1、血型鑒定操作規(guī)程一。玻片法（僅適用于正定型)1 、原理：?、 1 根據(jù)紅細(xì)胞上有無(wú) a 抗原或 ( 與)b 抗原，可以將紅細(xì)胞血型分為型、 b 型、ab型與型。根據(jù)抗 -a 與抗 b 抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞得凝集反應(yīng) , 可以鑒定b血型 .1、 2 根據(jù)抗 d 抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞抗原得凝集反應(yīng)，區(qū)分 rh陽(yáng)性與 rhd 陽(yáng)性。2 、標(biāo)本采集 :?用 eda 抗凝管采集被檢對(duì)象靜脈血，充分混勻, 確?？鼓浞?. 緊急情況下可以使用抗凝動(dòng)脈血。嬰幼兒及其她不便于真空管采血得患者, 如不進(jìn)行反定型試驗(yàn)可采集末梢血 .3、 標(biāo)本運(yùn)送與儲(chǔ)存：?采集好得標(biāo)本與申請(qǐng)單同期盡快（一般 2 小時(shí)內(nèi) ) 送往輸血科。標(biāo)

2、本采集后與檢測(cè)后 , 應(yīng)置于 2環(huán)境下。檢測(cè)后得標(biāo)本應(yīng)至少保存 7 天，以備結(jié)果查對(duì)。4 、儀器與材料：抗 a血型定型試劑（單克隆抗體） 、r（ i ）血型定型試劑（單克隆抗體 ) 、載玻片、試管架、一次性塑料滴管、記號(hào)筆。5、 操作步驟：、 1 用標(biāo)記筆在載玻片上劃分成、b、d 三個(gè)區(qū)域 ;5、2 在標(biāo)記好得玻片上分別加滴抗 a、抗 -b 與抗血型定型試劑；?5、3 再各加 1 滴 1%患者紅細(xì)胞懸液（該紅細(xì)胞懸液可以就是鹽水懸液，也可以就是懸浮于自身血漿或血清中得紅細(xì)胞）；5、4 用干凈得攪拌棒將紅細(xì)胞懸液與試劑充分混合 , 并把混合物均勻涂開(kāi) , 使其覆蓋大約直徑 2 m得面積；?5、緩

3、慢連傾斜搖動(dòng)玻片2min，觀察結(jié)果并記錄。、 結(jié)果判定 :6、1 凝集或發(fā)生溶血為陽(yáng)性結(jié)果；6、2 細(xì)胞混勻 2min 后仍呈懸液狀態(tài)得為陰性結(jié)果;6、3 對(duì)結(jié)果有懷疑 , 應(yīng)用試管法或微柱凝膠法重復(fù)實(shí)驗(yàn)。二、紙板法1 、原理 :?、根據(jù)紅細(xì)胞上有無(wú) a 抗原或（與） b 抗原 , 可以將紅細(xì)胞血型分為 a型、 b 型、 b 型與 o型 . 根據(jù)抗與抗 b 抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞得凝集反應(yīng) , 可以鑒定ab血型正定型。a1 細(xì)胞上含有 a 與 1 抗原 ,b 細(xì)胞上含有 b 抗原。用已知得 a、 b 細(xì)胞檢測(cè)被檢者血清中有無(wú)相應(yīng)得抗 - 或抗 b 抗體 , 即反定型。綜合正反定型結(jié)果確定受檢標(biāo)本 a

4、血型。?1、 2 根據(jù)抗 -d 抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞抗原得凝集反應(yīng), 區(qū)分 rh陽(yáng)性與 rd陽(yáng)性 .2 、標(biāo)本采集：用 eda 抗凝管采集被檢對(duì)象靜脈血 , 充分混勻 , 確保抗凝充分。 緊急情況下可以使用抗凝動(dòng)脈血 . 嬰幼兒及其她不便于真空管采血得患者 , 可采集末梢血。、 標(biāo)本運(yùn)送與儲(chǔ)存：?采集好得標(biāo)本與申請(qǐng)單同期盡快 ( 一般 2 小時(shí)內(nèi)）送往輸血科 . 標(biāo)本采集后與檢測(cè)后，應(yīng)置于環(huán)境下儲(chǔ)存。 檢測(cè)后得標(biāo)本應(yīng)至少保存 7 天，以備結(jié)果查對(duì)。4 、儀器與材料：抗 ab 血型定型試劑 ( 單克隆抗體）、rhd(igm)血型定型試劑 ( 單克隆抗體 ) 、血型鑒定專用紙板、試管架、一次性塑料滴管

