1、核酸類藥物生產(chǎn)方法主要有提取法和發(fā)酵法。 提取法生產(chǎn)DNA和RNA的主要技術(shù)是，先提取核酸和蛋白質(zhì)復合物，再解離核酸與蛋白質(zhì)，然后分離RNA與DNA。 發(fā)酵法主要用于生產(chǎn)單核苷酸。,一、核酸類藥物的分離純化一般方法,1、RNA與DNA的提取與制備 2、核苷酸的制備 3、核苷的制備,二、核酸類物質(zhì)的分離提取及其發(fā)酵生產(chǎn),1發(fā)酵法制備RNA,2酶法制備脫氧核苷酸,酶法制備5單核苷酸,雙酶法生產(chǎn)肌苷酸和鳥苷酸,產(chǎn)氨短桿菌嘌呤核苷酸生物合成調(diào)節(jié)機制,5受GMP ATP的反饋抑制,1被G阻遏 2受GMP反饋抑制,3被A阻遏,4受ATP ADP AMP GMP反饋抑制,6受GTP的反饋抑制,注：PRPP5

2、磷酸核糖焦磷酸,產(chǎn)氨短桿菌腺嘌呤缺陷 型菌株IMP發(fā)酵機制,肌苷酸誘變圖譜,肌苷酸產(chǎn)生誘變過程的產(chǎn)量變化,1、選用產(chǎn)氨短桿菌腺嘌呤缺陷型菌株以解除腺嘌呤衍生物對的反饋抑制； 2、提供亞適量A培養(yǎng)基通過補救途徑合成微生物生命活動所需要的DNA，不足以產(chǎn)生反饋抑制的腺嘌呤衍生物； 3、培養(yǎng)基中加入特異抑制IMP脫氫酶的化學物質(zhì)（如8氮雜鳥嘌呤）則IMP被切斷，GMP不能生成，解除GMP的反饋抑制，使IMP進一步被積累；,提高IMP產(chǎn)量的因素,4、Mn2+在限量的情況下培養(yǎng)后期產(chǎn)氨短桿菌細胞膜容易透過細胞膜，并且嘌呤核苷酸補救合成所需的酶和中間體核糖5磷酸很容易透過，在細胞外重新合成大量的肌苷酸；

3、5、因工業(yè)原料和工業(yè)水都含較高的Mn2，通過誘變育種的方法選育了對Mn2+不敏感的變異株，使發(fā)酵液Mn2 含量高達1000g/ml時，肌苷酸的生物合成仍不受影響。,3、核苷生產(chǎn)工藝流程,二、核酸類藥物生產(chǎn) 1、疊氮胸苷 2、阿糖腺苷 3、三氮核苷 4、阿糖胞苷 5、聚肌胞苷酸 6、胞二磷膽堿,是美國FAD批準的治療艾滋病的新藥； 68的病人臨床表現(xiàn)為減輕癥狀、延長壽命的顯著療效；副作用為貧血、白細胞減少，但有32的患者服用后引起股骨頭壞死、破壞人的造血功能。 系核苷酸的類似物，取代正常腺嘧啶核苷酸參與病毒的合成但不能繼續(xù)復制，從而達到阻止病毒增值的目的。,1、疊氮胸苷 （Azidothymidine, AZT）,疊氮胸苷AZT合成工藝,商品名稱病毒唑，主要應用于小兒呼吸系統(tǒng)的疾病治療。顯著改善艾滋病患者的癥狀，毒副作用小，價格便宜，比AZT相差50倍。 它對病毒的作用點多，不易使病毒產(chǎn)生抗藥性。,2、三氮唑核苷 （Vira301, RibacirinRTC),2、氮唑核苷生產(chǎn)工藝,抑制DNA聚合酶，干擾