1、第14章 分枝桿菌、放線菌與諾卡菌河北醫(yī)科大學(xué) 趙建宏,概 述,分枝桿菌與放線菌屬放線菌目（Actinomycetates） 分枝桿菌屬（Mycobacterium）是一類細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲專性需氧性桿菌。該菌一般認(rèn)為革蘭染色陽(yáng)性。多數(shù)細(xì)菌在生長(zhǎng)的一定時(shí)期抵抗酸-醇（acid-alcohol-fast），故又稱抗酸桿菌（acid-fast bacillus） 放線菌（Actinomyces）是一群在生物學(xué)特性上與細(xì)菌類同的原核細(xì)胞型微生物，與分枝桿菌、棒狀桿菌等有著親緣關(guān)系,放線菌是多數(shù)不致病，對(duì)人致病的主要有放線菌屬和諾卡菌屬。 前者為厭氧或微需氧菌，細(xì)胞壁中不含分枝菌酸，多引起內(nèi)源性感染。 后者

2、為需氧菌，細(xì)胞壁中含有分枝菌酸，非人體正常菌群的成員，常引起外源性感染。,概 述,放線菌與諾卡菌的區(qū)別,結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB） 簡(jiǎn)稱結(jié)核桿菌 人和動(dòng)物結(jié)核病的病原菌,第一節(jié) 結(jié)核分枝桿菌,MTB包括 人結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis） 牛分枝桿菌（M.bovis） 非洲分枝桿菌（M.africanum） 坎納分枝桿菌（M.canettii） 田鼠分枝桿菌(M.microti)等 前四種對(duì)人類致病，其中人型MTB感染率最高,一、分 類,二、臨床意義,大約1/3的人口已感染MTB 有2000萬(wàn)活動(dòng)性結(jié)核病患者 每年新發(fā)病900萬(wàn)人，

3、死于結(jié)核病300萬(wàn)人 近年來(lái)，AIDS的發(fā)病率上升，AIDS患者又極易患結(jié)核病，結(jié)核病已成為威脅人類健康的一個(gè)嚴(yán)重的全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題,WHO已把結(jié)核病與AIDS、瘧疾一起列為人類的最主要?dú)⑹?二、臨床意義,二、臨床意義,(一) 所致疾病 通過(guò)呼吸道、消化道和損傷的皮膚等多途徑 感染機(jī)體，引起多種臟器的結(jié)核病，其中以肺結(jié) 核為多見(jiàn) (二)免疫性 有菌免疫或稱傳染性免疫 細(xì)胞免疫 遲發(fā)型超敏反應(yīng),二、臨床意義,(三) 變異 結(jié)核分枝桿菌易發(fā)生形態(tài)、菌落、生長(zhǎng)溫度、毒力以及耐藥性的變異 卡介苗（Bacillus Calmette-Gurin，BCG）是有毒力的牛型結(jié)核分枝桿菌在甘油、膽汁和馬鈴薯的

4、培養(yǎng)基中經(jīng)13年230次傳代而獲得的減毒變異株 現(xiàn)已廣泛用于人類結(jié)核病的防治,二、臨床意義,(四)耐藥性 對(duì)常見(jiàn)抗菌藥物天然耐藥 多重耐藥結(jié)核病(multiple-drug resistance tuberculosis，MDRTB)是指對(duì)2種或2種以上的抗結(jié)核藥產(chǎn)生耐藥性的結(jié)核菌感染。臨床治療相當(dāng)棘手，死亡率很高,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（一）基本特性 結(jié)核分枝桿菌尚未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生內(nèi)毒素、外毒素及侵襲性酶 致病性可能與細(xì)菌在組織細(xì)胞內(nèi)大量繁殖引起的炎癥、代謝物質(zhì)的毒性以及菌體成分引起的免疫損傷有關(guān) 結(jié)核分枝桿菌的致病物質(zhì)主要是莢膜、脂質(zhì)和蛋白質(zhì),三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（二）標(biāo)本采集 據(jù)感染部位的不同采集不

