1、氣相色譜質(zhì)譜法測(cè)定水發(fā)食品中的甲醛,班 級(jí)：應(yīng)011-2 姓 名：徐紅艷 指導(dǎo)教師：張 強(qiáng)（高級(jí)實(shí)驗(yàn)師）,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,1引言 甲醛常用作消毒劑，防腐劑等，它是一種原生質(zhì)毒物,接觸后即發(fā)生皮膚和粘膜強(qiáng)烈刺激作用，對(duì)人體細(xì)胞功能損害較大,甚至可能致癌。同時(shí)對(duì)記憶力，注意力等神經(jīng)行為功能也有影響。次硫酸氫鈉甲醛俗稱吊白塊或雕白粉,分子式為NaHSO2CH2O2H2O ,可釋放出甲醛。甲醛和吊白塊能改善食品的感觀性狀,具有漂白、防腐的作用。近年來(lái)不法商販為獲利,將吊白塊或甲醛作為防腐劑加入到水發(fā)食品中。國(guó)際上把甲醛列為能引起癌癥的物質(zhì)。,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,返回,上一張

2、,下一張,結(jié)束放映,目前測(cè)定甲醛的經(jīng)典方法是分光光度法,該法簡(jiǎn)單、快速，但易受酚、SO2以及其它醛、胺的干擾,容易造成假陽(yáng)性。GC 法由于甲醛分子太小,直接進(jìn)GC 分析時(shí)出峰太快,且在FID 檢測(cè)器無(wú)響應(yīng);LC 法也因甲醛極性太大而與溶劑峰同時(shí)流出,而且在紫外無(wú)吸收無(wú)法檢測(cè)。因此食品中甲醛的測(cè)定一般先將甲醛衍生,再用GC 或LC 法進(jìn)行測(cè)定,但仍因食品基體復(fù)雜而常受到干擾,也易造成假陽(yáng)性結(jié)果。,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,本研究采用選擇性離子檢測(cè)(SIM) 對(duì)水發(fā)食品中甲醛進(jìn)行GCMS 測(cè)定,消除了食品中復(fù)雜基體的干擾,提高了選擇性和準(zhǔn)確度,該法目前未見(jiàn)報(bào)道。同時(shí),對(duì)樣品提取方法作了改進(jìn),

3、直接超聲提取而無(wú)需將甲醛蒸餾出來(lái),簡(jiǎn)化前處理過(guò)程,縮短分析時(shí)間,較已有方法簡(jiǎn)便快速,適應(yīng)性廣。,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,2 原 理 2,4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）作甲醛的捕集劑,可與甲醛反應(yīng),脫去一分子水,形成2,4-二硝基苯腙，此反應(yīng)是不可逆的,反應(yīng)式如下:,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,3實(shí)驗(yàn)部分 3.1 儀器與試劑 GCMS2010 氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀(日本島津公司) ，超聲波發(fā)生器。 甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液:取含量為36 %38 %的甲醛(A.R) ,標(biāo)定其準(zhǔn)確濃度后,用水配制成1 g/ l 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,置于冰箱內(nèi)可保存三個(gè)月,使用時(shí)再逐級(jí)稀釋成所需濃度。 衍生試劑:稱取1.

4、0 g 2 ,4-二硝基苯肼(2 ,4-dinitrophenyldrazine ,DNPH ,分析純,中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海試劑公司),加120ml濃HCL,配制成2g/l的衍生試劑,置于棕色瓶中,此溶液可保存三個(gè)月。二氯甲烷、鹽酸均為分析純。,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,3.2 樣品提取 取適量購(gòu)自海產(chǎn)品市場(chǎng)的水發(fā)蝦仁,粉碎后,稱取5. 0 g (精確至0.1mg),加水溶解定容至50ml,密封。超聲波振蕩提取20min,離心取上層清液備用。 3.3 衍生 取20ml液體樣品或固體樣品提取液,加2mlDNPH衍生試劑,混合均勻,避光衍生6h。標(biāo)準(zhǔn)溶液與樣品同時(shí)進(jìn)行衍生。衍生產(chǎn)物2 ,4-二硝

5、基苯腙用2ml二氯甲烷萃取。,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,3.4 GCMS測(cè)定 3.4.1 GC條件色譜柱: DB-5(30m0.25mm0. 33m) 彈性石英毛細(xì)管柱,16010/min240(5min) 。載氣(He),柱前壓40KPa,分流比101,溶劑延遲2min,進(jìn)樣量為1l 。 3.4.2 MS條件EI離子源,電子能量70eV ,離子源溫度200,電子倍增器電壓2300V,GCMS接口溫度250,選擇離子檢測(cè)(SIM)m/z 79、210。甲醛標(biāo)樣衍生物的氣相色譜質(zhì)譜總離子流圖見(jiàn)圖1。,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,圖1 甲醛衍生物的總離子流色譜圖 1：總離子流 2：m/z

