1、生藥的鑒定,第一節(jié) 生藥鑒定的意義,生藥鑒定（identification of crude drug） 依據(jù)國(guó)家藥典、有關(guān)資料規(guī)定或有關(guān)專著對(duì)生藥作真實(shí)性、純度及品質(zhì)優(yōu)良度的檢定。,中藥材同名異物、同物異名，品種混亂現(xiàn)象。 木通科的木通（古稱三葉木通）、毛茛科的川木通和馬兜鈴科的關(guān)木通都統(tǒng)稱為木通。 益母草，東北叫坤草，又叫楞子棵，江蘇稱為天芝麻或田芝麻，浙江叫三角胡麻，青海叫千層塔，四川叫血母草，甘肅又叫全風(fēng)趕，廣東名紅花艾，云南又稱透骨草，而商品透骨草又有十?dāng)?shù)種之多。,一、發(fā)掘中醫(yī)藥學(xué)遺產(chǎn)，整理中藥品種,以假冒真或摻偽，特別是貴重藥材，如常用名貴中藥三七，以竹節(jié)參、菊三七、莪術(shù)、白芨、水

2、田七、藤三七、木薯淀粉偽制品等充三七銷售。牛黃為牛的膽結(jié)石或膽管、肝管結(jié)石，其中有用淀粉加工的或用果實(shí)種子包以黃土等偽充的，有用其他動(dòng)物的結(jié)石冒充的。,二、制訂生藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)生藥標(biāo)準(zhǔn)化,發(fā)掘本國(guó)資源，如我國(guó)東北地區(qū)用于治療氣管炎療效較好的滿山紅（興安杜鵑），從本地區(qū)同類植物中尋找，結(jié)果西北的小葉批杷（烈香杜鵑）、廣東的紫花杜鵑等相繼被發(fā)掘利用。 上述中藥的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用，大大改變了單獨(dú)依靠進(jìn)口藥材的局面。,三、尋找和利用新藥資源，發(fā)展中藥事業(yè),第二節(jié) 生藥鑒定的一般程序與方法,1、生藥鑒定的依據(jù)：三級(jí)標(biāo)準(zhǔn) 中國(guó)藥典： 即中華人民共和國(guó)藥典，是國(guó)家藥品的法律。 部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)： 即中華人民共和國(guó)衛(wèi)

3、生部藥品標(biāo)準(zhǔn)。 地方藥品標(biāo)準(zhǔn)： 各地區(qū)根據(jù)自己的實(shí)際情況制定出來的藥品標(biāo)準(zhǔn)。,2、生藥鑒定的取樣 藥材的取樣是指選取供鑒定用的藥材樣品。 應(yīng)注意有代表性，并有足夠數(shù)量。 取樣的代表性直接影響到檢定結(jié)果的正確性. 方法(程序)： (1)詳細(xì)記錄藥材的品名、產(chǎn)地、批號(hào)、規(guī)格、 等級(jí)、包件式樣等，注意是否與標(biāo)簽相一致。,(2)檢驗(yàn)包件的完整性和清潔程度，注意有無水跡、霉變或其他物質(zhì)污染等異常情況，作詳細(xì)記錄。凡有異常情況的包件，應(yīng)單獨(dú)檢驗(yàn)。 (3)注意取樣的代表性： 固體：包件不同地方取樣（三點(diǎn)取樣法、五點(diǎn)取樣法）。 液體：混勻或頂、中、底取樣（不易混勻者）。 貴重藥材：逐件抽樣。 (4)取樣量：（

4、三份檢驗(yàn)的量：供實(shí)驗(yàn)分析、復(fù)查、留樣保存用）。 要足夠鑒定應(yīng)用的需要，還要供復(fù)核及留樣保存使用。保存期至少1年。,第三節(jié) 生藥原植物鑒定,常用的鑒定方法有四種： 來源鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定及理化鑒定 來源鑒定：應(yīng)用植(動(dòng))物分類學(xué)知識(shí)，對(duì)中藥的來源進(jìn)行鑒定，確定其正確的學(xué)名；應(yīng)用礦物學(xué)知識(shí)，確定礦物中藥的來源，保證品種的準(zhǔn)確性。 目的：保證在應(yīng)用中品種準(zhǔn)確無誤。,1、觀察植物形態(tài)： 對(duì)于具有較完整植物體的中藥，應(yīng)注意其根、莖、葉、花、果實(shí)等部位的觀察。特別對(duì)繁殖器官可借助放大鏡或解剖顯微鏡進(jìn)行觀察。 2、核對(duì)文獻(xiàn)： 目的：根據(jù)觀察到的形態(tài)特征等，確定檢品科屬。 在核對(duì)文獻(xiàn)時(shí)，首先應(yīng)查考植物分

5、類學(xué)著作，其次再查閱具有鑒定中藥品種方面的著作。 3、核對(duì)標(biāo)本： 當(dāng)已定下科屬時(shí)，可到標(biāo)本室核對(duì)該科屬標(biāo)本，確定正確的學(xué)名。 注意：標(biāo)本室已定學(xué)名標(biāo)本必須正確可靠。,第四節(jié) 原植（動(dòng)）物鑒定,觀察植物形態(tài) 核對(duì)文獻(xiàn) 先查植物分類方面的著作，中國(guó)高等植物科屬檢索表、中國(guó)藥用植物圖鑒、中國(guó)高等植物圖鑒和有關(guān)的區(qū)域性植物志、藥物志，再查中藥品種鑒定方面的著作如全國(guó)中草藥匯編、中藥大辭典、中藥志、中藥鑒別手冊(cè)和新華本草綱要等。 核對(duì)標(biāo)本 與植物標(biāo)本室中收藏的已經(jīng)定名的植物標(biāo)本核對(duì)，以正確鑒定學(xué)名。,第三節(jié) 性狀鑒定,性狀鑒定 (macroscopical identification) 是依據(jù)對(duì)照生藥