5、同的標(biāo)本 疑肺結(jié)核：收集清晨第一口痰，清潔干燥的容器內(nèi)送檢 疑泌尿系結(jié)核：清晨一次全部尿量或24小時(shí)尿沉淀1015ml送檢，必要時(shí)作無(wú)菌導(dǎo)尿送檢（診斷泌尿道結(jié)核通常需35份標(biāo)本） 采集膿液應(yīng)直接從潰瘍處取膿汁或分泌物,深部膿腫用無(wú)菌注射器抽取送檢 其他：無(wú)菌抽取腦脊液、胸水、腹水及關(guān)節(jié)液等盛無(wú)菌試管送檢。腦脊液標(biāo)本靜置后，表面可有細(xì)薄凝塊，取凝塊作涂片或接種培養(yǎng),三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）標(biāo)本直接檢查 形態(tài)學(xué)檢查 （1）直接涂片染色鏡檢 （2）濃縮集菌涂片檢查法 2. 核酸檢測(cè),形態(tài)學(xué)檢查,齊-尼染色（Ziehl-Neelsen technique）是常用的抗酸染色法，染色后結(jié)核分枝桿菌呈紅色，

6、背景呈藍(lán)色,形態(tài)學(xué)檢查,用熒光染料金胺“O”染色，在熒光顯微鏡下菌體呈橘黃色,涂片鏡檢的報(bào)告方式,用PCR法快速診斷MTB感染 PCR法檢測(cè)DNA特異性更強(qiáng)，敏感性更高 PCR須按法規(guī)要求規(guī)范操作，應(yīng)防止標(biāo)本污染出現(xiàn)假性結(jié)果,核酸檢測(cè),三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（四）分離培養(yǎng)與鑒定 培養(yǎng)特性 專性需氧 35CO2能促進(jìn)其生長(zhǎng) 營(yíng)養(yǎng)要求高:須在含血清、卵黃、馬鈴薯、甘油以及含某些無(wú)機(jī)鹽類的特殊培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)良好。常用羅氏培養(yǎng)基 最適生長(zhǎng)溫度為3537，最適pH6.56.8 1418h分裂1次，在固體培養(yǎng)基上25周才出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的菌落 典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，如菜花樣

7、,2.分離培養(yǎng) 標(biāo)本接種于選擇性培養(yǎng)基中(常用羅氏，所含的孔雀綠或青霉素可抑制雜菌生長(zhǎng)) 37，510CO2培養(yǎng)8周 結(jié)核桿菌出現(xiàn)干燥呈顆粒狀、灰白色菌落 涂片染色為抗酸陽(yáng)性,Bactec TB 960快速培養(yǎng)系統(tǒng),3D-120型,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（四）分離培養(yǎng)與鑒定 3. 菌種鑒定 (1) 生化反應(yīng) （2）噬菌體鑒定法 （3）分子生物法菌種鑒定 (4)高效液相色譜（HPLC）檢測(cè)分枝菌酸,生化反應(yīng)-煩瑣、費(fèi)時(shí)（ 48 周）,影響因素多,結(jié)核分枝桿菌不發(fā)酵糖類 能產(chǎn)生觸酶 人型MTB能合成煙酸，還原硝酸鹽，耐受噻吩-2-羧酸酰肼，而牛型MTB則不能 人型和牛型的毒株中性紅試驗(yàn)均陽(yáng)性，無(wú)毒株則

8、為陰性，并失去索狀生長(zhǎng)現(xiàn)象,噬菌體鑒定法（PhaB）,Wilson 等于1997年建立的快速檢測(cè)新技術(shù) 原理：是分枝桿菌噬菌體D29能感染活的分枝桿菌,未進(jìn)入感染菌體內(nèi)的噬菌體被隨后加入的殺毒劑滅活 ,已進(jìn)入菌體內(nèi)的噬菌體不受影響。噬菌體在感染菌體內(nèi)大量增殖 ,并將菌體裂解 ,釋放出的子代噬菌體可感染隨后加入的指示細(xì)胞 ,并將其裂解 ,在瓊脂平板上出現(xiàn)透亮的噬菌斑。,分子生物法菌種鑒定,PCR 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（PCR-RFLP） PCR單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（PCR-SSCP） 核酸探針 核酸序列分析 多重PCR,高效液相色譜（HPLC）,檢測(cè)分枝菌酸：由于不同種的分枝桿菌細(xì)胞壁中的分枝

