1、第七章 紫外-可見分光光度法,學習目標 知識要求 能力要求,學習目標,知識要求,能力要求,1.能夠用光的吸收定律解決定量計算問題 。 2.能夠繪制吸收光譜曲線，找出被測組分的最 大吸收波長。 3.能夠繪制標準曲線，并能應用標準曲線對樣品進行定量分析。 4.會使用常見的紫外-可見分光光度計測定溶液的吸光度。,案例導入,在夏天參加戶外活動時，如果天氣晴朗，就應該注意保護皮膚，否則，暴露在火辣辣太陽之下的皮膚，數小時后就會出現紅腫、瘙癢、發(fā)熱、刺痛癥狀，數日后出現蛻皮現象，這表明太陽光中有一種光線能傷害生物細胞?？茖W家研究證實，這種光線是紫外線。 根據可見光、紫外光與物質分子的相互作用建立了紫外-可

2、見分光光度法，,第一節(jié) 概述,根據待測物質（原子或分子）發(fā)射或吸收的電磁輻射，以及待測物質與電磁輻射的相互作用而建立起來的定性、定量和結構分析方法，統(tǒng)稱為光學分析法。 利用光譜進行定性、定量和結構分析的方法稱為光譜分析法，簡稱光譜法。,第一節(jié) 概述,一、物質對光的選擇性吸收,單色光: 單一波長的光束 復色光: 含有多種波長的光束 電磁波譜: 以波長大小順序排列的電磁波譜圖,第一節(jié) 概述,紅光與綠光互補、紫光與黃光互補，等等。 白光的組成 白光的色散,第一節(jié) 概述,二、透光率與吸光度 I0Ia + It + Ir I0Ia + It,第一節(jié) 概述,透射光強度It與入射光強度I0的比值稱為透光率或

3、透光度T 透光率的負對數為吸光度A,第一節(jié) 概述,三、吸收光譜曲線 概念：以波長為橫坐標，吸光度A為縱坐標所描繪的曲線，稱為吸收光譜曲線，簡稱吸收光譜。 特點：在相同條件下，同一物質的不同濃度的溶液，其吸收光譜曲線相似，且max相同。這是定性分析的基礎。,第一節(jié) 概述,吸收光譜曲線示意圖,max=515,第一節(jié) 概述,四、紫外-可見分光光度的特點,課堂活動 1紫外-可見光的波長范圍是 A200400nm B400760nm C200760nm D360800nm 2下列敘述錯誤的是 A光的能量與其波長成反比 B有色溶液越濃，對光的吸收也越強烈 C物質對光的吸收有選擇性 D光的能量與其頻率成反比

4、,第一節(jié) 概述,課堂活動 3紫外-可見分光光度法屬于 A原子發(fā)射光譜法 B原子吸收光譜法 C分子發(fā)射光譜法 D分子吸收光譜法 4分子吸收可見-紫外光后，可發(fā)生哪種類型的分子能級躍遷 A轉動能級躍遷 B振動能級躍遷 C電子能級躍遷 D以上都能發(fā)生,第一節(jié) 概述,第一節(jié) 概述,點滴積累 1光的本質是電磁波；物質對光的吸收具有選擇性。 2吸光度與透光率的關系是 : 3吸收曲線是溶液在一定條件下的吸光度隨入射光波長變化而變化的曲線。,第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理,一、光的吸收定律 當一束平行的單色光通過均勻、無散射的含有吸光性物質的溶液時，在入射光的波長、強度及溶液的溫度等條件不變的情況下，

5、該溶液的吸光度A與溶液的濃度c及液層厚度L的乘積成正比，即： AKL c 。 稱為光的吸收定律（朗伯-比爾定律）。 光的吸收定律是定量分析的理論依據。,朗伯-比爾定律不僅適用于可見光，而且也適用于紫外光和紅外光；不僅適用于均勻、無散射的溶液，而且也適用于均勻、無散射的固體和氣體。 實驗證明：溶液對光的吸光度具有加和性。如果溶液中同時存在兩種或兩種以上的吸光性物質，則測得的該溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物質吸光度的總和，即： A（a+b+c）AaAbAc,第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理,課堂活動 某化合物溶液遵守光的吸收定律，當濃度為c時，透光率為T，試計算：當濃度為0.5c、2c時所

