1、熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用及注意事項(xiàng)，一、基因診斷技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的地位。熒光探針定量聚合酶鏈反應(yīng)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。熒光探針定量聚合酶鏈反應(yīng)在臨床醫(yī)學(xué)中的主要問題，基因診斷的物質(zhì)基礎(chǔ)及其與其他診斷方法的區(qū)別?；蛟\斷、免疫學(xué)診斷、臨床診斷、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、DNA、轉(zhuǎn)錄、信使核糖核酸、翻譯、蛋白質(zhì)、臨床表現(xiàn)、生化診斷、臨床實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，三次生化診斷、生化分析、免疫診斷的表征、酶免疫和放射免疫分析、基因體外擴(kuò)增的本質(zhì)。1.病原體的定量檢測(cè)和藥效評(píng)價(jià)(HBV) 2。檢測(cè)腫瘤基因和腫瘤標(biāo)記物表達(dá)(mRNA) (P53) 3。遺傳病檢測(cè)(地中海貧血)4。定量檢測(cè)與疾病相關(guān)的各種蛋

2、白質(zhì)的基因表達(dá)。病原體分子診斷標(biāo)準(zhǔn)的建立，熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用，熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)在病原體檢測(cè)中的應(yīng)用，1。肝炎病毒2的定量檢測(cè)。性傳播疾病病原體的檢測(cè)。產(chǎn)前產(chǎn)后護(hù)理相關(guān)項(xiàng)目的檢測(cè)。結(jié)核分枝桿菌和呼吸道病原體的檢測(cè)。其他病原體的檢測(cè)。病毒性肝炎概述。病毒性肝炎是由各種肝炎病毒引起的一組傳染病，主要由肝臟炎癥和壞死引起。根據(jù)病毒的生物學(xué)、臨床和流行病學(xué)特征，1989年在日本東京舉行的國際肝炎研討會(huì)上將它們分為甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎和戊型肝炎。中國是一個(gè)肝炎大國，病毒性肝炎的發(fā)病率在法定傳染病管理中居首位，僅1.2億人感染了乙型肝炎病毒，每年新增感染者超過100

3、萬人，丙型肝炎的發(fā)病率也在上升。慢性乙型肝炎的病程延長。如果不及時(shí)治療，有些會(huì)發(fā)展成肝硬化甚至肝癌，嚴(yán)重危害人體健康?；蛐团c血清型的關(guān)系及其流行病學(xué)分布、病原學(xué)、乙肝檢測(cè)標(biāo)記物、乙肝表面抗原、抗-乙肝表面抗原、抗-乙肝表面抗原抗-乙肝表面抗原HBV-脫氧核糖核酸、乙肝免疫檢測(cè)與聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)果的異同、抗-乙肝表面抗原陰性與聚合酶鏈反應(yīng)陽性結(jié)果在“三大陽”中的應(yīng)用、熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)性傳播疾病，1。淋病奈瑟菌(NGH)、沙眼衣原體、解脲支原體(經(jīng)認(rèn)證)、梅毒螺旋體(經(jīng)認(rèn)證)、單純皰疹病毒(經(jīng)認(rèn)證)、乳頭瘤病毒(經(jīng)認(rèn)證)、人類免疫缺陷病毒(經(jīng)認(rèn)證)。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)診斷TORCH綜合征

4、，傳統(tǒng)TORCH病原體：TOX、other、RV、CMV、HSV，新發(fā)現(xiàn)的TORCH:麻疹v、腮腺炎v、水痘-帶狀皰疹v、腸道v、乙型肝炎v、丙型肝炎v、人乳頭瘤病毒、EBV、艾滋病病毒、人皰疹V6、人細(xì)小病毒B19等。1、組織培養(yǎng)：緩慢、費(fèi)力，陽性率低。2.血清學(xué)診斷：IgG: IgM: 1。無法定量分析。2.抗體的產(chǎn)生受到許多因素的影響。3.假陽性。3.基因診斷法原理：檢測(cè)TORCH病原體核酸的優(yōu)點(diǎn)：1 .目標(biāo)指數(shù)2。高靈敏度和特異性。3.定量指標(biāo)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)在TORCH診斷中的應(yīng)用：1 .篩查TORCH患者2。建立TORCH的分子診斷標(biāo)準(zhǔn)，用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測(cè)TOX，以

5、及TOX感染對(duì)妊娠早期孕婦的危害(多少，也可稀釋后檢測(cè)樣品；如果低于此范圍，則報(bào)告多少，如103份/毫升，但不能報(bào)告為0份/毫升或負(fù)數(shù)?？截悢?shù)與病原體的關(guān)系：拷貝數(shù)與病原體數(shù)量呈正相關(guān)。一般來說，細(xì)菌有多個(gè)拷貝，而病毒只有一個(gè)拷貝。DNA拷貝數(shù)和質(zhì)量單位：100拷貝HBV=0.04國際單位國際單位?？截悢?shù)的測(cè)定/毫升：脫氧核糖核酸/核糖核酸參考(質(zhì)粒等。)，測(cè)得的OD260值為毫克/毫升，拷貝數(shù)/毫升通過分子量計(jì)算得到。不同實(shí)驗(yàn)室獲得的結(jié)果大不相同。嘿。丙型肝炎病毒國際單位與拷貝數(shù)換算，NGI超級(jí)量化3360 1國際單位/毫升=3.4份/毫升（向美國食品及藥物管理局申請(qǐng)NGI產(chǎn)品許可證)羅氏擴(kuò)增儀2.0 1國際單位/毫升=0.9份/毫升（羅氏分子系統(tǒng))Cobas擴(kuò)增儀丙型肝炎病毒2.0 1國際單位/毫升=2.7份/毫升（羅氏分子系統(tǒng))LCx丙型肝炎病毒核糖核酸定量分析1國際單位/毫升=3.8份/毫升（雅培診斷)拜耳bDNA 3.0: 1國際單位/毫升=5.2份/毫升（拜耳，未知丙型肝炎病毒核酸樣本，甲實(shí)驗(yàn)室5000拷貝/ml，乙實(shí)驗(yàn)室10000拷貝/ml，丙實(shí)驗(yàn)室50000拷貝/ml，丁實(shí)驗(yàn)室20000拷貝/ml，實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的互通性嘿，20000 .國際單位/毫升丙型肝炎病毒核酸樣本，甲實(shí)驗(yàn)室40000拷貝/ml 1IU/ml=2拷貝/ml，乙實(shí)驗(yàn)室10000拷貝/m