1、課題三 分解纖維素的微生物的分離,1.纖維素,一、基礎(chǔ)知識(shí),(一)纖維素和纖維素酶,組成單位： 葡萄糖 含量： 地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。 存在： 植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。其中棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。,2.纖維素酶,組成： C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶 作用： 前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖; 第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。 存在： 土壤中一些微生物（如纖維素分解菌）能夠產(chǎn)生纖維素酶，從而能分解纖維素。,一、基礎(chǔ)知識(shí),(一)纖維素和纖維素酶,1.方法：,2.原理：,剛果紅染色法,一、基礎(chǔ)知識(shí),(二)纖維素分解菌的篩選,剛果紅（簡(jiǎn)稱CR）可以與纖維素形成紅色

2、復(fù)合物，但不和纖維二糖、葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。 纖維素分解菌能在剛果紅培養(yǎng)基上形成透明圈。我們可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。,二、實(shí)驗(yàn)流程,土壤取樣,選擇培養(yǎng),梯度稀釋,將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上,挑選產(chǎn)生透明圈的菌落,采集土樣時(shí)，選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹(shù)林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等。,三、實(shí)驗(yàn)操作,1.土壤取樣,由于生物與環(huán)境的互相依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)高，因此從這種土壤中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。,為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？,2.該步驟的目的是什么？,增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從

3、樣品中獲得所需要的微生物。,本配方中的碳源是纖維素，所以能分解纖維素的微生物可以大量繁殖，其他微生物受抑制。,2. 選擇培養(yǎng),三、實(shí)驗(yàn)操作,制備纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）。稱取土樣，將土樣加入裝有30mL該培養(yǎng)基的搖瓶中。將搖瓶置于搖床上，在30下培養(yǎng)1-2d，至培養(yǎng)基變渾濁。,按照稀釋涂布平板法的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋，稀釋最大倍數(shù)到106。,3. 梯度稀釋（制備菌懸液）,三、實(shí)驗(yàn)操作,制備鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基并倒平板。 將稀釋度為104、105、106的菌懸液各取0.1ml涂布在該鑒別培養(yǎng)基上，30培養(yǎng)，至 菌落長(zhǎng)出。每個(gè)稀釋度下需涂布3個(gè)平板。,4. 制備鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基并接種,三、實(shí)驗(yàn)操作,參照課本剛果紅染色法，挑選產(chǎn)生透明圈的菌落，即為分解纖維素的菌落。,三、實(shí)驗(yàn)操作,5.挑選產(chǎn)生透明圈的菌落,剛果紅染色法,方法一： 先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)。,方法二： 在倒平板時(shí)就加入剛果紅。,這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足？,方法一 缺點(diǎn)是操作煩瑣，加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā) 生混雜；優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。 方法二 優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問(wèn)題；缺點(diǎn)一是由于培養(yǎng)基中還含有淀粉類物質(zhì)，可以使能產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽(yáng)性