5、、記號(hào)筆。5、 操作步驟 :?5、1 取潔凈五孔血型鑒定專用紙板 , 做好姓名標(biāo)記；5、 按紙板標(biāo)識(shí)向每孔中分別加入相應(yīng)試劑抗a、抗 b、抗 d 血清各 1 滴以及受檢者血清各2 滴;?5、 3各孔中分別加入受檢者紅細(xì)胞適量及相應(yīng)所需3-5%a 型、型試劑紅細(xì)胞（自制或商品化試劑 ) 并攪勻，使其覆蓋直徑5-20mm得面積 ;?、 輕輕旋轉(zhuǎn)搖晃混勻，直到形成均勻得細(xì)胞懸液或凝集塊，邊搖邊觀察；?、 3m以上記錄結(jié)果 . 記錄觀察到得凝集程度或溶血程度。6、 結(jié)果判定 :、 1 凝集或發(fā)生溶血為陽(yáng)性結(jié)果;6、2 細(xì)胞混勻 min 后仍呈懸液狀態(tài)得為陰性結(jié)果;、 3 對(duì)結(jié)果有懷疑 , 應(yīng)用試管法或

6、微柱凝膠法重復(fù)實(shí)驗(yàn)。三、試管法1 、原理 :?1、1 根據(jù)紅細(xì)胞上有無(wú) a 抗原或 ( 與)b 抗原 , 可以將紅細(xì)胞血型分為 a 型、b 型、 b 型與 o型. 根據(jù)抗 a 與抗 -b 抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞得凝集反應(yīng)，可以鑒定 ab血型正定型。 a1 細(xì)胞上含有 a 與 a1 抗原， b 細(xì)胞上含有 b 抗原 . 用已知得 a、b細(xì)胞檢測(cè)被檢者血清中有無(wú)相應(yīng)得抗 - 或抗抗體，即反定型。綜合正反定型結(jié)果確定受檢標(biāo)本 ao血型。1、2 根據(jù)抗 - 抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞抗原得凝集反應(yīng)，區(qū)分 rh陽(yáng)性與 rhd陽(yáng)性。2 、標(biāo)本采集 :?用 edt抗凝管采集被檢對(duì)象靜脈血， 充分混勻 , 確保抗凝充分 .

7、緊急情況下可以使用抗凝動(dòng)脈血。 嬰幼兒及其她不便于真空管采血得患者， 如不進(jìn)行反定型試驗(yàn)可采集末梢血。3、 標(biāo)本運(yùn)送與儲(chǔ)存 :采集好得標(biāo)本與申請(qǐng)單同期盡快 ( 一般小時(shí)內(nèi)）送往輸血科。標(biāo)本采集后與檢測(cè)后 , 應(yīng)置于 28環(huán)境下儲(chǔ)存。檢測(cè)后得標(biāo)本應(yīng)至少保存天，以備結(jié)果查對(duì) .4 、儀器與材料：抗 /b 血型定型試劑（單克隆抗體 ) 、hd（i m）血型定型試劑 ( 單克隆抗體 ) 、一次性試管、試管架、一次性塑料滴管、記號(hào)筆。、 操作步驟 :5、1 ab 血型正定型試驗(yàn)?5。11 取兩支潔凈試管，做好標(biāo)記，按試管標(biāo)記向試管中加入抗 -a 、抗 b 血清各 1 滴；?5。1.2 向每管中各加入 1

8、 滴 3被檢紅細(xì)胞鹽水（血清或血漿）懸液 ; ?5。 . 輕輕混合試管內(nèi)容物 ,1000g 離心 15；?5。1.4 結(jié)果判斷：將試管拿成銳角，緩慢傾斜 ,使液體通過(guò)細(xì)胞扣 ,當(dāng)細(xì)胞不再附著在試管上時(shí)，繼續(xù)緩慢地傾斜與振搖，直到形成均勻得細(xì)胞懸液或凝集塊；?5.15 記錄結(jié)果：記錄觀察到得凝集程度或溶血程度 .用 a 反定型實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證正定型結(jié)果 .5、2 ab 血型反定型試驗(yàn)?5。 2 1 取兩支潔凈試管，做好標(biāo)記 ,向每管中各加滴被檢血清 (或血漿） ; ?.。 2 按試管標(biāo)記向試管中加入 35a 型、型試劑紅細(xì)胞各 1 滴;. .3 輕輕混合試管內(nèi)容物，100g 離心 1s；?5。2。