6、對應的透光率。,第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理,第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理,二、吸光系數 摩爾吸光系數：在入射光波長一定時，溶液濃度為1 mol/L，液層厚度為1cm時所測得的吸光度稱為摩爾吸光系數，常用表示 。 光吸收系數 在入射光波長一定時，溶液濃度為1g/L，液層厚度為1cm時的吸光度，稱為光吸收系數，常用表示，其量綱為L/(gcm)。,第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理,百分吸光系數：在入射光波長一定時，溶液濃度為1 （W/V）、層厚度為1cm時所測得的吸光度稱為百分吸光系數，常用 表示。 二者的關系：,課堂活動 用雙硫腙測定Cd2+溶液的吸光度A時，Cd2+（

7、Cd的原子量為112）的濃度為140g/L，在525nm波長處，用L1cm的吸收池，測得吸光度A0.220，試計算摩爾吸光系數和百分吸收系數。,第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理,課堂互動 某有色溶液的物質的量濃度濃度為c，在一定條件下用1cm比色杯測得吸光度為A，則摩爾吸光系數應為： AcA BcM CA/C DC/A,第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理,第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理,三、偏離光的吸收定律的主要因素 化學因素:(1)溶液的濃度 (2)物質的化學變化 (3)溶劑的影響 光學因素:(1)非單色光 (2)雜散光 (3)非平行光 (4)反射現象 (5)散射現象,第二

8、節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理,偏離光的吸收定律示意圖,第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理,點滴積累 1光的吸收定律表明了吸光度與液層厚度和濃度之間的關系，它是吸收光譜法定量分析的依據。 2吸光系數的表示方法有多種，隨待測溶液濃度的不同標度而不同。 3偏離光的吸收定律的因素主要有化學因素和光學因素。,第三節(jié) 紫外-可見分光光度計,一、紫外-可見分光光度計的主要部件： 光源單色器吸收池檢測器訊號處理與顯示器,第三節(jié) 紫外-可見分光光度計,二、紫外-可見分光光度計的光學性能 1測光方式 2波長范圍 3狹縫或光譜帶寬 4雜散光 5波長準確度 6吸光度范圍 7波長重復性 8測光準確度 9光度重

9、復性 10分辨率,第三節(jié) 紫外-可見分光光度計,三、紫外-可見分光光度計的類型 1.可見分光光度計 721型,第三節(jié) 紫外-可見分光光度計,三、紫外-可見分光光度計的類型 1.可見分光光度計 722型,第三節(jié) 紫外-可見分光光度計,三、紫外-可見分光光度計的類型 2.紫外-可見分光光度計 （1）單波長分光光度計 單光束分光光度計 雙光束分光光度計,第三節(jié) 紫外-可見分光光度計,課堂活動 1.試述紫外-可見分光光度計的主要部件及其作用？ 2.紫外-可見分光光度計有哪些類型？,第三節(jié) 紫外-可見分光光度計,第三節(jié) 紫外-可見分光光度計,點滴積累 紫外-可見分光光度計的基本結構相同，都由光源、單色器

10、、吸收池、檢測器、訊號處理與顯示器等主要部件構成，但不同型號儀器的外形差別很大，質量和價格相差懸殊，操作方法迥異，使用之前應仔細閱讀儀器使用說明書。,第四節(jié) 分析條件的選擇,一、儀器測量條件的選擇 1.應選擇最大吸收波長作為入射光。 2.應控制吸光度讀數范圍： 吸光度在0.20.7之間； 透光率在20%65%之間。,第四節(jié) 分析條件的選擇,二、顯色反應條件的選擇 1.對顯色劑及顯色反應的要求 2.控制合適的顯色反應條件 三、參比溶液的選擇 1.溶劑參比溶液 2.試樣參比溶液 3.試劑參比溶液 4.平行操作參比溶液,第四節(jié) 分析條件的選擇,課堂活動 測定試樣時，吸光度的讀數應控制在0.20.7范