6、的性狀特征對(duì)生藥（檢品）進(jìn)行真實(shí)性鑒別的方法。 通過人體的感官看、摸、聞、嘗及水試、火試等直觀的方法，依據(jù)生藥的性狀，包括形狀、大小、色澤、表面、質(zhì)地、斷面、氣味等特征而進(jìn)行鑒別。,又稱傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別。 該法簡(jiǎn)單、快速、易行，是保證質(zhì)量行之有效的重要鑒定方法之一，必要時(shí)可配合其它鑒定方法加以確證。 性狀鑒定適于完整的生藥及飲片的鑒別,看，就是仔細(xì)觀察生藥的形狀、大小、色澤、表面特征及斷面等，并以一些簡(jiǎn)單的術(shù)語(yǔ)來形容，例如觀察根類外形時(shí)，常用頭（根、根莖的上端）、蘆（根端短縮的根莖）、身（主根部分）、梢（根下部或支根）、須（須根或小根）、紋、皺、槽、溝、連珠（根、根莖膨大部分成連珠狀）等描述。觀察

7、斷面特征或飲片時(shí)，常用心（中心部）、菊花紋、車輪紋、云紋、網(wǎng)紋、朱砂點(diǎn)、粉塵、霜等詞形容。,“摸”，就是用手觸摸生藥，以判斷生藥的質(zhì)地及折斷現(xiàn)象，通常用硬軟、結(jié)松、輕重、韌脆、彈柔以及粉質(zhì)、角質(zhì)、油潤(rùn)、綿性、柴性、粘性等詞來形容。 “嗅”是直接嗅聞完整的生藥，或于剝碎、搓揉、折斷時(shí)所能聞到的氣味。 嘗是用舌尖接觸生藥表面，或取少量生藥入口咀嚼能感覺到的味感（劇毒藥嘗味要小心，嘗后立即吐出并漱口）。,傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別 黨參皮松肉緊有獅子盤頭，何首烏斷面有云錦紋，粉防已斷面有車輪紋，蒼術(shù)斷面有朱砂點(diǎn)。又如丹皮以皮細(xì)肉厚，亮星（丹皮酚結(jié)晶）多者為佳，甘草、黨參以味甜為佳，烏梅、木瓜、山楂以味酸為佳，黃連

8、、黃柏以色黃、味苦（含小檗堿）為佳，肉桂以富油性、香氣濃、味甜辣為佳，蓽菝、黑胡椒以味辛辣為佳等。,一、性狀鑒定的內(nèi)容,1. 形狀 (shape) 形狀是指干燥藥材的形態(tài)。觀察時(shí)一般不需要預(yù)處理，但如觀察皺縮的全草、葉或花類生藥時(shí)，可先浸濕使軟，展平。觀察某些果實(shí)種子類生藥時(shí)，如有必要可浸軟后，取下果皮或種皮，以觀察內(nèi)部特征。生藥的形狀特征，與藥用部位有關(guān)。,如根類生藥有圓柱形、圓錐形、紡錘形等；根莖類生藥中根狀莖的形狀與根類同，塊莖常呈長(zhǎng)圓形或不規(guī)則形，球莖和鱗莖常呈球形、類球形或扁球形；皮類生藥有卷筒狀、板片狀等；種子類生藥有圓球形、扁球形等。 如防風(fēng)的根莖部分稱 “ 蚯蚓頭 ” ；海馬的

9、外形為 “ 馬頭蛇尾瓦楞身 ”,2. 大小 (size) 大小系指藥材的長(zhǎng)短、粗細(xì)（直徑）和厚薄。一般應(yīng)測(cè)量較多的供試品。測(cè)量時(shí)可用毫米刻度尺。對(duì)細(xì)小的種子類生藥，如葶藶子、車前子、菟絲子等，可放在有毫米方格線的紙上，每 10 個(gè)種子緊密排列成一行，測(cè)量后求其平均值。,3. 色澤 (coluor) 包括表面和斷面的色澤。 生藥的色澤變化與生藥質(zhì)量有關(guān)。如玄參要黑、丹參要紫、茜草要紅、黃連要黃。 加工、貯藏不當(dāng)，會(huì)改變生藥的固有色澤，甚至引起內(nèi)在質(zhì)量的變化。,4. 表面特征 (surface character) 指藥材的表面所能看到的特征，如光滑、粗糙、皺紋、皮孔或毛茸及其它附屬物等，皮類生藥

10、的表面特征包括外表面和內(nèi)表面，葉類生藥包括上表面和下表面。,5. 質(zhì)地 (texture) 指折試藥材所感知的特征，一般用軟硬、堅(jiān)韌、疏松、致密、粘性或粉性、輕重、油潤(rùn)、綿性、角質(zhì)、柴性等術(shù)語(yǔ)形容。 需用未經(jīng)處理的干燥藥材，并注意藥用部位或加工方法不同的藥材質(zhì)地。如鹽附子易吸潮變軟，黑順片則質(zhì)硬而脆；含淀粉多的生藥，經(jīng)蒸煮加工干燥后，會(huì)因淀粉糊化而質(zhì)地堅(jiān)實(shí)。,形容生藥質(zhì)地的術(shù)語(yǔ)很多，如質(zhì)輕而松、斷面多裂隙，謂之 “ 松泡 ” ，如南沙參； 生藥富含淀粉，折斷時(shí)有粉塵散落，謂之 “ 粉性 ” ，如山藥； 質(zhì)地柔軟，含油而潤(rùn)澤，謂之 “ 油潤(rùn) ” ，如當(dāng)歸； 質(zhì)地堅(jiān)硬，斷面半透明狀或有光澤，謂之

11、“ 角質(zhì) ” ，如郁金等。,6. 斷面 (fracture) 包括自然折斷面和用刀橫切（或削）的平面。 折斷面主要觀察和描述折斷時(shí)的現(xiàn)象，如易折斷或不易折斷，有無粉塵散落、響聲等；折斷時(shí)的斷面特征，如平坦、纖維性、刺狀、顆粒性、裂片狀、膠絲狀，是否可以層層剝離等。,如茅蒼術(shù)易折斷，斷面放置能 “ 起霜 ” （析出白毛狀結(jié)晶），白術(shù)不易折斷，斷面放置不“起霜 ” ；甘草折斷時(shí)有粉塵散落（淀粉）；杜仲折斷時(shí)有膠絲相連；黃柏折斷面，呈纖維性；苦楝皮的折斷面，裂片狀分層；厚樸折斷面可見亮星。,橫切（削）面，觀察皮部與木部的比例、維管束排列方式、射線的分布、油點(diǎn)的多少等。 常用的術(shù)語(yǔ)有 “ 菊花心 ”