9、菌酸不同，所以利用HPLC檢測(cè)分枝菌酸可鑒定菌種。,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（五） 免疫學(xué)診斷 1結(jié)核菌素試驗(yàn) 2結(jié)核分枝桿菌抗原檢測(cè) 3. 結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè) 4. 全血干擾素測(cè)定法,結(jié)核菌素試驗(yàn),針對(duì)舊結(jié)核菌素(OT)與結(jié)核菌素純蛋白衍生物(PPD)兩種菌體蛋白 原理：當(dāng)將蛋白注入皮內(nèi)后，如受試者已感染結(jié)核桿菌，則結(jié)核菌素與致敏淋巴細(xì)胞特異性結(jié)合，在局部釋放淋巴因子，形成遲發(fā)性超敏反應(yīng)性炎癥，若受試者未感染MTB則無(wú)反應(yīng)。,結(jié)核分枝桿菌抗原檢測(cè),用ELISA 方法在血清中檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗原-結(jié)核菌外分泌特異性抗原 (external secreted specific antigen) 濃度

10、。 任何體液如血液、痰液、脊髓液、尿液和各式組織萃取液等體液可用于檢測(cè)特異蛋白抗原。,結(jié)核抗體,作為活動(dòng)性MTB感染的快速診斷方法之一 比傳統(tǒng)的痰涂片抗酸染色、MTB培養(yǎng)等方法簡(jiǎn)便、快速、敏感性高，但存在一定的假陽(yáng)性。 近年，膠體金、蛋白芯片檢查結(jié)核桿菌IgG抗體抗體，特別是后者，針對(duì)三種抗原（脂阿拉伯甘露糖、38K Da和16K Da蛋白質(zhì)抗原），其靈敏度和特異性均有所提高。,全血干擾素測(cè)定法,原理：當(dāng)全血與PPD和對(duì)照抗原（植物血凝素）共同孵育后，致敏的淋巴細(xì)胞可分泌IFN-，通過(guò)檢測(cè)IFN-的含量來(lái)鑒定菌種。 2004年，Quantiferon-TB Gold assay 問(wèn)世，應(yīng)用結(jié)核

11、分枝桿菌RD1區(qū)域編碼的早期分泌抗原靶（ESAT）和培養(yǎng)濾液蛋白（CFP-10）特異抗原刺激細(xì)胞檢測(cè)。 近來(lái)ESAT/CFP-10融合蛋白-ELISPOT用于診斷活動(dòng)性結(jié)核病，準(zhǔn)確、靈敏、特異、快速。 結(jié)果與結(jié)核菌素試驗(yàn)相當(dāng)，干擾因素小。,（六）藥物敏感性試驗(yàn) 將純培養(yǎng)物菌懸液，接種含各種濃度藥物的固體培養(yǎng)基上，同時(shí)做不含藥物的對(duì)照組。 經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，含有藥物的培養(yǎng)基上菌落數(shù)目是對(duì)照組的75以上，則認(rèn)為該菌對(duì)該藥物濃度為完全耐藥，如無(wú)菌落生長(zhǎng)則為敏感。,三、微生物檢驗(yàn),第二節(jié) 非結(jié)核分枝桿菌,一、概述與分類 二、臨床意義 三、微生物學(xué)檢驗(yàn),一、概述與分類,非結(jié)核分枝桿菌（ontuberculosi

12、s Mycobactericum，NTM） : 指結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌、坎納分枝桿菌和田鼠分枝桿菌) 和麻風(fēng)分枝桿菌以外的其他分枝桿菌。,NTM種類眾多，現(xiàn)已被鑒定的有150余種,包括專性寄生菌、腐生菌和中間型。 國(guó)際分枝桿菌分類研究組（IWGMT）分為三類，即緩慢生長(zhǎng)菌、快速生長(zhǎng)菌和不能培養(yǎng)菌三種類型。 Runyon按細(xì)菌產(chǎn)色素和生長(zhǎng)速度將臨床重要分枝桿菌分為Runyon、群,概 述,Runyon 分類法,群光產(chǎn)色菌,如猿猴分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌; 群暗產(chǎn)色菌,如蘇加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、戈登分枝桿菌; 群不產(chǎn)色菌,如鳥(niǎo)分枝

