1、醫(yī) 用 化 學 實 驗,生物化學教研室 張麗娜,1,實驗課注意事項： 不遲到，不早退，做好課前預習工作 穿好白大褂 使用煤氣時注意安全 試劑用后及時歸位 保持嚴肅認真的實驗態(tài)度 及時記錄實驗結果，按時完成實驗報告,2,實驗報告格式： 1、實驗目的 2、實驗原理 3、實驗操作 4、實驗結果（真實、客觀） 5、討論（實驗報告的核心） 6、意見與建議（可選擇）,3,實驗一 醫(yī)化實驗基本操作,玻璃儀器的洗滌 吸量管的使用 注意：右手食指按住吸量管口 溶液的混勻 指彈混勻、攪拌混勻、倒轉混勻、旋渦混合器混勻等,4,實驗二 電離平衡與緩沖溶液,實驗目的 1、掌握同離子效應的原理 2、學習通過韓-哈方程式配

2、制緩沖溶液 3、觀察稀釋對緩沖溶液pH值的影響 4、學習吸量管及pH計的使用,5,1、同離子效應,實驗原理,HAc H+ + Ac-,NaAc Na+ + Ac-,例：,同離子效應使得HAc的電離度降低，溶液的pH升高,6,酸堿指示劑：,紅,橙,黃,紅,淡紅,黃,無色,綠,藍,3.1,4.4,8,10,6,7.6,甲基橙,酚酞,溴麝香草酚藍,7,pH = pKa + lg,鹽 酸,韓-哈方程式,也可表示為：,（鹽的摩爾數） （酸的摩爾數）,n鹽/V溶液 n酸/V溶液,當酸與鹽混合前的濃度相等時：,= pKa + lg,V鹽 V酸,pH,2、緩沖溶液,8,緩沖溶液加水稀釋時，鹽濃度與酸濃度作相同

3、 比例稀釋，因此，緩沖溶液的pH幾乎不因稀釋 而改變。,緩沖溶液的緩沖能力有一定限度，超過該限度 緩沖溶液的pH也會發(fā)生較大改變,9,實驗操作,1、同離子效應,（1）,各1支 + NH3 . H2O 2ml+ 1滴酚酞,1滴NH4Cl,1滴H2O,搖勻 觀察結果,1ml=15滴,（2）,各1支 + 醋酸 2ml+ 1滴甲基橙,1滴NaAc,1滴H2O,搖勻 觀察結果,10,2、緩沖溶液,（1）,測完pH值后2管保留,大試管3支,11,另取2支小試管，以上面試管2里的緩沖液進行實驗,溴麝香草酚 藍各1滴,（2）,12,（3）另取3支小試管，以上面試管2里的緩沖液進行實驗,溴麝香草酚藍各2滴，混勻

4、,NaOH 3滴， 搖勻，觀察結果 繼續(xù)滴加，記錄變色時所加NaOH滴數,HCl 3滴， 搖勻，觀察結果 繼續(xù)滴加，記錄變色時所加HCl滴數,13,2號管緩沖液測好pH后切勿立即倒去 吸量管的使用 pH計的使用,注意事項：,14,1、看清刻度，選擇適當容量的吸量管 2、左手洗耳球，右手吸量管；食指按住管 口，穩(wěn)住液面 3、拿吸量管的時候，刻度面向自己 4、讀刻度時，眼睛與刻度線同一水平，以 下凹面為準 5、吸取另外一種試劑時，要潤洗,吸量管的使用,15,實驗三 功能基反應,實驗目的,1、掌握幾功能基的主要化學性質 2、了解乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互變異構現象,16,1、雙鍵與鹵素的加成反應,實驗

5、原理,紅棕色的溴褪色，可用于鑒定有機物中 是否存在不飽和鍵,17,2、酚性羥基的反應,（1）苯酚的弱酸性,可用于鑒別酚和醇,18,3、醛基的反應,O | R-C-H + 2Cu（OH）2,O | R-C-OH + Cu2O + 2H2O,磚紅色沉淀,（班氏試劑）,酮無此反應，故可用于鑒別醛和酮,19,20,4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互變異構現象,使三氯化鐵溶液呈紫紅色反應具有烯醇式結構,與苯肼反應生成苯腙，顏色？,使紅棕色溴的四氯化碳溶液褪色具有雙鍵結構,O O | | CH3-C-CH2- C-O-C2H5,21,說明乙酰乙酸乙酯是酮式和烯醇式兩種異構體的混合物，兩者之間相互轉變，處于動態(tài)平

6、衡。,O O | | CH3-C-CH2-C-O-C2H5,OH O | | CH3-C = CH-C-O-C2H5,室溫時 酮型（93%） 烯醇型（7%）,凡兩種或兩種以上的異構體能互相轉變，并以 動態(tài)平衡存在的現象互變異構現象,22,5、尿素的化學性質,OH-,紫紅色物質,縮二脲反應：,縮二脲 + CuSO4（少量）,23,1、烯基的反應,實驗操作,+ 硬脂酸10滴,+ 油酸10滴,+ 植物油10滴,逐滴加入5%Br2的CCl4溶液，不斷振蕩試管，記錄結果,24,2、酚性羥基的反應,（1）,+ 液體苯酚2滴 水5滴，搖勻,+ 10%NaOH 2 滴 搖勻，觀察,（2）,+ 0.5%苯酚溶液