12、，如黃芪等； “ 車輪紋 ” ，如粉防己等； “ 朱砂點(diǎn) ” ，如茅蒼術(shù)等； “ 星點(diǎn) ” ，如大黃等； “ 云錦紋 ” ，如何首烏等； “ 羅盤紋 ” ，如商陸等。,7. 氣 (odour) 指藥材具有的特殊氣，一般直接嗅聞干燥的藥材，也可在折斷、破碎或揉搓時(shí)進(jìn)行，必要時(shí)可用熱水濕潤(rùn)后檢查。 藥材的氣是由于生藥中含有揮發(fā)性物質(zhì)的緣故，可作為鑒別該生藥主要依據(jù)之一，如檀香具有其固有的特異芳香氣，阿魏具強(qiáng)烈的蒜樣臭氣，白鮮皮有似羊膻氣等。,8. 味 (taste) 味是用味覺來識(shí)別藥材，又稱嘗法。有毒的藥材如需嘗味時(shí)，應(yīng)注意防止中毒。 口嘗時(shí)要取少量代表性的生藥在口里咀嚼約 1 分鐘，使舌頭的各

13、部分都接觸到藥液。 生藥的味感與生藥所含成分及含量密切相關(guān)，也是衡量生藥品質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)之一，如烏梅、木瓜、山楂均以味酸為好；黃連、黃柏以味越苦越好；甘草、黨參以味甜為好等,9. 水試 (water-based test) 水試法是利用生藥在水中或遇水發(fā)生沉浮、溶解、顏色變化、透明度、膨脹性、旋轉(zhuǎn)性、粘性、酸堿變化等特殊現(xiàn)象鑒別生藥。與生藥中所含有的化學(xué)成分或組織構(gòu)造有關(guān)。 如西紅花加水浸泡后，水液染成金黃色，其花色不褪；秦皮水浸，浸出液在日光下顯碧藍(lán)色熒光；葶藶子、車前子等加水浸泡，則種子變粘滑，且體積膨脹；熊膽粉末投入清水中，即在水面旋轉(zhuǎn)并呈黃色線狀下沉而不擴(kuò)散。,10. 火試 (fire-ba

14、sed test) 火試指用火燒、煅藥材，有些生藥用火燒，能產(chǎn)生特殊的氣味、顏色、煙霧、閃光和響聲等現(xiàn)象，作為鑒別手段之一。 如降香微有香氣，點(diǎn)燃則香氣濃烈，有油流出，燒后留有白灰；麝香少許用火燒時(shí)有輕微爆鳴聲，起油點(diǎn)，似燒毛發(fā)但無臭氣，灰為白色；海金沙易點(diǎn)燃而產(chǎn)生爆鳴聲及閃光，而松花粉及蒲黃無此現(xiàn)象。,二、各類藥材的性狀鑒別要點(diǎn),1. 根類 (roots) 根或以根為主帶有部分根莖的生藥。 根上通常沒有節(jié)和節(jié)間，一般無芽 雙子葉植物根類生藥一般呈圓柱形或圓錐形，平直或稍彎曲、扭轉(zhuǎn)、有的分枝，上端常連接短縮的根莖 ( “ 蘆頭 ”) ；表面常較粗糙，多數(shù)有木栓、皮孔及支根痕；橫斷面呈放射狀結(jié)構(gòu)

15、，形成層環(huán)大多明顯，中心常無髓，少數(shù)生藥有異型構(gòu)造。,單子葉植物根類生藥多為須根或須根膨大成塊狀根，塊狀根的形狀比較多樣，如麥冬、天冬呈紡錘形，表面常較光滑，無木栓及皮孔，斷面不呈放射狀，內(nèi)皮層環(huán)較明顯，中心有髓。,2. 根莖類 (rhizomes) 根莖類生藥是以植物的地下莖入藥，包括根狀莖 ( 常稱根莖 ) 、塊莖、鱗莖或球莖。 根莖類生藥表面有節(jié)和節(jié)間，以單子葉植物的根莖為明顯，節(jié)上常見有退化的鱗片狀葉，有時(shí)可見葉痕和芽痕，周圍或下側(cè)有不定根或根痕。蕨類植物根莖的表面常有鱗片或鱗毛，有的周圍密布整齊的葉柄基。,根莖類生藥的橫斷面，雙子葉植物根莖呈放射狀結(jié)構(gòu)，中心有明顯的髓；單子葉植物的根

16、莖不呈放射狀，內(nèi)皮層環(huán)大多明顯，環(huán)圈內(nèi)外均散有維管束小點(diǎn)；蕨類植物根莖有的中心為木部，無髓，有的木部呈完整的環(huán)圈，中心有髓，有的為數(shù)個(gè)分體中柱斷續(xù)排列成圈狀。,3. 莖類 (stems) 以植物地上莖或莖的一部分入藥，包括木本植物的枝條、木質(zhì)藤本的莖、草本植物的莖或莖髓等。 一般莖類生藥呈圓柱形，也有呈方柱形或扁圓柱形，大多有明顯的節(jié)和節(jié)間，有的節(jié)部膨大并殘存小枝痕、葉痕或芽痕，若葉痕顯著可供觀察葉序。,草質(zhì)莖干縮后因維管束或機(jī)械組織的存在，常形成縱向隆起的棱線及凹溝；木質(zhì)莖表面較粗糙，木栓層時(shí)有縱橫裂紋，皮孔易察見。 雙子葉植物莖的橫斷面呈放射狀結(jié)構(gòu)，草質(zhì)莖木部不發(fā)達(dá)，髓疏松或成空洞，木質(zhì)莖

17、木部發(fā)達(dá)，皮部?。粏巫尤~植物莖不呈放射狀結(jié)構(gòu)，維管束散列，無明顯的髓。,4. 木類 (woods) 木類生藥系采自樹木形成層以內(nèi)的部分，通常以心材入藥。 一般將木材鋸截成段，或劈成條塊或刨成薄片。 觀察其形狀、色澤、表面紋理與斑塊、質(zhì)地、氣味，以及橫切面、縱切面所呈現(xiàn)的年輪、射線等紋理。,5. 皮類 (barks) 樹干、枝條或根的形成層以外部分，分為樹皮 ( 干皮 ) 、枝皮及根皮 皮類生藥可呈板片狀、卷片狀、槽狀、筒狀或雙筒狀，外表面較粗糙，有縱橫裂紋，并有不同形狀、大小的皮孔，內(nèi)表面一般平滑，顏色較深，?？梢娍v向細(xì)紋理 ( 纖維束 ) 或網(wǎng)狀皺紋。 有的易折斷，有的不易折斷，折斷面有的平