13、桿菌復(fù)合群(M1avium complex ,MAC) 、瑪爾摩分枝桿菌、土地分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌、嗜血分枝桿菌; 群快生長(zhǎng)菌,如偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌、膿腫分枝桿菌。,二、臨床意義,迄今為止已發(fā)現(xiàn)NTM有150余種，其中約1/3與人類疾病有關(guān)。 條件致病菌 毒力低于結(jié)核分枝桿菌 自然界中廣泛存在 可以在人體某些部位定植 結(jié)核病和NTM感染的治療不同,為何要關(guān)注NTM？,自然界中廣泛存在，如水、土壤和氣溶膠，可導(dǎo)致免疫力低下的患者感染。 近年來(lái)，因手術(shù)器械、注射器具及醫(yī)療用水等滅菌不合格、使用不規(guī)范造成患者手術(shù)切口、注射部位NTM感染暴發(fā)事件。,如：廣東省某中心衛(wèi)生院剖宮產(chǎn)患者手術(shù)切口感染

14、事件。 該事件是由于手術(shù)器械滅菌不合格導(dǎo)致的手術(shù)切口感染，病原菌為快速生長(zhǎng)型分枝桿菌。,警鐘長(zhǎng)鳴NTM潛在殺手？,衛(wèi)生部關(guān)于嚴(yán)重醫(yī)院感染事件通報(bào) 1. 關(guān)于深圳市某醫(yī)院發(fā)生嚴(yán)重醫(yī)院感染事件的通報(bào) 2. 衛(wèi)生部關(guān)于安徽省某立醫(yī)院惡性醫(yī)療損害事件的通報(bào) 3. 關(guān)于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院某醫(yī)院發(fā)生嚴(yán)重醫(yī)院感染事件的通報(bào) 4. 關(guān)于山西省太原某中心醫(yī)院血液透析感染事件的通報(bào) 5. 關(guān)于天津市薊縣某院新生兒醫(yī)院感染事件的通報(bào) 6. 衛(wèi)生部關(guān)于安徽省某縣醫(yī)院血液透析患者感染丙肝事件的通報(bào) 7. 關(guān)于廣東省汕頭市潮陽(yáng)區(qū)某中心衛(wèi)生院剖宮產(chǎn)患者手術(shù)切口感染事件的通報(bào) 摘自江蘇省衛(wèi)生廳嚴(yán)重醫(yī)院感染事件通報(bào)與處罰規(guī)定選

15、編（2010年7月）,光產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon 群）,堪薩斯分枝桿菌（M.kansaii）：能引起肺內(nèi)和肺外類似結(jié)核樣的病變 海分枝桿菌(M.marinum)：存在于淡水或海水。除可引起冷血?jiǎng)游铮ㄈ玺~(yú)）感染外，亦能引起人的感染。通過(guò)皮膚微小創(chuàng)口侵入皮膚而引起所謂的“游泳池肉芽腫”。漁業(yè)工人可經(jīng)受損皮膚遭受感染 猿分枝桿菌（M.simiae）：首先從猿分離到此菌，形態(tài)同結(jié)核分枝桿菌，可感染人類,暗產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon 群）,瘰疬分枝桿菌（M.scrofulaceum）：可引起人的淋巴結(jié)炎或肺部感染。 斯氏分枝桿菌(M.szulgai)：可引起成人肺部的慢性感染。,不產(chǎn)色分枝桿菌（Run

16、yon 群）,鳥(niǎo)-胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合體 (M.avium-intracellulare complex,MAC or MAIC)：鳥(niǎo)分枝桿菌和胞內(nèi)分枝桿菌有許多相似之處，故合起來(lái)稱之為MAC。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)HIV感染和AIDS患者易感染MAC。 潰瘍分枝桿菌（M.ulcerans）：對(duì)人可通過(guò)創(chuàng)傷局部感染，常在四肢伸側(cè)形成無(wú)痛性潰瘍，叫做Buruli潰瘍，緩慢愈合或出現(xiàn)繼發(fā)感染。 蟾蜍分枝桿菌（M.xenopi）：是蟾蜍肉芽腫的病原菌，對(duì)人則多引起老年男性的慢性肺部感染。,快速生長(zhǎng)分枝桿菌（Runyon 群）,偶發(fā)分枝桿菌（M.fortuitum）：可引起人的局部感染或肺部感染，對(duì)現(xiàn)有的抗結(jié)核藥物均

