1、免疫規(guī)劃所實驗室監(jiān)測情況及生物安全,河南省疾控中心免疫規(guī)劃所實驗室 徐瑾,實驗室監(jiān)測內容提要,AFP 麻疹 流感 流腦 肝炎 綜合監(jiān)測 標本采集與運送,河南省脊灰實驗室,成立于1966年 1992年加入國家脊灰實驗室網絡 通過每年國家脊灰實驗室組織的職能考核(盲樣) 1997、1999、2000、2002、2004、2007和2009年通過世界衛(wèi)生組織現場認證 目前成員3人,AFP實驗室監(jiān)測,歷年標本檢測情況,河南省2010年AFP監(jiān)測情況,報告AFP病例612例，非AFP病例9例 15歲以下兒童報告發(fā)病率2.47/10萬 采集AFP標本600例 接觸者病例8例 外省病例4例,2010年合格標

2、本采集情況,共采集600例AFP標本，單份便9例，采雙份便591例，其中合格標本501例，不合格標本90例,2010年實驗室監(jiān)測指標,7天內上細胞分離培養(yǎng)率（%） 96.5 糞便標本28天內實驗結果報告率（%） 94.4 糞便標本中PV 分離陽性率（%） 2.7 糞便標本中NPEV分離陽性率（%） 21 PV分離物14天內送國家脊灰實驗室率（%） 100 PV分離定型結果與國家脊灰實驗室符合率（%） 100,河南省脊灰實驗室歷年數據比較,2010年PV陽性分離物月份分布圖,2010年PV型別分布圖,非脊灰病毒,近年來非脊灰樣病變增多 2010年共分離到51例71株 地區(qū)上無聚集性分布,脊灰抗體

3、水平監(jiān)測結果,脊灰抗體水平結果分析,當連續(xù)多年無病例發(fā)生時, 人群中抗體的獲得主要是依靠疫苗的免疫接種, 且抗體陽性率及幾何平均滴度（GMT ）取決于相應疫苗的免疫接種率及接種質量。我省健康人群I,II,III 型脊灰中和抗體陽性率均保持在較高水平,這是不斷提高脊灰疫苗常規(guī)接種率和連續(xù)多年開展強化免疫的成效。尤其是5 6歲以下各年齡組的脊灰中和抗體陽性率與GMT 處于較高水平, 這與免疫程序有關( 1 歲內開 展3 次脊灰疫苗基礎免疫, 18 月齡、4 足歲開展2 次加強免疫),免疫成功率監(jiān)測結果,免疫成功率結果分析,安陽縣33對血清樣品，免疫前抗體GMT（I、II、III）分別為17.04、

4、22.87、14.40；免疫后抗體GMT（I、II、III）分別為302.84、358.26、74.14。 原陽縣30對血清樣品，免疫前抗體GMT（I、II、III）分別為9.62、14.25、6.06；免疫后抗體GMT（I、II、III）分別為82.52、125.08、18.38。,OPV監(jiān)測結果,OPV效價監(jiān)測分析,根據國內配比3價脊髓灰質炎糖丸疫苗出廠合格總劑量為5.7 logTCID50 /粒 ，以上監(jiān)測單位的OPV效價均達標。,討論,PV分離率較08年以前有大幅度降低，并且在所有16例AFP病例脊灰病毒分離物中，31.25%(5例)是兩種以上型別疫苗株病毒的混合物，且集中在冬季強化免

5、疫活動以后，很可能是在AFP病例發(fā)病后給病人口服OPV再采集糞便標本，這樣會導致人為提高了PV分離率，加大了實驗室的工作量,并給臨床確診帶來一定的困難。為提高采集糞便標本的質量必須進一步加強基層工作人員的培訓工作，增強AFP 病例報告意識和主動監(jiān)測能力，增強及時發(fā)現AFP病例并采集、送檢合格糞便標本的意識，杜絕在麻痹后采便前給病人服用脊灰疫苗的做法，提高合格糞便標本的采集率及送檢率，確保實驗室監(jiān)測的準確性和可靠性。,Isolation Rate of poliovirus and NPEV from AFP cases during 2000 2011.4 2000-2011年4月AFP病例中

6、PV和NPEV的分離率,21,2010年分離株和疫苗株相比VP1編碼區(qū)核苷酸變異數,22,Type I,Type II,Type III,AFP病例監(jiān)測目的,及時發(fā)現輸入性脊灰野病毒，采取措施防止病毒傳播，保持無脊灰狀態(tài)。 及時發(fā)現脊灰疫苗衍生病毒（以下簡稱VDPV）及其循環(huán)，采取措施控制病毒進一步傳播。 評價免疫工作質量，發(fā)現薄弱環(huán)節(jié)。 監(jiān)測脊灰病毒變異情況，為調整疫苗免疫策略提供依據。,監(jiān)測系統(tǒng)及時性評價指標,2010年國家級監(jiān)測系統(tǒng)所有指標均達到衛(wèi)生部和WHO的要求 AFP病例監(jiān)測報告（包括“零”病例報告）及時率80%； AFP病例報告后48小時內調查及時率80%； AFP病例14天內雙