18、坦或呈顆粒狀 ( 示有石細(xì)胞群 ) ，有的呈纖維狀或裂片狀，也有折斷時(shí)有膠質(zhì)絲狀物相連或有粉塵。,6. 葉類 (leaves or leaflets) 多以單葉入藥，也有復(fù)葉或帶葉的枝梢。 將皺縮的葉片濕潤(rùn)展平，判斷是單葉或是復(fù)葉。再觀察葉片的形狀、大小、色澤、葉端、葉基、葉緣、葉脈、上下表面，質(zhì)地以及葉柄的有無或長(zhǎng)短。 葉面的表面特征多樣，有的具較厚的角質(zhì)層，光滑無毛；有的一面或兩面被毛；有的放大鏡下可見腺鱗；有的葉片對(duì)光透視可見透明腺點(diǎn) ( 油室 )。 葉柄的平直或扭曲也有鑒別意義。,7. 花類 (flowers or inflorescences) 包括花蕾或已開放的花；或花的某一部分如

19、花瓣、花冠、柱頭、花粉；或完整的花序。 大多有鮮明的顏色和香氣，故較易鑒別。 觀察內(nèi)容包括花的狀態(tài)、全形、大小、花各部分的形狀、色澤、數(shù)目、排列、有無毛茸以及氣味等，必要時(shí)濕潤(rùn)后解剖鏡下觀察。若以花序入藥的，注意花序的類型及苞片或總苞形狀。,8. 果實(shí)類 (fruits) 包括完整的果實(shí)；果實(shí)的一部分如果皮、果核、果皮維管束；整個(gè)果穗及果柄、宿萼等。 首先觀察果實(shí)的類型、形狀、大小、顏色、頂部、基部、表面和切斷面特征，以及有無殘存苞片、花萼、雄蕊、柱基及果柄。 表面有的具光澤或被粉霜，有的有隆起的棱線，有的有凹下的油點(diǎn)，有的著生毛茸。 對(duì)完整的果實(shí)，注意所含種子的數(shù)目、形狀、大小、色澤及表面特

20、征。,9. 種子 (seeds) 大多用完整的種子，少數(shù)用種皮、種仁，或以附屬物假種皮入藥。 首先觀察種子的形狀、大小、顏色及表面特征，如種臍、種脊、合點(diǎn)、珠孔位置和形狀，各種紋理、突起、毛茸、種阜的有無以及縱橫剖面等。剝?nèi)シN皮后，注意有無胚乳。,10. 全草 (herbs) 以草本植物的全株入藥，也有將草本植物的地上部分或帶葉的花枝、果枝歸入全草類的，其中少數(shù)為灌木的草質(zhì)莖。 全草類生藥的葉大多干縮或破碎，可濕潤(rùn)后攤平觀察。若花、果實(shí)完整，可依植物鑒定的方法進(jìn)行觀察；若殘缺，可根據(jù)各部分形態(tài)，參照有關(guān)類別進(jìn)行觀察。,11. 動(dòng)物類 (animals) 以動(dòng)物全體或其器官或代謝產(chǎn)物、分泌物入藥

21、， 動(dòng)物基源可以通過文獻(xiàn)核對(duì)、標(biāo)本核對(duì)來進(jìn)行形態(tài)觀察，如肌肉、骨、皮膚、毛、角等各部分。,12.礦物類 (minerals) 主要觀察其結(jié)晶形狀、結(jié)晶習(xí)性、透明度、顏色、光澤、硬度、脆性、延展性、彈性、磁性、比重、解理、斷口、氣味等 需靠理化試驗(yàn)等方法鑒別,藥材飲片的鑒別 飲片改變了形狀、大小、顏色，甚至氣味，機(jī)器切片也改變了原手工飲片（如圓片、斜片、平片、節(jié)片等）的規(guī)則性，應(yīng)結(jié)合完整藥材的特征，特別是橫切面、表面和氣味的特征來對(duì)比識(shí)別。,第四節(jié) 顯微鑒定,顯微鑒定 (microscopical identification) 是指利用顯微鏡，依據(jù)對(duì)照生藥的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物的特征，對(duì)生藥（檢

22、品）進(jìn)行真實(shí)性鑒別的方法。,顯微鑒定通常適用于性狀鑒定不易識(shí)別的生藥、性狀相似的多來源生藥、破碎生藥、粉末生藥以及用粉末生藥制成的中藥成方制劑。,一、對(duì)照生藥的顯微特征,對(duì)照生藥的顯微特征，是依據(jù)對(duì)照生藥經(jīng)顯微觀察而獲得的生藥顯微特征，經(jīng)生藥學(xué)研究者制訂并記錄于國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)、各種書籍和文獻(xiàn)中，是藥材顯微鑒定的依據(jù)。 顯微鑒定一般依據(jù)對(duì)照生藥的顯微特征。,（一）組織鑒定( histological identification) 是通過觀察植物器官的切片，以生藥的組織構(gòu)造、 細(xì)胞形狀和內(nèi)含物形態(tài)等特征來鑒定生藥。 適于類似品、混淆品、代用品、偽品或同屬多來源藥材的對(duì)比鑒別。,二、顯微鑒定的內(nèi)容,

23、用于完整藥材或能夠滿足制作切片條件的飲片的鑒定。 一般來說，組織鑒定對(duì)不同科屬來源的藥材鑒別比較容易，對(duì)于相同科屬來源的藥材鑒別相對(duì)較困難。,（二）粉末鑒定 (powder identification) 通過生藥的粉末制片，觀察生藥的細(xì)胞、內(nèi)含物形態(tài)特征來鑒定生藥的真?zhèn)巍?用于粉末藥材、外形較大或組織構(gòu)造無鑒別特征的藥材、破碎藥材以及粉末性的中成藥的鑒別。,（三）顯微化學(xué)反應(yīng) (micro-chemcal reaction) 是將生藥的干粉、手切片或浸出液少量，置于載玻片上，滴加某些化學(xué)試劑使產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶，或產(chǎn)生特殊的顏色，在顯微鏡下觀察反應(yīng)結(jié)果，從而進(jìn)行鑒定。 主要用于細(xì)胞壁、糖類、蛋白