9、 結(jié)果判斷 :將試管拿成銳角 ,緩慢傾斜 ,使液體通過(guò)細(xì)胞扣，當(dāng)細(xì)胞不再附著在試管上時(shí)，繼續(xù)緩慢地傾斜與振搖， 直到形成均勻得細(xì)胞懸液或凝集塊；? 2 5 記錄結(jié)果：記錄觀察到得凝集程度或溶血程度。與正定型結(jié)果進(jìn)行相互驗(yàn)證；?526 如果反應(yīng)較弱 ,可將試管于室溫 (或 4)放置 50mi，以促進(jìn)弱抗體得反應(yīng) ,再離心觀察結(jié)果。如果反應(yīng)還就是很弱可以增加血清（或血漿）滴數(shù)，最多到 6 滴以加強(qiáng)反應(yīng)。、 3rhd 血型鑒定試驗(yàn)?。取一支潔凈試管，做好標(biāo)記，加入抗d 血清滴；?。 3 向試管中加入 1 滴 5被檢紅細(xì)胞鹽水 (血清或血漿）懸液；? 3。 3 輕輕混合試管內(nèi)容物， 10 g 離心 1

10、5s；?5。 3. 結(jié)果判斷 :將試管拿成銳角 ,緩慢傾斜，使液體通過(guò)細(xì)胞扣，當(dāng)細(xì)胞不再附著在試管上時(shí)，繼續(xù)緩慢地傾斜與振搖 ,直到形成均勻得細(xì)胞懸液或凝集塊；?5.3 5 記錄結(jié)果 :記錄觀察到得凝集程度或溶血程度。?、凝集或發(fā)生溶血為陽(yáng)性結(jié)果；、 2 細(xì)胞混勻 min 后仍呈懸液狀態(tài)得為陰性結(jié)果。四、微柱凝膠法1、原理：a /rhd 卡得微管中裝填有葡聚糖凝膠顆粒與抗、 抗、抗標(biāo)準(zhǔn)血清，如果紅細(xì)胞表面存在或 b 或 d 抗原，就會(huì)與對(duì)應(yīng)得抗體發(fā)生凝集反應(yīng) ,凝膠顆粒具有分子篩得作用 ,可以阻滯凝集得紅細(xì)胞在離心力得作用下通過(guò)凝膠顆粒，使其懸浮在凝膠顆粒中 ,未凝集得紅細(xì)胞則可以通過(guò)凝膠顆粒

11、到達(dá)微管底部。2 、標(biāo)本采集及處理：?用 edta抗凝管采集被檢對(duì)象靜脈血，充分混勻 , 確?？鼓浞帧＞o急情況下可以使用抗凝動(dòng)脈血 . 000rpm，離心 -5mi 。（嬰幼兒及其她不便于真空管采血得患者，如不進(jìn)行反定型試驗(yàn)可采集末梢血 .)3、標(biāo)本運(yùn)送與儲(chǔ)存 :?采集好得標(biāo)本與申請(qǐng)單同期盡快（一般 2 小時(shí)內(nèi) ) 送往輸血科。標(biāo)本采集后與檢測(cè)后 , 應(yīng)置于 8環(huán)境下儲(chǔ)存。檢測(cè)后得標(biāo)本應(yīng)至少保存 7 天，以備結(jié)果查對(duì)。4 、儀器與材料： hd 血型定型檢測(cè)卡（單克隆抗體） 、 abor d 血型檢測(cè)卡 ( 微柱凝膠 ) 、試管架、一次性塑料滴管、記號(hào)筆、一次性試管 .5、 操作步驟：5、1

12、將微住凝膠試劑卡做好患者姓名等標(biāo)記；5、 將待檢紅細(xì)胞用低離子強(qiáng)度溶液稀釋成 0、5 0、8%得懸浮液，加入標(biāo)有 a、 -、 - (與對(duì)照）得微管中 ,各滴（或 5 u） ; ?、用低離子溶液將反定型紅細(xì)胞 1、b 配成 0、5 0、8濃度 , 分別加入對(duì)應(yīng)得微孔 ac、bc 中, 各 1 滴 ( 或 50 ). 再分別加入患者血漿各1 滴 ( 或 50 l) ；5、4 專用離心機(jī)離心 5 分鐘 ,2 分鐘 90 p, 分鐘 1500 pm，取出肉眼判定結(jié)果 .、 結(jié)果判定 :?6、 1 陽(yáng)性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微住凝膠中形成得特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中 ,為陽(yáng)性反應(yīng)。6、1 反應(yīng)強(qiáng)度：特異性紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物位于凝膠表面 ,為強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)；復(fù)合物在凝膠中為弱陽(yáng)性反應(yīng)；愈靠近凝膠底部顆粒愈小，反應(yīng)愈弱。?