7、份合格大便標本采集率80%； AFP病例大便標本7天內送達省級脊灰實驗室及時率80%； 省級脊灰實驗室28天內完成AFP病例大便病毒分離及時率80%； 陽性分離物在14天內送國家脊灰實驗室的及時率80%； 國家脊灰實驗室7天內完成省級送達的陽性分離物型內鑒別的及時率80%； 需進行核酸序列分析的陽性分離物應在完成病毒型內鑒別后14天完成序列檢測； AFP病例麻痹60天內完成病毒型內鑒別及時率80%； AFP病例麻痹75天內隨訪及時率80%；,1959-1961，發(fā)明了口服脊灰活疫苗。,Albert B. Sabin, M.D. 發(fā)明了口服減毒活疫苗。,脊灰病毒分類,“型”指脊灰毒株的血清型，通

8、過血清抗體中和試驗方法定型 目前，根據與同型Sabin株VP1區(qū)核苷酸序列差異，將脊灰病毒劃分為三類： Sabin-like(SL)：與Sabin株VP1區(qū)核苷酸序列相比，變異率1% 脊灰疫苗高變異株病毒：病毒與原始疫苗株相比，衣殼蛋白1區(qū)（VP1區(qū)）核苷酸序列變異介于0.5%1%之間（有58個堿基發(fā)生變異）。 VDPVs：與原始疫苗株病毒相比，VP1區(qū)核苷酸序列變異介于1%15%。 脊灰野病毒：與原始疫苗株病毒相比，VP1區(qū)全基因序列變異超過15%，或者是既往國內外流行過或與既往國內外流行過的脊灰病毒高度相似的病毒。 -脊髓灰質炎野病毒輸入性疫情和疫苗衍生病毒相關事件應急預案（試行）,脊灰病

9、毒引起的病例分類,VAPP VDPVs病例：從AFP病例糞便、咽部或腦脊液、脊髓組織標本分離到VDPVs，經省級專家診斷小組鑒定，臨床不能排除脊灰診斷的病例。 cVDPVs：由相關的脊灰疫苗衍生病毒引起的2例或以上脊灰疫苗衍生病毒病例的事件。 脊灰野病毒病例：糞便、咽部或腦脊液、脊髓組織標本脊灰野病毒檢測陽性，臨床診斷符合脊灰的病例。脊灰野病毒由境外傳入者，為輸入性脊灰野病毒病例。,循環(huán)的VDPVs(cVDPVs) 指在人與人之間傳播著的VDPVs； 免疫缺陷VDPVs(iVDPVs) 患者長期向外環(huán)境中排出VDPVs，分離于患有免疫缺陷的慢性排毒者； 未歸類VDPVs（aVDPVs） 指分離

10、自非免疫缺陷患者或與爆發(fā)無關的單個VDPV，或從環(huán)境中分離到的VDPV，這些VDPV暫時無法歸類到第1、2類VDPV中。,已經證實有3種VDPVs,所謂VDPV，是指那些有明確證據表明，循環(huán)的時間顯著超過OPV在服苗者體內正常繁殖的時間的脊灰病毒。 I型OPV-最長14天 II型OPV-最長72天 III型OPV-最長72天 VDPV只能依賴于VP1區(qū)核苷酸序列測定來確定（所以劃分標準有些武斷）； 對于所有來源于OPV的脊灰病毒，都必須進行VDPV的篩查，并做進一步的生物學特征鑒定。,29,尼日利亞和剛果發(fā)生II型cVDPVs,循環(huán)病毒的數量(百分比),與Sabin2相比，VP1區(qū)核苷酸 變異

11、的個數,30,II型疫苗株病毒數次被發(fā)現與cVDPV相關，但是不滿足現行的cVDPV的標準； 一些國家或地區(qū)（AFP病例或接觸者）中分離到的脊灰疫苗變異株VP1區(qū)核苷酸變異在0.5%-1%之間，但在時間或空間上呈現聚集性，VP1區(qū)核苷酸序列顯示這些病毒是單一來源進化的，有明顯的相關性，即病毒學證據提示這些病毒發(fā)生了循環(huán)。,31,WHO建議更改II型VDPV的定義,與Sabin2株相比，VP1區(qū)核苷酸序列變異個數大于等于6，應該被報告為VDPV； 對cVDPV或iVDPV的評估和控制措施不變； 實驗室檢測方法不變； I型和III型VDPV 的定義不變。,一變三不變,32,The Sequenci