24、質(zhì)、草酸鹽、碳酸鹽和各類化學(xué)成分的鑒別。,1 細(xì)胞壁性質(zhì)的鑒定 木質(zhì)化細(xì)胞壁加間苯三酚試液 12 滴，稍放置，加鹽酸 l 滴，因木化程度不同，顯紅色或紫紅色。 木栓化或角質(zhì)化細(xì)胞壁遇蘇丹 試液，稍放置或微熱，呈橘紅色至紅色。 纖維素細(xì)胞壁遇氯化鋅碘試液，或先加碘試液濕潤(rùn)后，再加硫酸溶液顯藍(lán)色或紫色。,2. 細(xì)胞內(nèi)含物性質(zhì)的鑒定 淀粉粒遇碘試液顯藍(lán)色或藍(lán)紫色。 糊粉粒，加碘試液，顯棕色或黃棕色；加硝酸汞試液顯磚紅色。 脂肪油、揮發(fā)油或樹脂，加蘇丹 試液呈橘紅色、紅色或紫紅色；加 90 乙醇，脂肪油一般不溶解，揮發(fā)油則溶解。,菊糖加 10 - 萘酚的乙醇溶液，再加硫酸，顯紫紅色并很快溶解。 粘液細(xì)

25、胞遇釕紅試液顯紅色。 草酸鈣結(jié)晶在裝片時(shí)加入硫酸溶液逐漸溶解，并析出針狀硫酸鈣結(jié)晶。 碳酸鈣結(jié)晶（鐘乳體）加入稀鹽酸溶解，同時(shí)有氣泡產(chǎn)生。,3. 細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分的鑒定 選擇合適的化學(xué)試劑，如肉桂粉末加氯仿 23 滴，略浸漬，速加 2% 鹽酸苯肼 1 滴，可見黃色針狀或桿狀結(jié)晶（示桂皮醛反應(yīng)）； 檳榔粉末酸性水浸液滴于玻片上，加碘化鉍鉀試液，即發(fā)生渾濁，放置后可見石榴紅色球形或方形結(jié)晶（示檳榔堿反應(yīng)）。,利用顯微化學(xué)定位試驗(yàn)，確定生藥有效成分在生藥組織構(gòu)造中的部位，如北柴胡橫切片加 1 滴無水乙醇 - 濃硫酸 (1:1) 液，在顯微鏡下觀察可見木栓層、栓內(nèi)層和皮層顯黃綠色 藍(lán)綠色，示北柴胡的有效

26、成分柴胡皂甙存在于這些部位。,4. 微量升華 生藥中某些化學(xué)成分，在一定溫度下升華，在顯微鏡下觀察其結(jié)晶形狀、顏色及化學(xué)反應(yīng)作為鑒別特征。 大黃粉末升華物有黃色針狀（低溫）、枝狀和羽狀（高溫）結(jié)晶，在結(jié)晶上加堿液呈紅色，進(jìn)一步確證其為蒽醌類成分。 薄荷的升華物為無色針簇狀結(jié)晶（薄荷腦），加濃硫酸 2 D及香草醛結(jié)晶少許，顯黃至橙黃色，再加DW 1D變紫紅色。,三、顯微鑒定的方法,（一）制片 包括組織制片、表皮制片和粉末制片 。 組織制片的方法主要有徒手制片、滑走制片、冰凍制片及石蠟制片等。對(duì)植物類中藥，如根、根莖、莖藤、皮、葉等類，一般制作橫切片觀察，必要時(shí)制縱切片；果實(shí)、種子類須制作橫切片及

27、縱切片觀察；木類藥材須制作橫切片、徑向縱切片及切向縱切片三個(gè)面觀察。,表皮制片系將表皮細(xì)胞組織制成顯微觀察片的一種方法 適用于觀察葉片、花瓣、花萼和其它器官表皮的細(xì)胞形狀、氣孔、腺毛、非腺毛的類型和角質(zhì)層的紋理以及各種細(xì)胞內(nèi)含物等的顯微特征。,粉末制片用于觀察藥材的組織、細(xì)胞及細(xì)胞后含物特征，制片時(shí)根據(jù)觀察目的物的不同選用斯氏液或水合氯醛制片。 有時(shí)為了觀察某些細(xì)胞組織如纖維、石細(xì)胞、導(dǎo)管等，可制解離組織片。,（二）顯微觀察與結(jié)果記錄 1. 組織特征的觀察與描述 組織特征特別是橫切面組織特征的觀察與描述，一般是由外向內(nèi)依次進(jìn)行。 在觀察與描述中，首先注意其各部分的位置、形態(tài)、有無其它組織分布等

28、特征。其次應(yīng)注意各種細(xì)胞及其內(nèi)含物的顏色、形狀、大小。,2. 粉末特征的觀察與描述 粉末制片在顯微鏡下觀察時(shí)，可見到多種組織碎片、細(xì)胞及內(nèi)含物的特征。 描述方法同上，在描述順序上，一般可以按照 “ 先多后少 ” 或 “ 先特殊后一般 ” 的原則進(jìn)行。,3. 顯微測(cè)量 指在顯微鏡下用目鏡測(cè)微尺測(cè)量細(xì)胞和后含物的大小。先將目鏡測(cè)微尺用載臺(tái)測(cè)微尺標(biāo)化，計(jì)算出每一小格的 m 數(shù)，應(yīng)用時(shí)將測(cè)得目的物的小格數(shù)，乘以每一小格的 m 數(shù)，即得所欲測(cè)定物的大小。 測(cè)量微細(xì)物體時(shí)宜在高倍鏡下進(jìn)行，而測(cè)量較大物體時(shí)可在低倍鏡下進(jìn)行。,4. 結(jié)果記錄 除用文字來描述之外，均需附圖說明。 附圖可用顯微繪圖法繪制，也可用