17、耐藥。 龜分枝桿菌（M.chelonei）：該菌在引起免疫力低下患者感染的快速生長(zhǎng)非結(jié)核分枝桿菌中最常見(jiàn)，外傷引起的軟組織病變及手術(shù)后繼發(fā)感染，亦可引起肺部感染。 膿腫分枝桿菌（M.abscessus）：以前曾作為龜分枝桿菌膿腫亞種。常存在于自來(lái)水中，引起注射后醫(yī)院感染的暴發(fā)。該菌也可散發(fā)引起豐胸術(shù)后、中心靜脈插管、動(dòng)脈插管以及透析導(dǎo)管所致的菌血癥。另外，該菌可導(dǎo)致：近90%由快速生長(zhǎng)分枝桿菌引起的肺部感染，外傷后感染以及超過(guò)90%鼓膜切開(kāi)管植入術(shù)后耳炎。與龜分枝桿菌相似，該菌引起免疫力缺陷患者播散性皮下感染。,膿腫分枝桿菌引起的注射后感染,膿腫分枝桿菌引起的注射后感染,膿腫分枝桿菌引起的注射

18、后感染,難于愈合的傷口,潮濕治療室曾導(dǎo)致肌肉注射感染,表現(xiàn)： 1998年4月1日5月31日共手術(shù)292例，4月22日7月14日發(fā)生切口感染166例。潛伏期為2030天。切口部位開(kāi)始為小結(jié)節(jié)，繼而化膿成竇道，有線頭挾出。清創(chuàng)換藥后創(chuàng)面清潔但不愈合，或愈合后又復(fù)發(fā)，并有淋巴結(jié)炎傾向。 調(diào)查：20份切口分泌物標(biāo)本培養(yǎng)出龜分枝桿菌（膿腫亞型）。醫(yī)院環(huán)境和無(wú)菌物品細(xì)菌學(xué)檢查合格。使用中和未啟用的戊二醛半小時(shí)不能殺滅金葡菌、1小時(shí)不能殺滅龜分枝桿菌，測(cè)濃度為0.137%。 結(jié)論：戊二醛濃度錯(cuò)配導(dǎo)致手術(shù)器械分枝桿菌污染，從而引起切口感染。,某醫(yī)院手術(shù)切口分枝桿菌感染暴發(fā)（廣東深圳，1998）,深圳孕婦感染事

19、件開(kāi)庭： 46人索賠2000多萬(wàn)元,肌注部位偶發(fā)分枝桿菌感染暴發(fā)（福建南平，1998）,表現(xiàn)： 1998年8月11月某診所59例患者發(fā)生肌注部位感染，潛伏期280天。起初肌注無(wú)明顯不適，少數(shù)針孔持續(xù)疼痛，多數(shù)在洗澡或接通知后撫摸發(fā)現(xiàn)注射處腫塊長(zhǎng)期不消。15天約長(zhǎng)0.51.0cm，后期硬塊出現(xiàn)波動(dòng)感，壓痛明顯，出現(xiàn)水樣膿液。繼發(fā)腹股溝淋巴結(jié)炎4例。膿液或病理標(biāo)本43份中33份檢出偶發(fā)分枝桿菌。 調(diào)查：檢查27種藥物、一次性注射器和輸液器均合格；其他診所肌注者無(wú)發(fā)?。辉\所衛(wèi)生條件差，1個(gè)水龍頭，自來(lái)水直接從河中抽取，未消毒；玻璃注射器15枝，煮沸消毒，時(shí)間憑經(jīng)驗(yàn)，每天消毒1次；患者多時(shí)使用同種藥物

20、者換針頭不換注射器。 結(jié)論：污染注射器是引起感染暴發(fā)的主要原因，細(xì)菌則可能來(lái)自河水。,（一）標(biāo)本采集 見(jiàn)結(jié)核桿菌部分 （二）涂片抗酸染色 本菌為抗酸桿菌，但較結(jié)核分枝桿菌短而粗，大小約18m0.30.5m，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團(tuán)狀排列 （三）分離培養(yǎng)與鑒定,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）分離培養(yǎng)與鑒定 光產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon 群） 菌落特點(diǎn)是在暗處一般不產(chǎn)生或僅產(chǎn)生少量色素，光照1h后能在48h內(nèi)轉(zhuǎn)為黃色或橘黃色 需在營(yíng)養(yǎng)復(fù)雜的培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)，生長(zhǎng)緩慢，菌落光滑 有時(shí)可形成索狀生長(zhǎng),三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）分離培養(yǎng)與鑒定 （2）暗產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon 群） 無(wú)論有光或無(wú)光均能產(chǎn)生