12、ng Result of 2010 by NPL,1996-2010年中國II型脊灰病毒的序列分析,病毒分離株的數量,與Sabin2相比，VP1區(qū)核苷酸 變異的個數,34,WHO在對眾多國家和地區(qū)對II型脊灰疫苗病毒VP1區(qū)核苷酸變異在0.5%-1%的毒株循環(huán)進行了深入研究和總結，發(fā)現II型更容易發(fā)生循環(huán)，建議更改II型VDPV定義標準，為早期發(fā)現和阻斷II型病毒的循環(huán)爭取寶貴的時間。 對脊灰消滅計劃的影響：對實驗室檢測和報告沒有影響；對報告病例（未引起循環(huán)）的后續(xù)追蹤調查影響沒有明顯提升。,35,2007年脊髓灰質炎病毒VP1區(qū)核苷酸序列分析,接觸者標本的采集,（1）AFP病例接觸者 （2）

13、VDPV病例、輸入性脊灰野病毒病例接觸者 （3）高危AFP病例和聚集性臨床符合病例,接觸者標本的采集- AFP病例接觸者,以下情況應采集AFP病例的5名接觸者（原則上5 歲以下）大便標本。 1）每年AFP病例大便標本數少于150份的省； 2）未采集到合格大便標本的AFP病例； 3）根據臨床或流行病學資料高度懷疑為脊灰的AFP病例； 4）死亡的AFP病例。,原始標本運送,（1）標本采集后要在7天內送達省級脊灰實驗室，標本應冷藏運送，在送達省脊灰實驗室時帶冰且包裝完整。標本的運送要符合國家對標本運送的有關要求。 （2）采集的標本應有完整的登記資料，一并送達省脊灰實驗室。標本標簽登記要清楚，標本送檢

14、表項目要填寫完整 。,AFP糞便標本采集注意事項-1,采集標本需使用統(tǒng)一配發(fā)的一次性無菌采樣管。不要使用玻璃容器、藥瓶、塑料袋、紙盒等其它容器，這些容器容易泄漏造成生物安全事故。請各地市及時檢查采樣管數量，不足時及時補充。 采樣管需標識清楚。采樣管上需標識病人姓名，采樣時間，第一份或第二份。 采集標本量需足夠且適量。大便標本需采集5-8克，采樣管半管即夠，不要裝滿，防止冷凍后體積膨脹溢出。,AFP糞便標本采集注意事項-2,帶冰運送和保存。脊灰病毒耐冷怕熱，為提高病毒檢出率，采集標本后需及時帶冰送至省疾控中心脊灰實驗室，如不能及時運送，需保存在-20條件下。運送時必須用冷藏包或保溫筒/杯運送，建

15、議使用非水性保冷袋，防止冰塊融化后污染標本，請根據各地市路程遠近及所需時間帶足夠量冰袋（塊），如使用冰塊，請將冰塊用自封袋（雙層）密閉包裝，標本也需單獨密封包裝（推薦使用自封袋）。,AFP糞便標本采集注意事項-3,發(fā)病后不要服苗。確需服苗的采集標本后再服苗。 采雙份糞便標本。雙份便采集間隔時間為24-48小時內，即超過24小時，不超過48小時。 接觸者標本需及時采集并送至河南省疾病預防控制中心。如可能請同時采集，不能同時采集的請及時通知病例所在地疾控中心。,麻疹實驗室監(jiān)測,我們需要實驗室網絡來做麻疹監(jiān)測工作嗎？Do we need lab to do the surveillance work

16、?,Measles case definition 麻疹病例的臨床診斷 Case with fever of 38OC, maculopapular rash, with either cough, coryza or conjunctivitis or any case which a physician thinks is measles 發(fā)熱38OC，出現斑丘疹和至少伴有以下一種癥狀：咳嗽，鼻炎或結膜炎或醫(yī)務人員疑為麻疹,Echoviruses Echo病毒,Measles麻疹,Parvovirus B19微小病毒B19,Dengue登革熱,HHV-6,Rubella 風疹,Others

17、 其它,實驗室在麻疹診斷和鑒別診斷中的作用消除階段越顯重要 The important role of laboratory in measles diagnosis and differentiate diagnosis,在麻疹控制和消除中扮演重要的角色 可疑麻疹病例血清學診斷 麻疹疫苗相關病例的診斷 血清流行病學研究 麻疹疫苗質量和免疫效果的評定 通過分子流行病學研究，鑒定病毒的傳播來源，傳播路線，是本土，還是輸入 實驗室網絡在麻疹強化控制和消除中提供有效的科學支持,實驗室網絡職能,中國麻疹實驗室網絡的建立 2001年，在中國衛(wèi)生部、中國CDC、IVDC、WHO和US-CDC的支持下，建立