29、顯微攝影技術(shù)攝制。 顯微攝影是利用顯微照相設(shè)備將顯微鏡下觀察的影像攝錄下來的一項(xiàng)技術(shù)。 目前計(jì)算機(jī)圖像采集軟件較多，一般 多 具有靜態(tài)圖 像 、動(dòng)態(tài)圖 像 及連續(xù)圖像采集功能， 數(shù)碼顯微攝影圖像清晰逼真，操作方便快捷， 便于存儲(chǔ)與編輯，且還具圖像編輯、顯微測(cè)量功能。,偏光顯微鏡的應(yīng)用,偏光顯微鏡（polarizing microscope）：利用自然光在通過各向異性透明體時(shí)，產(chǎn)生偏振光的原理。 樣品為各向異性的物質(zhì)時(shí)，呈現(xiàn)不同色彩，樣品各向同性時(shí)，呈現(xiàn)暗視野 常用于淀粉和晶體物質(zhì)的觀察，亦用于具有各向異性的中藥粉末的觀察。,掃描電子顯微鏡,分辨率高 圖像呈現(xiàn)表面立體結(jié)構(gòu) 同科屬種間的表面結(jié)構(gòu)鑒

30、別,四、各類藥材的顯微觀察要點(diǎn),（一）根類藥材 1. 組織構(gòu)造 （1）雙子葉植物根類 多數(shù)為次生構(gòu)造，表層為木栓組織；皮層狹窄；韌皮部較發(fā)達(dá)或較狹窄；形成層環(huán)多明顯；木質(zhì)部由導(dǎo)管、管胞、木纖維、木薄壁細(xì)胞及木射線組成；中央大多無髓，少數(shù)有明顯的髓部。,少數(shù)雙子葉植物根類藥材為初生構(gòu)造，皮層寬，中柱小，木質(zhì)部束及韌皮部束數(shù)目少，相間排列，初生木質(zhì)部呈星芒狀，一般無髓。,有些雙子葉植物根有異常三生構(gòu)造，例如何首烏根的形成層環(huán)外方有數(shù)個(gè)異常復(fù)合維管束。,（2）單子葉植物根類 單子葉植物根類藥材一般無木栓組織，其表皮細(xì)胞外壁有時(shí)增厚，也有表皮發(fā)育成數(shù)列根被細(xì)胞，壁木栓化或木化；皮層寬廣，占根的大部分；

31、內(nèi)皮層凱氏點(diǎn) ( 帶 ) 通常明顯；中柱??；木質(zhì)部束及韌皮部束數(shù)目多，相間排列成一圈；中央髓部大多為薄壁細(xì)胞或細(xì)胞壁木化增厚。,粉末特征 除葉肉組織外，其它細(xì)胞、組織碎片都可能存在。 根的木栓組織多見，應(yīng)注意木栓細(xì)胞表面觀的形狀、顏色、壁的厚度。,導(dǎo)管一般較粗，應(yīng)注意其類型、直徑、導(dǎo)管分子的長(zhǎng)度及末端壁的穿孔、紋孔的形狀及排列等。,石細(xì)胞應(yīng)注意形狀、大小、細(xì)胞壁增厚形態(tài)和程度、紋孔形狀及大小、孔溝密度等特征。,1.巴戟天 2.川烏 3.黨參,分泌組織觀察時(shí)應(yīng) 注意分泌細(xì)胞、分泌腔（室）、分泌管（道）及乳汁管的類型 、分泌細(xì)胞的形狀、分泌物的顏色、周圍細(xì)胞的排列及形態(tài)等特征。,結(jié)晶大多為草酸鈣結(jié)

32、晶，其次還有菊糖、硅質(zhì)晶體等，應(yīng)注意結(jié)晶的類型、大小、排列及含晶細(xì)胞的形態(tài)等。,注意淀粉粒的多少、形狀、類型、大小、臍點(diǎn)形狀及位置、層紋等特征。,（二）根莖類藥材 1. 組織構(gòu)造 蕨類植物根莖的最外層，多為厚壁性的表皮及下皮細(xì)胞，基本薄壁組織較發(fā)達(dá)。中柱的類型，有的是原生中柱，木質(zhì)部 ( 只有管胞 ) 位于中心，韌皮部位于四周，外有中柱鞘及內(nèi)皮層；有的為網(wǎng)狀中柱，在橫切面可見數(shù)個(gè)分體中柱斷續(xù)排列成環(huán)狀，每一分體中柱為一原生中柱狀。,雙子葉植物根莖大多有木栓組織；皮層中有時(shí)可見根跡維管束；中柱維管束無限外韌型，環(huán)列；中心有髓。少數(shù)種類有三生構(gòu)造。,單子葉植物根莖的最外層多為表皮，皮層中有葉跡維管

33、束，內(nèi)皮層大多明顯，中柱中散有多數(shù)有限外韌型維管束或周木型維管束。較粗的根莖、塊莖等的內(nèi)皮層不明顯。鱗莖的鱗葉表皮可見氣孔。 有的根莖類藥材有油室或油細(xì)胞；有的含草酸鈣針晶束，針晶束大多存在于粘液細(xì)胞中。此外，對(duì)厚壁組織、導(dǎo)管以及草酸鈣結(jié)晶的類型等均應(yīng)注意。,2. 粉末特征 與根類相似。注意鱗莖、塊莖、球莖常含多量較大的淀粉粒，其形狀、大小、臍點(diǎn)、層紋以及復(fù)粒、半復(fù)粒、多臍點(diǎn)單粒等特征是鑒別的重要依據(jù)。鱗莖的鱗葉表皮常可察見氣孔。 單子葉植物根莖較易見到環(huán)紋導(dǎo)管。 蕨類植物根莖只有管胞。,（三）莖藤類藥材 1. 組織構(gòu)造 雙子葉植物草質(zhì)莖大多有表皮，應(yīng)注意細(xì)胞形狀、外壁增厚、氣孔及有無毛茸等；

34、皮層為初生皮層，其外側(cè)常分化為厚角組織；中柱鞘常分化為纖維或夾雜有石細(xì)胞；束中形成層明顯；次生韌皮部大多成束狀或板狀；髓較大。,木質(zhì)莖最外為木栓組織；皮層多為次生皮層；中柱鞘厚壁組織多連續(xù)成環(huán)或斷續(xù)；形成層環(huán)明顯；次生韌皮部及次生木質(zhì)部呈筒狀結(jié)構(gòu)；射線較窄，細(xì)胞壁常木化；髓較小。 木質(zhì)藤本莖的木栓層較厚，有的有落皮層；維管組織被射線分隔成明顯的放射狀紋，導(dǎo)管孔較大，有髓周厚壁細(xì)胞等,單子葉植物莖最外層為表皮，表皮下如有下皮厚壁細(xì)胞常為鑒別特征，其內(nèi)基本組織中散生多數(shù)有限外韌維管束，中央無髓。 裸子植物莖的木質(zhì)部主為管胞，通常無導(dǎo)管，但麻黃莖的構(gòu)造與雙子葉植物草質(zhì)莖類同。,2. 粉末特征 除無葉