11、圍內。若吸光度讀數不在此范圍，可采用哪些方法進行調整?,第四節(jié) 分析條件的選擇,點滴積累 1選擇吸光性物質的最大吸收波長作為測定波長。 2使用紫外-可見分光光度計時，讀數范圍應控制在吸光度為0.20.7，透光率為65% 20%之間。 3待測物質在紫外-可見光區(qū)無吸收時，應加顯色劑。顯色劑不得有干擾，反應必須完全。 4一般用溶劑作參比溶液。必要時采用試樣參比溶液、試劑參比溶液或平行操作參比溶液。,第五節(jié) 定性定量方法,一、定性分析方法 定性的基本依據：比較光譜的一致性。 未知物和標準品的吸收光譜曲線，對比二者是否一致。 比較吸收光譜的特征數據及比值的一致性。 二、雜質檢查： 將藥品光譜與藥品標準

12、光譜相對照，利用雜質的特征吸收，可以檢測出微量雜質及其含量。,案例分析 貝諾酯的定性鑒別 中國藥典(2010年版)規(guī)定：貝諾酯加無水乙醇制成每1ml約含7.5g的溶液，在240nm處有最大吸收，相應的百分吸光系數( )應為730760。 維生素B12也有三個吸收峰，分別在278nm、361nm、550nm波長處，它們的吸光度比值應為：A361nm/A278nm在1.701.88之間，A361nm/A550nm在3.153.45之間。,第五節(jié) 定性定量方法,案例分析 葡萄糖注射液是臨床上常用的藥品之一。制備時需要高溫滅菌，葡萄糖會轉化為5-羥甲基糠醛而引入雜質。中國藥典（2010年版）規(guī)定葡萄糖

13、注射液在284nm波長處的吸收度不得過0.32，以此控制其雜質5-羥甲基糠醛的量。 在284nm波長處，葡萄糖無吸收，而雜質5-羥甲基糠醛在此波長處有最大吸收，可以通過控制供試品溶液在此波長處的吸收度來控制雜質的含量。,第五節(jié) 定性定量方法,第五節(jié) 定性定量方法,三、定量分析方法 定量分析的依據: AK c L（光的吸收定律） （一）單組分溶液的定量方法 1. 標準曲線法： 是紫外-可見分光光度法中最經典的定量方法。,第五節(jié) 定性定量方法,標準曲線法的方法和步驟如下: （1）配制一系列不同濃度的標準溶液，選擇合適的參比溶液，在相同條件下，以待測組分的最大吸收波長 作為入射光，分別測定各標準溶液

14、對應的吸光度。 （2）以濃度c為橫坐標、吸光度A為縱坐標描繪標準曲線。,第五節(jié) 定性定量方法,（3）按照相同的實驗條件和操作程序，用待測溶液配制未知試樣溶液并測定其吸光度A樣，在標準曲線上找到與之對應的未知試樣溶液的濃度c樣 。 如右圖。,第五節(jié) 定性定量方法,2.標準對比法: 在相同的條件下，配制濃度為cs的標準溶液和濃度為cx的試樣溶液，在最大吸收波長處，分別測定二者的吸光度值為As、Ax ，依據朗伯-比爾定律得： As=csL Ax=cxL 則:,第五節(jié) 定性定量方法,3.吸光系數法: 吸光系數法直接利用朗伯-比爾定律的數學表達式AKcL進行計算的定量分析方法。在手冊中查出待測物質在最大

15、吸收波長 處的吸光系數 或 ,并在相同條件下測量樣品溶液的吸光度A，則其濃度為： 或,第五節(jié) 定性定量方法,有時也可以將待測樣品溶液的吸光度換算成樣品組分的吸光系數，計算與標準品的吸光系數的比值，求出樣品中待測組分的質量分數。 或,第五節(jié) 定性定量方法,實例：維生素B12水溶液在 =361nm處的百分吸光系數 =207。取維生素B12樣品30.0mg，加純化水溶解，用1L的容量瓶定容。將溶液盛于1cm的吸收池，測得361nm波長處的吸光度A=0.600，試求樣品中維生素B12的質量分數。 解：,第五節(jié) 定性定量方法,（二）二元組分溶液的定量方法 1. 解聯立方程組法 當試樣溶液中各待測組分相互