18、了中國麻疹實驗室網絡。 中國的麻疹實驗室網絡覆蓋了31個省份（直轄市）、 331個地市。2003年國家麻疹實驗室被任命為西太區(qū)地區(qū)參比實驗室。,河南省麻疹實驗室及網絡的建立,1999年我省開始WHO/CDC協作項目；2000年全省裝備市級麻疹實驗室,配備實驗器材及設備. 2001年全省18市級麻疹實驗室監(jiān)測網絡通過省級實驗室考核認證，承擔起各市麻疹防治的常規(guī)運轉監(jiān)測任務。 2002-2007年省級負責對市級麻疹實驗室網絡進行每年一次的職能考核，公布盲樣血清考核及血清復檢再證實結果 并頒發(fā)合格證書。,31個省級實驗室,國家麻疹實驗室 WHO西太區(qū)參比實驗室,331個地市級實驗室,我國三級麻疹監(jiān)測

19、實驗室網絡框架,執(zhí)行WHO西太去麻疹風疹參比實驗室職能和國家麻疹實驗室職能,實驗室網絡在麻疹強化控制和消除中扮演重要的角色,部分縣級疾控機構也開展了血清學檢測工作,我國各級麻疹網絡實驗室各司其職，為消除麻疹提供實驗室技術平臺和科學保障,50% 麻疹散發(fā)疑似病例為實驗室證實的,2010年疑似麻疹 散發(fā)病例的血清學證實,數據來源： 麻疹監(jiān)測信息報告管理系統(tǒng),全國麻疹監(jiān)測方案要求： 麻疹散發(fā)疑似病例血標本采集率應 80%（79.62%）,2010年疑似麻疹 爆發(fā)病例的血清學證實,全國麻疹監(jiān)測方案要求： 麻疹爆發(fā)疫情血清學確診率應90% 采集病原學標本的爆發(fā)疫情應80%,數據來源： 麻疹監(jiān)測信息報告管

20、理系統(tǒng),麻疹監(jiān)測方案的制定 標準操作規(guī)程 生物安全規(guī)范 各級實驗室職能 血清和病毒庫 信息數據庫 技術儲備,系統(tǒng)運作,執(zhí)行WHO西太去麻疹風疹參比實驗室職能和國家麻疹實驗室職能,全國20062012年消除麻疹行動計劃 要求,當以省為單位麻疹發(fā)病率較高時，有條件可以開展麻疹疑似病例監(jiān)測，重點進行麻疹暴發(fā)疫情的監(jiān)測。 當發(fā)生麻疹暴發(fā)疫情時，應按相關要求采集患者出疹早期鼻咽拭子、尿液或血液等標本，及時送省級麻疹實驗室進行病毒分離。,麻疹實驗室網絡的運轉,-麻疹可疑病例的血清學診斷 -麻疹的血清流行病學 -省級麻疹病毒學監(jiān)測情況 -省級對地市級實驗室網絡質量控制和考核認證 -國家實驗室對省級實驗室的血

21、清再證實情況,麻疹控制的不同階段對實驗室血清學診斷和病毒監(jiān)測的要求,背景麻疹流行地區(qū)的麻疹基因型分布,C2,B3,D2,Rota, P. A. 2003. Update on the global distribution of genotypes of wild type measles viruses. J Infect Dis 187 Suppl 1:S270-6.,河南省麻疹網絡實驗室認證或認可情況,2000年、2002年、2004年、2007國家CDC/WHO專家對河南省級實驗室及鄭州、濮陽、安陽、洛陽等市級麻疹實驗室現場進行評審,均順利通過。 2000年-2006年我省送往國家級麻

22、疹血清標本證實工作,六年中有五年符合率100%. 2001年-2006年接受國家級麻疹盲樣考核連續(xù)六年成績均為100分,并發(fā)給了證書. 2000-2008 年每年省級對18市級麻疹實驗室進行職能考核認證和血清抽檢再證實工作,并發(fā)放成績單或合格證書.,麻疹、風疹散發(fā)病例IgM檢測結果統(tǒng)計,麻疹、風疹散發(fā)病例IgM檢測結果統(tǒng)計,麻疹、風疹暴發(fā)疫情血清學確診分析,2010年分地區(qū)發(fā)病數及血清采集情況,麻疹血清學監(jiān)測標本采集后7日內報告率（%）,0,7,14,21,28,35,42,-7,-14,-21,0,2,4,6,8,10,Rash,Onse 出疹t,Days after rash onset