35、肉組織外，其它組織一般都可能存在。,（四）皮類藥材 1. 組織構(gòu)造 包括木栓組織、皮層及韌皮部 木栓組織應(yīng)注意木栓細(xì)胞的層數(shù)、顏色、細(xì)胞壁的增厚程度等。 皮層一般較狹窄，通常由栓內(nèi)層形成的次生皮層。 韌皮部占皮的絕大部分，韌皮部及皮層往往有厚壁組織（纖維或石細(xì)胞）存在；有的皮類藥材的韌皮部中，纖維或石細(xì)胞切向集結(jié)成若干層帶 ( 硬韌部 ) ，與篩管群、薄壁組織 ( 軟韌部 ) 相間排列。,皮類藥材常有樹脂道、油細(xì)胞、乳汁管等分泌組織以及草酸鈣結(jié)晶。 多數(shù)皮類藥材含淀粉粒，但較微小。,2. 粉末特征 主要有木栓細(xì)胞、纖維、石細(xì)胞、分泌組織及草酸鈣結(jié)晶等。 不應(yīng)有木質(zhì)部的組織，如導(dǎo)管、管胞等。,（

36、五）木類藥材 1. 組織構(gòu)造 橫切面主要觀察木射線寬度(細(xì)胞列數(shù))、密度，導(dǎo)管與木薄壁細(xì)胞的比例及分布型式，導(dǎo)管和木纖維的形狀、直徑等； 切向縱切面主要觀察木射線的寬度、高度及類型，木射線在切向縱切面呈梭形，其寬度是指最寬處的細(xì)胞數(shù)，高度是指從上至下的細(xì)胞數(shù)，同時(shí)觀察導(dǎo)管、木纖維等； 徑向縱切面：木射線的高度及細(xì)胞類型，木射線在徑向縱切面呈橫帶狀，與軸向的導(dǎo)管、木纖維、木薄壁細(xì)胞相垂直，同時(shí)觀察導(dǎo)管的類型，導(dǎo)管分子的長(zhǎng)短、直徑及有無侵填體，木纖維的類型及大小、壁厚度、紋孔等。,2. 粉末特征 以導(dǎo)管、木纖維、木薄壁細(xì)胞、木射線細(xì)胞的形態(tài)特征，以及細(xì)胞后含物為主要鑒別點(diǎn)。,（六）葉類藥材 1.

37、組織構(gòu)造 通常作橫切片觀察表皮、葉肉及葉脈的組織構(gòu)造，要注意上、下表皮細(xì)胞的形狀、大小、外壁、氣孔、角質(zhì)層厚度，以及有無內(nèi)含物，特別是毛茸的類型及其特征。,2. 葉的表面制片 主要觀察表皮細(xì)胞、氣孔及各種毛茸的全形，以及葉肉組織的某些鑒別點(diǎn)，如草酸鈣結(jié)晶類型及其分布等。 毛茸為葉類藥材的重要鑒別特征，應(yīng)注意觀察非腺毛、腺毛的細(xì)胞形狀、細(xì)胞壁的厚度及其表面特征,另外，觀察葉的表面制片，可用以測(cè)定柵表細(xì)胞比、氣孔數(shù)、氣孔指數(shù)及脈島數(shù)，對(duì)鑒別親緣相近的同屬植物的葉，有一定參考意義。 3. 粉末特征 與葉的表面制片基本一致，但毛茸多碎斷，粉末中還可見到葉片的橫斷面及晶體。,（七）花類藥材 1. 花類藥

38、材的顯微鑒定 根據(jù)不同的目的物，將苞片、花萼、花冠、雄蕊或雌蕊等分別作表面制片，或?qū)⑼暾幕ㄗ鞅砻嬷破^察。 苞片、花萼的構(gòu)造，與葉相似。 花粉粒為花類藥材的重要特征，應(yīng)注意其形狀、大小、萌發(fā)孔狀況、外壁雕紋等。,（八）果實(shí)類藥材 組織構(gòu)造 一般觀察果皮的組織特征。由子房壁分化和增大形成的真果的果皮，可分為外果皮、中果皮及內(nèi)果皮，內(nèi)、外果皮相當(dāng)于葉的上、下表皮，中果皮相當(dāng)于葉肉。 外果皮為 1 列表皮細(xì)胞，觀察注意點(diǎn)同葉。中果皮為多列薄壁細(xì)胞，有細(xì)小維管束散布；中果皮中常有分泌組織及厚壁組織分布。內(nèi)果皮的變異較大，有的為 1 列薄壁細(xì)胞，有的散在石細(xì)胞或結(jié)晶細(xì)胞層等。,2. 粉末特征 外果皮：

39、細(xì)胞形狀、垂周壁的增厚狀況、角質(zhì)層紋理以及非腺毛、腺毛的有無及其特征； 中果皮：分泌組織、厚壁組織及結(jié)晶的特征； 內(nèi)果皮：細(xì)胞的形態(tài)與類型。含有種子的果實(shí)類藥材，注意種皮、胚乳組織等特征。,（九） 種子類藥材 1. 組織構(gòu)造 著重觀察種皮的構(gòu)造。有的種皮只有 1 列細(xì)胞，較多的種皮由數(shù)種不同的細(xì)胞組織構(gòu)成。 種子的外胚乳、內(nèi)胚乳或子葉細(xì)胞的形狀、細(xì)胞壁增厚狀況，以及所含脂肪油、糊粉?；虻矸哿５龋灿需b別意義。,2. 粉末特征 種皮的表面觀及斷面觀形態(tài)特征。 種皮支持細(xì)胞、油細(xì)胞、色素細(xì)胞的有無和形態(tài)； 有無毛茸、草酸鈣結(jié)晶、淀粉粒、分泌組織碎片等。,（十）全草類藥材 大多為草本植物的地上部分，