6、=79.00 3:m/z=210.00,2,1,3,(t),(Inten),返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,4 結(jié)果與討論 4.1 超生波提取時(shí)間的選擇 選擇一定含量的樣品在超聲波振蕩器中進(jìn)行樣品的提取，實(shí)驗(yàn)了提取時(shí)間分別為10min15min20min 30min40min對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)提取時(shí)間超過(guò)20min時(shí)測(cè)定的峰面積變化不大。因此，我們選擇超生波提取時(shí)間為20min。,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,4.2衍生條件的優(yōu)化 4.2.1 衍生劑用量的影響衍生劑DNPH 用量過(guò)大會(huì)吸附于色譜柱上,對(duì)色譜柱造成損傷；DNPH 用量過(guò)小將導(dǎo)致甲醛衍生不完全。實(shí)驗(yàn)了DNPH用量為1

7、.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0 ml 對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果表明,DNPH 用量在1.05.0 ml范圍內(nèi)測(cè)定結(jié)果基本不變。為保證衍生反應(yīng)進(jìn)行完全,實(shí)驗(yàn)選定DNPH用量為2.0ml。,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,4.2.2 衍生時(shí)間的影響甲醛與2 ,4-二硝基苯肼的衍生反應(yīng)速度較慢,衍生時(shí)間對(duì)測(cè)定結(jié)果影響很大?？疾炝搜苌鷷r(shí)間從0h、1h、2h、4h、6h、14 h 對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果表明,甲醛衍生物的峰面積隨著衍生時(shí)間的增加而增大,6 h 后趨于穩(wěn)定,實(shí)驗(yàn)選擇衍生時(shí)間為6 h。,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,4.3測(cè)定方法及檢測(cè)離子的選擇 由于食品基體復(fù)雜,用G

8、C或HPLC法測(cè)定干擾較大,容易產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。通常需過(guò)層析柱再洗脫凈化,操作繁瑣,回收率較低。故選用GCMS選擇離子檢測(cè)方式(SIM),可消除雜質(zhì)的干擾,避免產(chǎn)生假陽(yáng)性,選擇性明顯提高,靈敏度也比全掃描模式提高兩個(gè)數(shù)量級(jí)。衍生產(chǎn)物2 ,4-二硝基苯腙的質(zhì)譜圖見(jiàn)圖2,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,從圖可見(jiàn),2 ,4-二硝基苯腙的碎片離子豐度最大的峰為m/z 63 ,其次為m/z 79 ,分子離子峰為m/z 210。依據(jù)選擇離子的原則,應(yīng)盡量選擇質(zhì)荷比在高端的離子,以減少干擾;同時(shí)應(yīng)選擇豐度較大的離子,以提高靈敏度。綜合考慮以上兩個(gè)因素,選擇m/z 79 和m/z 210 為檢測(cè)離子,完全消除

9、了雜質(zhì)峰的干擾,保證了測(cè)定的準(zhǔn)確性和靈敏度,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,4.4線性范圍、線性方程與檢出限 取甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋成0.2mg/l、0.5mg/l、 1.0mg/l、2.0mg/l、5.0mg/l、10mg/l、25mg/l、50mg/l 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)行GCMS-SIM分析。以A和C作定量工作曲線,線性方程為A=-848.6+1.148105C, r為0.9996,在0.250mg/l的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。最低檢測(cè)濃度為0.1mg/l(S/N = 3),以取樣量5.0g計(jì),本法對(duì)樣品的檢出限為0.1mg/kg。通常,甲醛或吊白塊作為食品添加劑在食品中的加入量遠(yuǎn)高于10mg/kg才有防腐效果。國(guó)家規(guī)定啤酒中甲醛的含量不得超過(guò)2mg/l,故此方法檢出限完全滿足食品分析的要求。,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,4.5 方法的精密度和回收率 取5mg/l甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液20ml各6份,按實(shí)驗(yàn)方法衍生、萃取、上機(jī)測(cè)定,考察方法的精密度,得到其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.67 %。表明本法具有良好的重復(fù)性。 準(zhǔn)確稱取水發(fā)蝦仁樣品5.0g,分別加入20、40、40不同含量的吊白塊,按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定樣品回收率。,返回,上一張,下一張,結(jié)束放映,本文是在分析中心張強(qiáng)老師的悉心指導(dǎo)下完成的。實(shí)驗(yàn)期