23、出疹天數,Infection 感染,Relative levels of antibody 相對抗體水平,消除階段：麻疹病例和接觸者的隔離,必要日期: 最后接種日期 出疹日期 出生日期,標本的采集: IgM：單份血清，出疹0-28天 分離: 尿液， N/S，出疹0-5天,麻疹病毒感染人體后抗體動態(tài)和病毒的排泄,有最近免疫史的IgM陽性可疑病例,麻疹消除階段-疫苗相關病例會顯現出來,疫苗相關病例：容易誤診為麻疹病例，病毒基因序列是金標準,可疑麻疹病例血清學檢測策略-強化控制階段,出疹天內單份血清,可疑麻疹病例 suspected measles cases 麻疹IgM measles 陽性pos

24、itive陰性negative 證實麻疹confirmed M 風疹IgM rubella 陽性P 陰性N 證實風疹confirmed R 排除discard,風疹IgM spected Case 可疑病例的血清 陽性 陰性 證實為風疹 麻疹IgM 陽性 陰性 證實為麻疹 丟棄,可疑麻疹病例血清學檢測策略-在接近或達到麻疹消除階段： 先檢測風疹，或同時檢測麻疹和風疹,麻疹病毒學監(jiān)測 1993-2010年麻疹病毒分離株,1993-2010年麻疹病毒學監(jiān)測結果,自2009年起，連續(xù)發(fā)現6起麻疹輸入事件：1D4，2D9,3D11; 其中D11是我國于2009年首次在全球發(fā)現并命名的新基因型，該新基因

25、型的鑒定已經得到了WHO和US CDC的認可； 該新基因型麻疹病毒于2009年12月引起了我國云南孟連縣的麻疹爆發(fā)，流行病學上證實是從緬甸輸入的，由于緬甸所在的東南亞區(qū)尚未開展麻疹病毒的監(jiān)測工作，D11新基因型麻疹病毒的首次發(fā)現對于WHO東南亞區(qū)及其相鄰的我國所屬的西太區(qū)的麻疹病毒的監(jiān)測工作具有非常重要的意義。,A-VL,A-VL,麻疹病毒學監(jiān)測的意義 通過鑒定病毒的分子特征對流行病學方法進行補充,特別是無流行病學 資料時. 確認/鑒別病毒的來源（野毒的基因型來源，本土或輸入； 疫苗病例） 確定病毒的傳播途徑 提供評估控制策略效果的方法 輔助分析不尋常的或嚴重的病例，例如SSPE,MIE,CR

26、S。 評估病毒的傳播模式、為阻斷病毒傳播提供科學依據 提供評估控制策略效果的有效指標。 幫助建立診斷方法 幫助抗病毒制劑的研制（中和抗體） 建立麻疹毒株庫及基因數據庫 發(fā)展疫苗（篩選毒株，和中和位點）,充分的技術儲備和人力資源參與 對中國疫苗全基因組的序列測定和全球所有麻疹疫苗序列的對比分析，迅速平息了有關“中國疫苗被外國插入不明基因片段的“的謊言。 參加衛(wèi)生部組織的現場技術指導和督導，提供技術支撐。 及時對XX省 “疑為麻疹疫苗異常反應死亡” 病例的病因學進行了快速鑒定，證實為EV71引起，為疫苗順利完成接種計劃提供了科學保障。 成功應對和阻斷了”國外輸入D11病毒基因型“帶來的挑戰(zhàn) 提出需

27、要關注麻疹疫苗相關病例的診斷和鑒別診斷,應對消除麻疹，免疫一億兒童帶來的挑戰(zhàn),圍繞麻疹消除的指標-在保證監(jiān)測質量,1.發(fā)病率 95% 4. 爆發(fā) 80%爆發(fā)12月沒有本土麻疹病毒株引起的麻疹病例 *麻疹疑似病例發(fā)病3日內病原學標本（咽拭子）采集率達到60%,實驗室質量控制,每年組織省轄市麻疹實驗室網絡職能考核 血清盲樣考核（下發(fā)麻疹、風疹質控血清） 血清抽樣復核 -共有18家網絡實驗室參加考核,2009綜合監(jiān)測健康人群麻疹IgG抗體水平,2009綜合監(jiān)測健康人群麻疹IgG抗體水平,2009綜合監(jiān)測麻疹疫苗免疫成功率檢測,分年齡健康人群風疹IgG抗體水平,麻疹監(jiān)測存在問題,可疑麻疹病例報告率和實