16、干擾不太嚴重時，可根據吸光度具有加和性的特點，在同一試樣溶液中同時測定兩個或兩個以上的待測組分。假設要測定試樣中有兩個待測組分a和b，如果分別繪制a、b兩個純物質的吸收光譜，則有三種情況。,第五節(jié) 定性定量方法,第五節(jié) 定性定量方法,（）表明，兩個待測組分在各自的最大吸收波長處，另一組分沒有吸收，可以用測定單組分溶液的方法，分別在1和2波長處測定組分a、b的吸收度, 由光的吸收定律求得ca、cb。測定時兩組分互不干擾。 （）表明，在組分a的最大吸收波長1處，組分b對組分a的測定無干擾，而在組分b的最大吸收波長2處，組分a對組分b的測定有干擾。這時，先在1波長處單獨測量組分a；然后在2波長處測量

17、組分a、b的總吸光度，根據吸光度的加和性，從而可以求出cb。,第五節(jié) 定性定量方法,（）表明，兩個待測組分彼此相互干擾，此時，在波長1和2處分別測定試樣溶液的總吸光度 及 ，同時測定a、b純物質的吸光系數 、 和 、 ，根據吸光度的加和性，則由聯立方程組求得ca、cb。,第五節(jié) 定性定量方法,2.等吸收波長消去法（雙波長分光光度法） 當試樣中兩個待測組分的相互干擾比較嚴重時，用解聯立方程組的方法進行定量分析會產生較大的誤差，這時可以用等吸收波長消去法進行測定。 在試樣中含有兩個待測組分a和b時，若要測定組分b，組分a有干擾，應設法消除組分a的吸收干擾。首先選擇待測組分b的最大吸收波長2作為測量

18、波長，然后用作圖的方法選擇參比波長1，使組分a在這兩個波長處的吸光度相等。,第五節(jié) 定性定量方法,試樣溶液在2和1兩個波長處的吸光度之差，只與待測組分b（ a）的濃度成正比，而與干擾組分的濃度無關。,3.差示分光光度法 當待測組分含量過高時，吸光度超出了準確測量的讀數范圍，可以采用差示分光光度法。具體方法是用一個比試樣溶液濃度稍低的標準溶液作為參比溶液，將分光光度計調零（透光率100%），測得的吸光度就是被測試樣溶液試液與參比溶液的吸光度差值（相對吸光度）。根據光的吸收定律得： AAxAsL(cxcs) 即：待測溶液與參比溶液的吸光度差值與兩溶液的濃度之差成正比。,第五節(jié) 定性定量方法,第五節(jié)

19、 定性定量方法,課堂活動 1.在紫外-可見分光光度法中，影響吸光系數的因素是 A溶劑的種類和性質 B溶液的物質量濃度 C物質的本性和光的波長 D吸收池大小 E待測物的分子結構 2.紫外-可見分光光度法常用的定量分析方法有 A間接滴定法 B標準對比法 C標準曲線法 D直接電位法 E吸光系數法,第五節(jié) 定性定量方法,課堂互動 3在符合朗伯-比爾定律的條件下，有色物質的濃度、最大吸收波長、吸光度三者的關系是 A增加、增加、增加 B增加、減小、不變 C減小、增加、減小 D減小、不變、減小 4維生素D2的摩爾吸收系數264nm=18200。用2.0cm吸收池測定，如果要控制吸光度A在0.6990.187

20、范圍內，應使維生素D2溶液的濃度在什么范圍內？,第五節(jié) 定性定量方法,點滴積累（1） 紫外-可見分光光度法的各種定量方法的優(yōu)缺點： 1標準曲線法的優(yōu)點：測定大批量樣品時，操作簡單、準確、快速。缺點：不同人處理相同的測量數據，得到的結果不易完全相同。 2標準對比法的優(yōu)點：測量數據相同，任何人都能得到完全一致的結果。缺點：隨機誤差較大。 3吸光系數法的優(yōu)點：與標準對比法的優(yōu)點相同。 缺點：測定條件不易與文獻完全一致，從而引入誤差。,第五節(jié) 定性定量方法,點滴積累（2） 紫外-可見分光光度法的各種定量方法的優(yōu)缺點： 4解聯立方程組法的優(yōu)點：可以不經分離直接測定二元組分溶液。缺點：在兩個測定波長處，要