40、少數(shù)為帶根的全株。 全草類包括了草本植物藥的各個(gè)部位，其顯微鑒定可參照以上各類藥材的鑒別特征。,（十一）菌類藥材 大多以子實(shí)體或菌核的形式入藥，無淀粉粒和高等植物的顯微特征。 觀察時(shí)應(yīng)注意菌絲的形狀、有無分枝、顏色、大小；團(tuán)塊、孢子的形態(tài)；結(jié)晶的有無及形態(tài)、大小與類型。,（十二）動(dòng)物類藥材 動(dòng)物全體應(yīng)注意皮膚碎片細(xì)胞的形狀與色素顆粒的顏色，肌纖維的形態(tài)，剛毛的形態(tài)、大小及顏色，體壁碎片顏色、表面紋理及菌絲體，骨碎片，骨陷窩的形態(tài)等。帶有鱗片的動(dòng)物體還應(yīng)注意鱗片角質(zhì)增厚特征。,分泌物和病理產(chǎn)物應(yīng)注意團(tuán)塊的顏色及其包埋物的性質(zhì)特征，表皮脫落組織，毛茸及其它細(xì)胞的形狀、大小、顏色等特征。 角甲類藥材

41、應(yīng)注意碎塊的形狀、顏色、橫斷面和縱斷面觀的形態(tài)特征及色素顆粒顏色等 。,（十三）礦物類藥材 一般無植（動(dòng)）物顯微特征 晶體的大小、直徑或長(zhǎng)徑 晶型的棱角、銳角或鈍角 色澤、透明度、表面紋理及方向、光潔度 偏光顯微鏡下的特征,（十四）中成藥顯微鑒別要點(diǎn) 了解組方生藥、劑型和制法 根據(jù)處方明確專屬特征,第五節(jié) 理化鑒定,生藥的理化鑒定（physical and chemical identification）是利用物理的或化學(xué)的方法，對(duì)生藥中所含主要化學(xué)成分或有效成分進(jìn)行定性定量分析。 常用的鑒定方法有物理常數(shù)法、化學(xué)反應(yīng)法、光譜法和色譜法。,一、物理常數(shù),物理常數(shù)包括相對(duì)密度、旋光度、折光率、凝

42、點(diǎn)和熔點(diǎn)等；,二、一般理化鑒別,呈色反應(yīng) 沉淀反應(yīng) 泡沫反應(yīng)和溶血指數(shù)的測(cè)定 微量升華 顯微化學(xué)反應(yīng) 熒光分析,三、色譜法,由于現(xiàn)代色譜分析技術(shù)具有分離和分析兩種功能，即能排除復(fù)雜組分間的相互干擾，逐個(gè)將組分進(jìn)行定性和定量分析，因此，現(xiàn)代色譜分析技術(shù)非常適合成分復(fù)雜的生藥的有效性評(píng)價(jià)。,薄層色譜法(thin layer chromatography, TLC) TLC用于鑒別、檢查或含量測(cè)定。 中國(guó)藥典 (2005 版 ) 一部TLC用于定性鑒別的達(dá) 1523 項(xiàng)，用于含量測(cè)定的為 45 項(xiàng)，其中有 4 種藥材采用薄層掃描法定量。,氣相色譜法(gas chromatography, GC) 采

43、用氣體為流動(dòng)相 流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。物質(zhì)或其衍生物氣化后，被載氣帶入色譜柱進(jìn)行分離，各組分先后進(jìn)入檢測(cè)器，用記錄儀、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號(hào)。 中國(guó)藥典 (2005 版 ) 氣相色譜法用于中藥分析的品種有 47 種，其中有 4 種藥材用此法定量。另外還有兩種藥材的農(nóng)藥殘留也是用 GC 法分析,高效液相色譜法 (high performance liquid chromatography, HPLC) HPLC-UV，無UV吸收的皂苷類HPLC-ELSD分析方法 中國(guó)藥典 (2005 版）一部應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定含量的中藥品種達(dá) 479 種，涉及 518 項(xiàng)，

44、其中藥材就有 98 種 。,四、分光光度法,通過測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光吸收度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。 朗伯 - 比爾定律： A = ECL 式中 A 為吸收度 ； E 為吸收系數(shù)，即單位濃度、單位液層厚度的吸收度數(shù)值； C 為溶液濃度； L 為液層厚度。,紫外分光光度法 可見分光光度法 紅外光譜法 專屬性強(qiáng)；標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照；樣品純凈 原子吸收分光光度法,五、其它方法,（一）NMR（1H，13C, DEPT, 1H-1H COSY, HMQC, HMBC, NOESY, ROESY） （二） MS（EIMS, FABMS, ESIMS, FDMS, CIM

45、S） （三）指紋圖譜,第六節(jié) DNA分子遺傳標(biāo)記鑒定,以形態(tài)學(xué)為主的生藥鑒定方法，還不能解決所有生藥的真實(shí)性鑒定問題，特別是對(duì)同屬多來源生藥及種內(nèi)的一些變異 ( 道地藥材 ) 、動(dòng)物藥等難以專屬性地鑒定。 學(xué)科發(fā)展的需要以及分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展使 DNA 分子遺傳標(biāo)記鑒別生藥應(yīng)運(yùn)而生。,生藥 DNA 分子遺傳標(biāo)記鑒定：是指通過比較生藥間 DNA 分子遺傳多樣性差異來鑒別生藥基源，確定其學(xué)名的方法。 在細(xì)胞分裂的過程中遺傳物質(zhì)由親代遺傳給子代。 遺傳物質(zhì)存在于細(xì)胞核中，細(xì)胞核中的染色體是遺傳基因的載體，在由 DNA 、 RNA 和蛋白質(zhì)組成的染色體中， DNA 是絕大多數(shù)生物 的遺傳物質(zhì)。,DNA 分子標(biāo)記技術(shù)大致可分為三類： 一是以電泳技術(shù)和分子雜交技術(shù)為核心的 RFLP 等技術(shù)； 二是以電泳技術(shù)和 PCR 技術(shù)為核心的 RAPD 、 AP-PCR 等 DNA 分子指紋技術(shù)和 DNA 測(cè)序技術(shù)等； 三是前兩類技術(shù)結(jié)合的 AFLP 、 RFLP-PCR 、 RAPD-PCR 和基因芯片等。,1. 限制性內(nèi)切酶酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性（ RFLP，restriction fragment length polymorphism ）,生物在進(jìn)化過程中，由于種種原因引起的基因突變和 DNA 分子結(jié)構(gòu)重排，造成了分子內(nèi)核苷酸排列順序的改變，在一處或幾處發(fā)生某種差異，當(dāng)這種改變（即使是很