28、驗室檢測率待提高（大于等于2/10萬）。 數據庫填報不完整，存在缺項漏項。 麻疹疑似病例血標本和咽拭標本采集率、血標本送檢及時率、實驗室報告及時率有待進一步提高。 麻疹暴發(fā)病例均需采集血清標本和咽拭標本,每個散發(fā)病例都要采集標本鑒定病毒來源 每次爆發(fā)每個可能的傳播鏈都要采集標本，以鑒別是否是同一株病毒在持續(xù)傳播 各省要提高散發(fā)和爆發(fā)疫情病原學標本采集率，病毒分離率和基因型別的及時鑒定率 各項指標嚴格按照麻疹監(jiān)測方案執(zhí)行 一個要消除的傳染?。哼_到高質量的監(jiān)測投入經費嚴重不足！,病毒學監(jiān)測存在問題,采樣及送檢要求1,血/血清標本：醫(yī)療機構在發(fā)現麻疹病例或疑似病例時，應負責采集血標本?；疽笫牵翰?/p>

29、血量為23毫升，無溶血，無污染；標本送檢表填寫完整；血標本或分離血清（0.5毫升）應放置4冷藏，并立即通知或24小時內送達轄區(qū)縣級疾病預防控制機構?？h級疾病預防控制機構收到標本后，48小時內將血清（冷藏條件下）和標本送檢表送至市級麻疹血清學實驗室。 鼻咽拭子：在患者出疹早期采集。 采集后4冷藏條件下，48小時送省CDC；如不能及時送檢，放- 70保存，一周內盡快安排送檢。,采樣及送檢要求2,鼻咽拭子、尿液或血液等標本：在患者出疹早期采集。 采集后4冷藏條件下，48小時送省CDC；如不能及時送檢，放- 70保存，并盡快安排送檢。,流感實驗室監(jiān)測,美國CDC通過基因比對分析，宣布病毒來源于豬 MM

30、WR, 21 April 新型重配甲型H1N1流感病毒：含有人流感、豬流感和禽流感病毒基因 Nature, 26 June, Science Express 2009 不是來自中國，不是來源于實驗室,甲型H1N1流感病毒,63家網絡實驗室197家哨點醫(yī)院,203家網絡實驗室356家哨點醫(yī)院,411家網絡實驗室 556家哨點醫(yī)院,擴大流感監(jiān)測網絡,2009年5月前,2009年7月,2009年12月后,流感監(jiān)測方案相關文件,全國流感/人禽流感監(jiān)測實施方案（20052010年度） 甲型H1N1流感監(jiān)測方案(第一版) 衛(wèi)生部關于擴大全國流感監(jiān)測網絡的通知 衛(wèi)生部辦公廳關于印發(fā)甲型H1N1流感監(jiān)測方案（

31、第二版）的通知 衛(wèi)生部辦公廳關于印發(fā)全國流感監(jiān)測方案（2010年版）的通知2010年9月3日 中國疾病預防控制中心關于印發(fā)全國流感檢測技術指南的通知2011年8月9日,一、2010版監(jiān)測方案-明確目標,二、2010年版監(jiān)測方案-監(jiān)測目的,監(jiān)測流感活動水平和流行動態(tài)； 及時發(fā)現流感病毒變異并作出預警； 為全球及我國流感疫苗毒株的預測和推薦提供依據。,三、2010年版方案-監(jiān)測內容改變,病例定義 監(jiān)測時間 樣本量 標本運送及保存 時限,各級實驗室主要工作任務,河南省流感網絡實驗室監(jiān)測概況,網絡實驗室構成 網絡實驗室流感病毒監(jiān)測情況 網絡實驗室流感病毒核酸監(jiān)測能力考核情況 培訓和督導 工作不足 工作

32、要求,河南省流感網絡實驗室構成,2009年5月以前只有河南省疾控中心流感實驗室一家全國流感網絡實驗室，之后擴大到19家，各地市疾控中心檢驗室開始開展流感病毒的實驗室檢測工作。 目前開展病毒分離工作的僅有省中心實驗室，各地市均在積極籌備建設病毒分離實驗室，濮陽、商丘等地已具有病毒分離能力。,2009-2011河南省流感實驗室工作量統(tǒng)計-核酸檢測,2010-2011年河南省ILI標本檢測情況,2005-2011年省中心流感實驗室流感病毒分離情況,2005-2011年省中心流感實驗室流感病毒分離情況,河南省流感監(jiān)測網絡ILI標本送檢及時性,河南省流感網絡實驗室檢測技術培訓班,時間：2010年12月1

33、317日 地點：省中心流感實驗室 目的：建立地市級流感病毒分離能力 對象：各地市流感實驗室技術骨干 內容：流感病毒的細胞分離技術、雞胚分離培養(yǎng)技術、流感病毒的血清鑒定技術,培訓一,河南省流感網絡實驗室檢測技術手把手培訓班,培訓二,時間：2010年3月131日 地點：省中心流感實驗室 目的：提高地市級流感實驗室核酸檢測能力 對象：各地市流感實驗室技術骨干 內容：流感病毒核酸檢測的RT-PCR技術、Real-time PCR技術,流感網絡實驗室現場督導,2010年12月對新鄉(xiāng)、三門峽、信陽、駐馬店進行了網絡實驗室的現場督導 2011年1-8月，對洛陽、濮陽、南陽、鶴壁流感實驗室進行了現場督導，指導

