1、第二十二章 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理,主要內(nèi)容,抗原或抗體的檢測(cè) 免疫細(xì)胞的檢測(cè),抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn),抗原抗體反應(yīng)的特異性 抗原抗體反應(yīng)的可逆性 抗原抗體反應(yīng)的可見(jiàn)性 抗原抗體比例合適 肉眼可見(jiàn)IC (凝集物，沉淀物）,第一節(jié) 檢測(cè)抗原或抗體的體外試驗(yàn),抗原-抗體反應(yīng)影響因素,1 電解質(zhì)：抗原-抗體反應(yīng)通常應(yīng)用0.85%的氯化鈉作為 稀 釋液 ，以供給適應(yīng)濃度的電解質(zhì)。 2 溫度：一般常使用反應(yīng)在37度水浴 或孵育箱中進(jìn) 行。 3.酸堿度：抗原-抗體反應(yīng)適應(yīng)的酸堿度 為PH68。,抗原-抗體反應(yīng)受多種因素影響,往往采用人或動(dòng)物的血清作為抗體來(lái)源， 體外的抗原抗體反應(yīng)也稱血清學(xué)反應(yīng)。 經(jīng)典的血清學(xué)

2、反應(yīng)： 凝集反應(yīng)（agglutination reaction) 沉淀反應(yīng)(precipitation reaction) 免疫標(biāo)記技術(shù),（一）凝集反應(yīng)(agglutination),顆粒性Ag 與相應(yīng) Ab結(jié)合后，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn) 的凝集物。,直接凝集反應(yīng) 間接(被動(dòng))凝集反應(yīng),1. 直接凝集反應(yīng),玻片法： 定性，已知抗體測(cè)未知抗原 細(xì)菌的鑒定和分型 人類(lèi)ABO血型測(cè)定,1. 直接凝集反應(yīng),試管法： 定量，用已知抗原測(cè)未知抗體的量 肥達(dá)氏試驗(yàn)-診斷傷寒和付傷寒,2. 間接凝集反應(yīng),可溶性抗原 載體顆粒 免疫微球 （致敏載體）, 抗體,凝集,間接凝集反應(yīng)：可溶性抗原先吸附在一與 免疫反應(yīng)無(wú)關(guān)的顆粒

3、載體 上，成為致敏顆粒，再與 相應(yīng)抗體結(jié)合，出現(xiàn)的凝 集現(xiàn)象.,常用的載體顆粒,乳膠顆粒,人O型RBC、綿羊RBC,(二) 沉淀反應(yīng),概念：可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在 一定條件下形成沉淀物的現(xiàn)象。 可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、 組織浸出液、細(xì)菌濾液等 類(lèi)型： 1）單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(singlel agar immunodiffusion) 2）雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(double agar immunodiffusion) 3）對(duì)流免疫電泳（counter immunoeletrophoresis),1）單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),應(yīng)用：Ag鑒定，定量,2）雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),(三) 免疫標(biāo)記技術(shù),利用熒光

4、素、酶、放射性核素等標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。 四大標(biāo)記技術(shù)： 1）免疫酶測(cè)定(enzyme immunoassay, EIA) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA） 2）免疫熒光技術(shù)(immunofluorescence technique) 3）放射免疫測(cè)定法(radioimmunoassay, RIA) 4）免疫膠體金技術(shù)（immunological colloidal gold signature, ICS),1. 酶免疫測(cè)定,用酶標(biāo)記抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)，通過(guò)酶作用于底物后顯色來(lái)判斷結(jié)果。 抗原抗體反應(yīng)酶促反應(yīng),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbe

5、nt assay, ELISA）,將已知抗原或抗體吸附在固相載體表面，再用酶標(biāo)抗體進(jìn)行檢測(cè)的抗原抗體反應(yīng)。 特點(diǎn)：敏感性高（ng-pg），操作簡(jiǎn)便 類(lèi)型： 直接法(雙抗體夾心法): Ab +Ag + Ab* 間接法: Ag +Ab + 抗Ab*,雙抗體夾心法,2. 免疫熒光技術(shù),免疫熒光技術(shù):用熒光素標(biāo)記一抗或二抗，檢測(cè)特異 性抗原或抗體的方法。 分類(lèi)： (1)直接熒光法 （2) 間接熒光法 結(jié)果觀察: (1) 熒光顯微鏡 (2) 流式細(xì)胞儀(Flow cytometer，F(xiàn)CM),3、放射免疫測(cè)定法(radioimmunoassay,RIA),用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)的技術(shù),

