現(xiàn)紅細胞凝集現(xiàn)象。,間接血凝試驗,.,紅細胞,抗原,致敏,致敏紅細胞,紅細胞凝集,間接血凝試驗,待測抗體,間接血凝試驗原理,.,-：紅細胞沉積于孔底 +：紅細胞沉積于孔底，周圍有散在少量凝集 +：紅細胞形成凝集，面積較小，邊緣較松散 +：紅細胞形成片層凝集，面積略多于+

6、+：紅細胞形成片層凝集，均勻布滿孔底，或邊緣皺縮如花邊狀,血凝試驗強度,.,與一般間接血凝試驗不同之處為反應(yīng)中的紅細胞是未經(jīng)致敏的受檢者新鮮紅細胞 主要試劑材料為抗紅細胞單克隆抗體，能與紅細胞結(jié)合，但不引起凝集反應(yīng) 這種抗體與另一特異性抗體連接成的雙功能抗體可用于檢測標本中的抗原 如與特異性抗原連接，則可用于檢測標本中的抗體 反應(yīng)中的標本為受檢者的全血 HIV抗體、HBV抗原檢測,自身紅細胞凝集試驗,.,膠乳凝集試驗,以聚苯乙烯膠乳為載體顆粒的間接凝集反應(yīng) 膠乳為人工合成的載體，性能比紅細胞穩(wěn)定，均一性好 但與蛋白質(zhì)結(jié)合能力以及聚集性能不如紅細胞 因此作為間接凝集反應(yīng)，膠乳凝集的敏感度不及血凝

7、試驗,.,明膠凝集試驗,以明膠為載體顆粒的間接凝集反應(yīng) 用粉紅色明膠顆粒吸附病毒抗原或重組抗原 當致敏明膠顆粒與樣品血清作用時，若血清含有抗病毒抗體則可形成肉眼可見的粉紅色凝集 常用于抗HIV-1抗體和抗精子抗體的檢測 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA),.,抗球蛋白參與的血凝試驗,.,抗球蛋白參與的血凝試驗,又稱Coombs試驗，利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細胞表面抗原結(jié)合的特異性抗體，使紅細胞凝集 用于檢測抗紅細胞不完全抗體 不完全抗體：能與顆粒抗原牢固結(jié)合，但一般不出現(xiàn)可見反應(yīng)，多為7S的IgG 診斷免疫性溶血性貧血的主要方法,.,抗球蛋白參與的血凝試驗,分為兩種方法： 直接Coombs試驗 間接Coombs試驗,.,直接Coombs試驗,檢測紅細胞上的不完