34、并交流病毒分離實驗室建設經驗，爭取盡快開展病毒分離工作。,網絡實驗室流感病毒核酸檢測能力考核,2010年9-10月，國家流感中心對全國流感網絡實驗室進行流感病毒核酸檢測能力考核，我省19個網絡實驗室10個報告結果有誤； 2011年1月省CDC轉發(fā)中國疾控中心考核結果通報，并提出具體整改要求； 2011年4月到5月，由省中心流感實驗室制備考核標本，對全省18家流感網絡實驗室進行盲樣考核，16家網絡實驗室的結果完全正確，平頂山和周口結果有誤； 2011年6月通報省內考核結果，督促各地市做好經驗總結； 2011年8-9月國家流感中心對全國流感網絡實驗室進行流感病毒核酸檢測能力考核，目前該項工作正在進

35、行中。,存在問題,網絡實驗室流感核酸檢測陽性標本，送省CDC實驗室的送檢率低。 陽性標本向省CDC送檢不及時。 咽拭標本保存不當，影響病毒分離陽性率。 不能鑒別流感病毒亞型，只做A、B型的區(qū)分,樣本采集、運送及保存要求1,流感病毒核酸檢測陽性標本保存及送檢要求2,各地市流感網絡實驗室收檢的咽拭標本在核酸檢測實驗完畢后，放-70保存。 核酸檢測陽性標本送省中心流感實驗室進行病毒分離，要求從采樣日期到送檢日期不得大于14天。 省中心流感實驗室分離到的陽性標本需及時送檢國家流感中心進行復核，從采集日期到送檢日期不得超過一個月。,流腦實驗室監(jiān)測,病原學監(jiān)測； 耐藥監(jiān)測 免疫水平監(jiān)測； 健康人群帶菌監(jiān)測

36、；,一、病原學監(jiān)測-醫(yī)療機構內標本采集,醫(yī)療機構發(fā)現疑似流腦病例時，無論是否使用抗生素治療，都要盡快采集病人腦脊液、血液、瘀點（斑）組織液標本，標本要盡可能在使用抗生素治療前采集。 腦脊液：采集1毫升腦脊液，進行涂片檢測、培養(yǎng)分離、抗原檢測和核酸檢測。 血液：抽取病人全血4毫升，其中一部分用于分離血清，-20保存準備檢測抗體，其余全血進行病原培養(yǎng)分離、核酸檢測。 瘀點（斑）組織液標本：選病人皮膚上的新鮮瘀點（斑），消毒后用針頭挑破，擠出組織液，涂片鏡檢。,病原學監(jiān)測疾控部門檢測1,縣級疾病預防控制機構接到醫(yī)療機構報告后，當天應到醫(yī)療機構收集標本，并盡快將標本送市級疾病預防控制機構進行檢測，對于

37、病原和抗原檢測陰性的病例要采集恢復期血清以進行血清抗體測定，檢測抗體的血清標本應冷藏運送。 部分具備檢測能力的縣級疾病預防控制機構，可從事相應的病原學和血清學檢測工作。已經檢測過的標本，報告市級疾病預防控制機構后，直接送省級疾病預防控制機構。 腦膜炎雙球菌比較脆弱，采集標本后，在運送樣品或培養(yǎng)物時，應保持樣品處于2036之間。,病原學監(jiān)測疾控部門檢測2,市級疾病預防控制機構收到病例標本后，進行流腦病原檢測；收集到急性期和恢復期血清后，進行血清抗體測定。收到標本7天內完成標本檢測，并將檢測結果、分離的菌株于48小時內送省級疾病預防控制機構；培養(yǎng)陰性的標本每月匯總送省級疾病預防控制機構。,病原學監(jiān)

38、測疾控部門檢測3,省級疾病預防控制機構收到標本后，應于7天內完成菌株復核鑒定、菌株的耐藥性檢測，還應對培養(yǎng)陰性標本進行特異性核酸PCR檢測。檢測完成后，及時將結果反饋市級疾病預防控制機構，并填寫菌株登記表，于28天內將菌株送至中國疾病預防控制中心。,病原學監(jiān)測結果反饋,各級疾病預防控制機構要及時將檢測結果填入個案調查表，并錄入數據庫，通過網絡直報。同時及時逐級反饋檢測結果，縣級疾病預防控制機構收到上級疾病預防控制機構檢測結果后，應及時將結果反饋送檢的醫(yī)療機構。,二、耐藥性監(jiān)測,省級疾病預防控制中心收到病例菌株或密切接觸者菌株后7天內應完成耐藥性檢測，同時將病例菌株提供給省級衛(wèi)生行政部門指定的三