21、求兩個組分的吸光系數有較大的差別。 5等吸收波長消去法的優(yōu)點：可以不經分離直接測定二元組分溶液，還適于測定混濁液的測定。缺點：要求干擾組分的吸收光譜中有一個峰或谷。 6差示分光光度法的優(yōu)點：可以直接測定高濃度溶液。缺點：需要用高精密度的儀器。,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,一、有機化合物的紫外-可見吸收光譜 有機化合物的紫外-可見吸收光譜主要是由分子中價電子的能級躍遷而產生的。 電子的能級躍遷有4個基本類型。,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,二、根據紫外-可見吸收光譜推斷官能團 三、根據紫外-可見吸收光譜推斷異構體 （一）判別順反異構體

22、 （二）測定某些化合物的互變異構現象,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,點滴積累 1紫外-可見吸收光譜是化合物的價電子能級躍遷形成的。 2根據紫外-可見吸收光譜的光譜特征，可以推斷待測化合物的官能團、順反異構和互變異構。,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,一、選擇題 （一）單項選擇題 1紫外-可見光的波長范圍是： A. 200400nm B400760nm C200760nm D360800nm 2下列敘述錯誤的是： A光的能量與其波長成反比 B有色溶液越濃，對光的吸收也越強烈 C物質對光的吸收有選擇性 D光的能量與其頻率成反比,【目標檢測】

23、,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,3紫外-可見分光光度法屬于： A原子發(fā)射光譜 B原子吸收光譜 C分子發(fā)射光譜 D分子吸收光譜 4分子吸收紫外-可見光后，可發(fā)生哪種類型的分子能級躍遷： A轉動能級躍遷 B振動能級躍遷 C電子能級躍遷 D以上都能發(fā)生,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,5某有色溶液的摩爾濃度為c，在一定條件下用1cm比色杯測得吸光度為A，則摩爾吸光系數為： AcA BcM C D 6某吸光物質的摩爾質量為M，其摩爾吸收系數與比吸收系數的換算關系是 A M B /M C M/10 D /M10,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化

24、合物結構分析中的應用簡介,7關于光的性質，描述正確的是： A光具有波粒二象性 B光具有發(fā)散性 C光具有顏色 D本質是單色光 8某吸光物質的吸光系數很大，則表明： A該物質溶液的濃度很大 B測定該物質的靈敏度高 C入射光的波長很大 D該物質的分子量很大,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,9相同條件下，測定甲、乙兩份同一有色物質溶液的吸光度。若甲溶液1cm吸收池，乙溶液2cm吸收池進行測定，結果吸光度相同，甲、乙兩溶液濃度的關系： Ac甲c乙 Bc乙4 c甲 Cc甲2c乙 Dc乙2 c甲 10在符合光的吸收定律條件下，有色物質的濃度、最大吸收波長、吸光度三者的關系是： A

25、增加、增加、增加 B增加、減小、不變 C減小、增加、減小 D減小、不變、減小,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,11吸收曲線是在一定條件下以入射光波長為橫坐標、吸光度為縱坐標所描繪的曲線，又稱為： A工作曲線 BA-曲線 CA-c曲線 D滴定曲線 12 標準曲線是在一定條件下以吸光度為橫坐標、濃度為縱坐標所描繪的曲線，也可稱為： AA-曲線 BA-c曲線 C滴定曲線 DE-V曲線,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,13紫外-可見分光光度計的基本結構可分為： A二個部分 B三個部分 C四個部分 D五個部分 14722型分光光度計的比色皿的材料為

26、： A石英 B鹵族元素 C硬質塑料 D光學玻璃,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,15紫外-可見分光光度法定量分析的理論依據是： A吸收曲線 B吸光系數 C光的吸收定律 D能斯特方程 16下列說法正確的是： A吸收曲線與物質的性質無關 B吸收曲線的基本形狀與溶液濃度無關 C濃度越大，吸光系數越大 D吸收曲線是一條通過原點的直線,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,17測定大批量試樣時，適宜的定量方法是： A標準曲線法 B標準對比法 C解聯立方程組法 D差視分光光度法 18. 紫外-可見分光光度法是基于被測物質對： A光的發(fā)射 B光的散射 C光的