6、第二節(jié) 免疫細(xì)胞功能的檢測(cè),免疫細(xì)胞的分離 免疫細(xì)胞的功能測(cè)定,一、免疫細(xì)胞的分離,外周血單個(gè)核細(xì)胞 T、B細(xì)胞的分離與鑒定 磁珠分離法 熒光激活細(xì)胞分選儀分離法 （流式細(xì)胞術(shù)，F(xiàn)CM),外周血單個(gè)核細(xì)胞,二、免疫細(xì)胞功能的測(cè)定 （一） T細(xì)胞功能測(cè)定： (1)T 細(xì)胞增殖(轉(zhuǎn)化)試驗(yàn)： 形態(tài)計(jì)數(shù) 3H-TdR或125I-UdR摻入法 MTT比色法 （2）皮膚試驗(yàn),淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（形態(tài)學(xué)示意圖）,淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)（3H-TdR摻入法）示意圖,結(jié)核菌素,注射受試者前臂內(nèi)側(cè)皮內(nèi),紅腫硬結(jié)0.5cm,陽(yáng)性,觀察局部超敏反應(yīng),4872小時(shí)后,無(wú)紅腫硬結(jié) 或0.5cm,陰性,原理： 型超敏反應(yīng) 步驟：

7、,皮膚試驗(yàn)（結(jié)核菌素試驗(yàn)）,應(yīng)用：,OT試驗(yàn),（二） B細(xì)胞功能測(cè)定 (1) 單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)等測(cè)定Ig的含量 (2) 抗體形成細(xì)胞測(cè)定 溶血空斑形成試驗(yàn),第二十三章 免疫學(xué)防治,特異性免疫,自然免疫,人工免疫,自然被動(dòng)免疫,自然主動(dòng)免疫,來(lái)自母親的抗體,自然感染 （隱性、顯性）,人工被動(dòng)免疫,抗毒素 免疫球蛋白,人工主動(dòng)免疫,疫苗 類(lèi)毒素,SIgA,IgG,一、人工主動(dòng)免疫,輸入抗原物質(zhì)（疫苗，類(lèi)毒素)，主動(dòng)刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)建立長(zhǎng)期的免疫應(yīng)答，獲得特異性免疫力的方法。,作用: 預(yù)防或治療,慢、持久,主動(dòng)免疫 被動(dòng)免疫,(一) 滅活疫苗 （二）減毒活疫苗 （三）類(lèi)毒素,病原體滅活,減毒活病原體

8、,細(xì)菌外毒素脫毒,體液免疫,體液免疫、細(xì)胞免疫,類(lèi)毒素（toxiod） 用細(xì)菌的外毒素經(jīng)0.3%0.4%甲醛處理制成。 特點(diǎn)：毒性消失,保留免疫原性； 接種后能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗毒素。 如：白喉類(lèi)毒素 破傷風(fēng)類(lèi)毒素,（四）新型疫苗,亞單位疫苗： 提取病原體有效的免疫原成分制成的疫苗。 霍亂亞單位疫苗 結(jié)合疫苗：細(xì)菌莢膜多糖+白喉類(lèi)毒素 合成肽疫苗： 用人工合成多肽抗原連接適當(dāng)載體與佐劑 制成的疫苗。 豬口蹄疫合成肽疫苗 基因工程疫苗： 利用DNA重組技術(shù)制備的只含保護(hù)性抗原 的純化疫苗。HBsAg疫苗,計(jì)劃免疫Planed immunization,據(jù)某些傳染病的疫情監(jiān)測(cè)和人群免疫狀況，按照規(guī)定的免疫程序有計(jì)劃地對(duì)人群進(jìn)行預(yù)防接種，提高人群免疫水平，控制以至最終消滅相應(yīng)的傳染病,二、人工被動(dòng)免疫（Artificial passive immunization）,輸入免疫效應(yīng)物質(zhì)（抗體等），使機(jī)體被動(dòng)立即獲得短期特異免疫力的方法。,快、短暫,應(yīng)用：緊急預(yù)防或治療,人工被動(dòng)免疫制劑,抗毒素 人免疫球蛋白制劑 單克隆抗體 細(xì)胞因子,抗毒素的兩重性：,異種抗原，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗馬血清抗體，引起超敏反應(yīng)（I，III）。,特異性抗體-中和外毒素,兩類(lèi)免疫方法的比較：,人工免疫