39、級醫(yī)院用于耐藥性檢測，醫(yī)院收到菌株后7天內應完成耐藥性檢測。,三、人群流腦抗體水平和帶菌率監(jiān)測1,各省衛(wèi)生行政部門應根據過去3年流腦平均發(fā)病水平、人口、地理分布特點，以及當地疾病預防控制機構工作能力等綜合因素，每年在流腦高發(fā)縣設立至少2個監(jiān)測點，低發(fā)縣設至少1個監(jiān)測點，動態(tài)收集相關資料。各省確定監(jiān)測點后，于6月底前上報中國疾病預防控制中心備案。,人群流腦抗體水平和帶菌率監(jiān)測2,每個監(jiān)測點分7個年齡組（1歲、12歲、34歲、56歲、714歲、1519歲、20歲），每個年齡組采集至少30人的血清檢測抗體水平。 每年9月采血1次，每次采血2毫升，編號登記，進行流腦抗體水平的檢測，同時注明采樣對象接種

40、流腦疫苗時間。,人群流腦抗體水平和帶菌率監(jiān)測3,在開展人群抗體水平調查采集血液時，同時采集咽拭子標本，進行流腦菌株分離培養(yǎng)，了解健康人群Nm的帶菌率、帶菌群型。培養(yǎng)所獲得的Nm菌株分純鑒定合格后，將其純培養(yǎng)物的菌苔刮到35支滅菌的脫脂牛奶菌種管中，置-20冰箱保存。,人群流腦抗體水平和帶菌率監(jiān)測4,抗體水平與帶菌率檢測完成后，盡快（最遲于10月底前）將結果電子版上報中國疾病預防控制中心（詳見附表2），分離的菌株于檢測完成后28天內送中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所進一步鑒定分析。,表1 河南省2010 年健康人群流腦A 群、C 群抗體陽性率,表2 河南省2010 年健康人群流腦抗體年齡組分

41、布,肝炎實驗室監(jiān)測,HBsAb和HBsAg,2010年病毒性肝炎實驗室分別在安陽、漯河、周口、南陽、濮陽、鄭州、新鄉(xiāng)等6個地區(qū)采集了血清標本，采集4個年齡組，分別為2-3歲，5-6歲，13-15歲和18歲以上年齡組,乙肝免疫成功率,Anti-HAV lgG,甲肝的綜合監(jiān)測表明，2-3歲和5-6歲的抗體水平較高，分別為90.22%和90.53%，這與近年甲肝疫苗的接種有直接的關系，13-15歲的抗體水平為69.79%，18歲以上的為94.01%，直接反應了甲肝抗體水平隨年齡的增長而增加的趨勢。,甲肝免疫成功率,共三個地區(qū)：分別為原陽、臥龍和太康，每個地區(qū)30份樣本。,標本采集及運送的生物安全要求

42、,法律法規(guī),2004年11月12日 國務院總理溫家寶簽署第424號國務院令，公布病原微生物實驗室生物安全管理條例 可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定 人間傳染的病原微生物名錄,采集病原微生物樣本應具備的條件,第一，應具有與采集病原微生物樣本所需要的生物安全防護水平相適應的設備； 第二，具有掌握相關專業(yè)知識和操作技能的工作人員； 第三，具有有效的防止病原微生物擴散和感染的措施； 第四，具有保證病原微生物樣本質量的技術方法和手段。,一、安全性,執(zhí)行標本采集的所有步驟都必須戴手套、穿實驗服，需要的話，戴防護口罩和防護眼鏡； 不能將帶針頭的注射器直接送檢，其內容物應移至無菌管內

43、； 所有的原始標本容器應該是防漏的，在運輸中應置于防漏的、可封口的塑料袋中，塑料袋應該有一個獨立的、可進行文字書寫的部分；,二、標本的采集與送檢應注意的原則,無菌操作 避免污染； 容器和培養(yǎng)基應預先進行無菌處理并貼好標簽 應選擇感染部位或病變明顯的部位采集標本 避免周圍組織、器官或分泌物中的雜菌污染,在最佳時間采集適宜標本 懷疑流行性腦膜炎的病人，應選取腦脊液、血液或皮膚上的出血淤斑進行檢測；如果進行病毒培養(yǎng)或其抗原檢測，應取急性期標本，采集越早，病毒的陽性檢出率越高。 盡量在抗生素使用前采集 對于懷疑細菌感染的標本，特別是對抗生素敏感的病原體，如腦膜炎奈瑟菌。病毒分離培養(yǎng)的標本應加入抗生素，以避免在病毒培養(yǎng)過程中的細菌污染。,鼻咽拭子保存管：10 ml或15ml螺口塑料管(外螺旋、帶密封墊圈)，可耐