21、色素，呈黃色或橘黃色 生長(zhǎng)緩慢，菌落為光滑型,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）分離培養(yǎng)與鑒定 不產(chǎn)色分枝桿菌（Runyon 群） 缺乏-胡蘿卜素，故在光照和暗處均不能產(chǎn)生色素,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）分離培養(yǎng)與鑒定 快速生長(zhǎng)分枝桿菌（Runyon 群） 在普通培養(yǎng)基上即可生長(zhǎng) 最適生長(zhǎng)溫度為2545 生長(zhǎng)速度快，36d即可形成菌落,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),微需氧培養(yǎng)4天,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),（四）其他鑒定方法 NTM非培養(yǎng)方法的鑒定與結(jié)核分枝桿菌類似，可參考結(jié)核桿菌部分。 NTM的實(shí)驗(yàn)室診斷可跟據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)速度、色素等表型特征進(jìn)行初步鑒定，再進(jìn)行分子診斷，后者應(yīng)用越來(lái)越廣泛。,第三節(jié) 麻風(fēng)分枝桿菌,麻風(fēng)病的病原

22、菌，麻風(fēng)是一種慢性傳染病，主要表現(xiàn)為皮膚、黏膜和神經(jīng)末梢的損害。晚期可侵犯深部組織和器官，形成肉芽腫。 根據(jù)臨床表現(xiàn)、免疫病理變化和細(xì)菌檢查結(jié)果等將麻風(fēng)分為瘤型、結(jié)核樣型和界限類綜合征等三種病型。,麻風(fēng)分枝桿菌（M.leprae）,麻風(fēng)病的病原菌 1873年挪威學(xué)者Armauer Hansen從麻風(fēng)患者皮膚結(jié)節(jié)中發(fā)現(xiàn)，又名Hansen桿菌。 革蘭染色陽(yáng)性 具有抗酸性,一、臨床意義,WHO自1995年始對(duì)麻風(fēng)患者實(shí)施免費(fèi)治療 麻風(fēng)病發(fā)病率直線下降 2008年全球新發(fā)現(xiàn)麻風(fēng)患者249000例 中國(guó)現(xiàn)癥麻風(fēng)病患者由解放初期的50多萬(wàn)人減少至目前的6000余人 20012008年,我國(guó)每年新發(fā)現(xiàn)患者1

23、4001700例,二、微生物學(xué)檢驗(yàn),（一）基本特性 本菌為抗酸桿菌，較結(jié)核分枝桿菌短而粗，大小約18m0.30.5m，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團(tuán)狀排列。 麻風(fēng)分枝桿菌為典型的胞內(nèi)寄生菌，有麻風(fēng)分枝桿菌存在的細(xì)胞胞漿呈泡沫狀，稱為麻風(fēng)細(xì)胞。 用藥后細(xì)菌可斷裂為顆粒狀、鏈桿狀等，著色不均勻，叫做不完整菌。 革蘭染色陽(yáng)性，無(wú)鞭毛、無(wú)莢膜、無(wú)芽胞。,二、微生物學(xué)檢驗(yàn),（二）標(biāo)本采集 通常自眶上、顴下、下頜、耳廓及鼻腔黏膜等數(shù)處采取標(biāo)本,二、微生物學(xué)檢驗(yàn),（三）標(biāo)本直接檢查 1.顯微鏡檢查 用刀刮取組織液做涂片，火焰固定，抗酸染色、鏡檢，麻風(fēng)分枝桿菌呈紅色，細(xì)胞呈藍(lán)色。金胺“O”染色、熒光顯微鏡檢查，