7、10滴,+ 0.5%水楊酸溶液10滴,+ 苯甲醇10滴,各加入1%FeCl3 1滴，觀察結果,25,3、醛基反應（大試管6支）,試劑（滴） 1 2 3 4 5 6 40%乙醛液 5 10%NaOH 5 丙酮液 4 1%葡萄糖 4 1%果糖 4 1%蔗糖 4 4 2mol/L鹽酸 10 班氏試劑 10 10 10 10 10 ,1-5管于沸水中加熱3分鐘，觀察結果；6號管加蒸餾水10滴，于沸 水中加熱10分鐘，不時振蕩，再加10%NaOH10滴，班氏試劑10滴 混勻，于沸水中再加熱3分鐘，與5號管比較，記錄結果,26,4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互變異構現象,（1）,+ 10%乙酰乙酸 乙酯2滴,

8、+ 2，4-二硝基苯肼10 滴，振蕩，觀察結 果，寫出反應式,（2）,+ 10%乙酰乙酸 乙酯10滴,+ 1%FeCl31滴，觀察結果,再加溴水1滴，觀察變化，并加以解釋,27,5、尿素的化學性質,+ 尿素1匙,小火加熱，待尿素熔化,紅色石蕊試紙放置管口，觀察變化,繼續(xù)加熱,待管內物質凝固后冷卻試管，加水2ml,玻棒攪動促溶，吸取上層溶液于另一試管中,再加入10%NaOH 、1%CuSO4各1滴，觀察變化,28,注意事項,1、注意區(qū)分以下試劑： 液體苯酚5%苯酚溶液 5%Br2的CCl4溶液溴水 2 、液體苯酚預先加熱，盛放其的試管也要預熱 3、縮二脲反應中試管冷卻后再加水，并用玻棒 輕輕攪動

9、 4、揮發(fā)性試劑全部擺放在邊臺上，用后及時歸位,29,實驗三 動物組織中核酸的提取與鑒定,實驗目的： 1、掌握組織中的核酸的提取與鑒定 2、掌握離心機的使用 3、熟悉加樣器的使用,30,實驗原理 1、提取原理： a: DNA和RNA大部分與Pro結合成核蛋白。 b: 核蛋白可被三氯醋酸沉淀下來。 c: 10%NaCl溶液從沉淀中提取核酸，生成核酸 的鈉鹽 d: 乙醇把核酸鈉沉淀下來,31,核苷 （B-R） 磷酸（P）,2、鑒定原理,核酸核苷酸,嘌呤（A G）,嘧啶,核糖（C U）,脫氧核糖（C T）,32,a:磷酸+鉬酸銨 磷鉬酸 鉬藍 b:嘌呤+AgNO3 絮狀嘌呤銀 c:核糖 糠醛 綠色化

10、合物 d: 脫氧核糖 -羥基-酮基戊醛 藍色化合物,氨基萘酚磺酸,H+,3，5-二羥基甲苯,H+,二苯銨,33,操作步驟,1、提取步驟 制備肝組織勻漿： 脫臼處死或斷頭處死 剖腹取全部肝組織 生理鹽水沖洗血污，吸干凈 三氯醋酸2ml 分散勻漿機勻漿,34,分離提取 于全部勻漿內加入生理鹽水2ml，玻棒混勻 靜置3min， 3000rpm 3min, 棄上清 沉淀加入10%NaCl 2ml，沸水浴3min,玻棒攪拌 取出冷卻，3000rpm 3min 取上清，逐滴95%酒精2管，混勻 靜置5min，3000rpm 5min 棄上清，得白色核酸鈉,35,核酸的水解： 短試管內加入5%H2SO4 3

11、.5ml 玻棒攪勻 沸水浴中10min,36,成分的鑒定,沸水浴35min，觀察結果，靜置15min,觀察結果,嘌呤的鑒定,37,磷酸的鑒定,放置3min，沸水浴35min，觀察顏色差異,38,核糖的鑒定,沸水浴510min，觀察顏色差異,39,脫氧核糖的鑒定,沸水浴510min，觀察顏色差異,40,注意事項,1、做鑒定部分時盡量用大試管，所有標 號朝試管上方 2、玻璃棒攪拌要輕柔 3、膠頭滴管使用要注意順序，避免污染,41,移液槍的使用 1、看清最大刻度，選擇適當容量的移液槍（最大刻度和讀數的關系） 2、先調好刻度 3、打至第一檔吸入試劑 4、打出試劑時要按至第二檔 5、使用加樣器時要慢、穩(wěn)

12、，不要有氣泡出 現,42,離心機的使用 臺秤平衡 對稱插入 定時定速,43,實驗四 蛋白質呈色反應、沉淀反應及等電點的測定,實驗目的： 1、掌握雙縮脲法、茚三酮法、Folin法定性檢查蛋白質的方法 2、驗證幾種蛋白質沉淀反應的現象及酸堿性環(huán)境的影響 3、了解蛋白質等電點測定,44,一、蛋白質的呈色反應,實驗原理： 雙縮脲反應：含有CONH 、 CSNH、CH2NH等基團的化合物在濃堿液中與硫酸銅生成紫紅色復合物。 茚三酮反應：含有自由氨基的化合物與茚三酮共熱，生成紫色化合物。 Folin法： 酚性羥基在堿性環(huán)境中，與酚試劑生成鉬藍,45,操作步驟,（1）,+ 1：10雞蛋白2滴 1%CuSO4 1滴,+ 10%NaOH 5 滴 混勻，觀察顏色,（2）,+ 1：10雞蛋白4滴 + 蒸餾水10滴 +0.1%茚三酮乙醇8滴，混勻，觀察顏色,蒸餾水6滴+ 10%NaOH3 滴， 酚試劑1滴，混勻，觀察顏色,+ 1：10雞蛋白2滴,+ 0.25%白明膠 0.25%酚溶液 0.25%酪氨酸,46,二、蛋白質的沉淀反應,實驗原理： 1、鹽析：破壞水化膜，中和電荷 常用中性鹽：（NH4）2SO4、Na2SO4、NaCl,2、重金屬鹽類沉淀： 條件：PH PI，蛋白質帶 負電