27、衍射 D光的吸收,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,19下面有關顯色劑的正確敘述是： A本身必須是無色試劑并且不與待測物質發(fā)生反應 B本身必須是有顏色的物質并且能吸收測定波長的輻射 C能夠與待測物質發(fā)生氧化還原反應并生成鹽 D在一定條件下能與待測物質發(fā)生反應并生成穩(wěn)定的吸收性物質 20某種溶液的吸光度： A與比色杯厚度成正比 B與溶液的濃度成反比 C與溶液體積成正比 D與入射光的波長成正比,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,21雙光束分光光度計與單光束分光光度計的主要區(qū)別是： A能將一束光分為兩束光 B使用兩個單色器 C用兩個光源獲得兩束光

28、D使用兩個檢測器 22下列說法錯誤的是： A標準曲線與物質的性質無關 B吸收曲線的基本形狀與溶液濃度無關 C濃度越大，吸光系數越大 D從吸收曲線上可以找到最大吸收波長,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,（二）多項選擇題 1在可見光區(qū)測定吸光度時，吸收池的材質可用： A彩色玻璃 B光學玻璃 C石英 D溴化鉀 E以上均可 2在紫外-可見分光光度法中，影響吸光系數的因素是： A溶劑的種類和性質 B溶液的物質的量濃度 C物質的本性和光的波長 D吸收池大小 E待測物的分子結構,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,3影響摩爾吸光系數的因素是： A溫度 B溶

29、劑的種類 C物質的結構 D入射光的波長 E溶液的濃度 4光的吸收定律通常適用于： A散射光 B單色光 C平行光 D折射光 E稀溶液,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,5紫外-可見分光光度法常用的定量分析方法有： A間接滴定法 B標準對比法 C標準曲線法 D直接電位法 E吸光系數法 6紫外-可見分光光度計的主要部件是： A光源 B單色器 C吸收池 D檢測器 E顯示器,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,7分光光度計常用的色散元件是： A鎢絲燈 B棱鏡 C飽和甘汞電極 D光柵 E光電管 8紫外-可見分光光度法可用于某些藥物的： A定性鑒別 B純度檢

30、查 C毒理實驗 D含量測定 E藥理檢查,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,二、填空題 1可見光的波長范圍為 ，近紫外分光的波長范圍為 。 2光的吸收定律的數學表達式（A=KcL）中，K稱為吸光系數，常用三種方法來描述，分別是 、 、 ，物質的吸光系數愈大，表示該吸光物質的吸光性愈 。 3吸收光譜是以 為橫坐標，以 為縱坐標而繪制的曲線。吸收峰最高處所對應的波長為 ，用 表示。 4紫外可見分光光度法進行定量分析時，常選用 作入射光，此時測定的 最高。,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,5在紫外光區(qū)測定吸光度時，應使用紫外-可見分光光度計的 燈作

31、光源，所用吸收池的材質是。 6測定吸光度時，當空白溶液置入光路時，應使T ，此時 A 。 7為提高測定的準確度，溶液的吸光度讀數范圍應調節(jié)在0.20.7為宜，可通過調節(jié)溶液的 和 來實現。 8紫外-可見分光光度法對單組分溶液進行定量分析的常用方法有 ， ， 。,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,三、簡答題 1光的吸收定律的內容是什么？偏離光的吸收定律的主要因素有哪些？ 2紫外-可見分光光度法對顯色劑及顯色反應有哪些基本要求？ 3試述紫外-可見分光光度計的主要部件及其作用。 4請說出幾種常用的空白溶液。,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,5測定試樣時，吸光度的讀數應控制在0.20.7范圍內。若吸光度讀數不在此范圍，可采用哪些方法進行調整? 6試述紫外-可見分光光度法常用的定量分析方法。,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在有機化合物結構分析中的應用簡介,四、實例分析題 1吸光度A值為0.20、0.60、1.00對應透光率值為多少？透光率值為20% 、60%、100%對應的吸光度值為多少？ 2將已知濃度為2.00mg/L的蛋白質溶液用堿性硫酸銅溶液顯色后，在540nm波長下測得其吸光度為0.300。另取試樣溶液同樣處理后，在同樣條件下測得其吸光度為0.699，求試樣中蛋白質濃度。測定吸光度時應選用何種光源？,第六節(jié) 紫外-可見吸收光譜在