24、可提高陽(yáng)性率 麻風(fēng)分枝桿菌多呈束狀或成團(tuán)聚集，結(jié)核分枝桿菌多散在，偶有聚集。麻風(fēng)分枝桿菌菌體粗直，兩端尖細(xì)，而結(jié)核分枝桿菌則細(xì)長(zhǎng)略彎曲，且有分枝現(xiàn)象。在鏡下可見(jiàn)大量麻風(fēng)細(xì)胞。 2.活組織切片 抗酸染色及病理學(xué)檢查。,二、微生物學(xué)檢驗(yàn),（四）其他診斷方法 該菌目前尚不能人工培養(yǎng) 近年采用PCR技術(shù)檢測(cè)麻風(fēng)菌基因、運(yùn)用新發(fā)現(xiàn)抗原血清學(xué)與T細(xì)胞試驗(yàn)可以對(duì)麻風(fēng)病進(jìn)行早期診斷。,第四節(jié) 放線菌屬,放線菌（Actinomyces）能引起牛和人的疾病 1891年，Wolff和Israel應(yīng)用厭氧培養(yǎng)法，首先將人型放線菌培養(yǎng)成功。 因菌落生長(zhǎng)呈放射狀而得名。,一、分 類,放線菌是引起人放線菌?。ˋctinom

25、ycosis）的病原菌，屬于內(nèi)源性感染。 目前發(fā)現(xiàn)衣氏放線菌（A.israelii）、內(nèi)氏放線菌（A.naeslundii）粘放線菌(A.viscous)、齲齒放線菌（A.odontolyticus）及丙酸蛛網(wǎng)菌。（Arachniapropionica）5種可引起人的放線菌病，其中衣氏放線菌最多見(jiàn)。 牛型放線菌（A.bovis）是本屬的典型菌種，主要引起牛的放線菌病。,放線菌目（Actinomycetales） 放線菌屬（Actinomyces） 諾卡菌屬（Nocardia） 分枝桿菌屬（Mycobacterium） 分類（1）含分枝菌酸 諾卡菌屬 分枝桿菌屬 棒狀桿菌屬 （2）不含分枝菌酸

26、放線菌屬,二、臨床意義,放線菌：正常菌群 所致疾病： 1.內(nèi)源性感染(放線菌病)：軟組織肉芽腫性炎癥(慢性,無(wú)痛,多發(fā)性瘺管,排出硫磺樣顆粒。) 2.齲齒和牙周炎,（一）基本特性 G+、非抗酸性絲狀菌 培養(yǎng)困難，厭氧或微需氧 硫磺樣顆粒（菌落） 壓片或組織切片，顯微鏡下可見(jiàn)顆粒呈菊花狀。,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),硫磺樣顆粒(sulfur granule),（二）分離培養(yǎng) 培養(yǎng)：厭氧或微需氧 氣體環(huán)境：5 CO2 營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基：腦心浸液瓊脂平板 溫度與時(shí)間：37，2448h 菌落:灰白色蜘蛛狀、不規(guī)則結(jié)節(jié)狀或臼齒狀菌落, 初分離(粗糙) 生化特性:溶血(-) 葡萄糖(+) 甘露醇(+) 吲哚(-) 觸酶

27、試驗(yàn)(-)【黏液放線菌除外】,三、微生物學(xué)檢驗(yàn),放線菌菌落特點(diǎn),第五節(jié) 諾卡菌屬,1.需氧菌 2.含分枝菌酸 3.分布 土壤中，多數(shù)不致病菌 4.致病菌 星形諾卡菌（N. asteroides） 巴西諾卡菌（N. brasiliensis）,一、概 述,諾卡菌屬（Nocardia）革蘭染色不定，一般認(rèn)為該菌為革蘭陽(yáng)性桿菌 有細(xì)長(zhǎng)的分枝菌絲，生長(zhǎng)于表面并伸入瓊脂培養(yǎng)基中 生長(zhǎng)的某個(gè)時(shí)期有弱抗酸性 形態(tài)與放線菌相似，但菌絲末端不膨大,二、分 類,該屬包括至少包括22個(gè)菌種 醫(yī)學(xué)上常見(jiàn)的有13個(gè)種：膿腫諾卡菌、非洲諾卡菌、星形卡菌、巴西諾卡菌、短鏈諾卡菌復(fù)合群、肉色諾卡菌、鼻疽諾卡菌、新星諾卡菌、豚鼠耳炎諾卡菌、少食諾卡菌、假巴西諾卡菌、南非諾卡菌、老兵諾卡菌。,三、臨床意義,廣泛分布于土壤，多為腐物寄生性的非病原菌。 諾卡菌感染在人類罕見(jiàn)，可發(fā)生在一些其他慢性進(jìn)行性疾病或免疫缺陷疾病。 星形諾卡菌主