1、第二十三章： 需氧革蘭陽性桿菌及檢驗(yàn) 檢驗(yàn)系 劉濤,棒狀桿菌屬,第一節(jié),* G菌，菌體一端或兩端彭大呈棒狀而得名 * 菌體染色不均勻，出現(xiàn)節(jié)段濃染或異染顆粒 * 排列不規(guī)則，呈柵欄狀，或L形，或V形 * 無莢膜、無鞭毛、不產(chǎn)生芽胞 * 多為條件致病菌，只有白喉棒狀桿菌是致病菌,白喉棒狀桿菌,CASE,患兒，男，6歲，咽痛、聲嘶、咳嗽、發(fā)熱3天； 體溫37 ，心率96/分，白細(xì)胞升高；亞碲酸鉀培養(yǎng)+ 病史：百白破疫苗出生后三個月打了第一針，加強(qiáng)免疫因經(jīng)濟(jì)困難而未接種（家屬說舍不得花錢，一針要40多元；孩子的父親右手殘疾） 問題：什么病？ 患者和密切接觸者需如何處理？,* 白喉（Diphtheri

2、a ）是一種急性呼吸道傳染病,特征：患者咽喉部出現(xiàn)灰白色的假膜,假 膜,一、生物學(xué)性狀,1. 白喉棒狀桿菌的形態(tài)學(xué)特征,細(xì)長桿菌，粗細(xì)不一，一端或兩端膨大呈棒狀，排列不規(guī)則，呈柵欄狀、V字形或L形。,奈瑟染色,革蘭染色,1. 白喉棒狀桿菌的形態(tài)學(xué)特征,異染顆粒 成分： 核糖核酸 + 多磷酸鹽 作用： 儲存養(yǎng)料、鑒定價值,Albert染色,2. 培養(yǎng)特性,*呂氏血清斜面培養(yǎng)物 含凝固的血清，生長迅速，異染顆粒明顯。 *亞碲酸鉀血平板 黑色菌落。,還原,在亞碲酸鉀血瓊脂平板上的白喉棒狀桿菌菌落（1824 h）,亞碲酸鹽,碲（黑色）,根據(jù)對亞碲酸鉀的還原能力、菌落形態(tài)及生化反應(yīng)可將白喉棒狀桿菌分為3

3、種類型：重型（gravis）、輕型（mitis）和中間型（intermedius）。,重型,輕型,菌落不溶血、不規(guī)則、有條紋,菌落溶血、光澤、凸起,3. 變異,* 白喉棒狀桿菌形態(tài)、菌落和毒性均可發(fā)生變異。 * 無毒株 溶原性細(xì)菌（產(chǎn)生外毒素）,噬菌體,4. 抵抗力,* 抗寒冷和干燥 * 對濕熱抵抗力弱 * 對青霉素、氯霉素、紅霉素敏感 對磺胺不敏感,二、致病性與免疫性,1. 致病物質(zhì)：,* 白喉毒素（diphtherotoxin） * 索狀因子（cord factor） * K抗原（K antigen）,2. 致病機(jī)制,1）白喉外毒素：只有攜帶棒狀桿菌噬菌體的溶 原性白喉?xiàng)U菌才能產(chǎn)生外毒素,

4、外毒素結(jié)構(gòu)： B亞單位：有結(jié)合和轉(zhuǎn)位功能 A亞單位：其上有1個催化區(qū),作用靶位：心肌和神經(jīng)細(xì)胞,2. 致病機(jī)制,2）索狀因子 破壞哺乳動物細(xì)胞中的線粒體， 影響細(xì)胞呼吸與磷酸化。,3）K抗原：抗吞噬,3. 所致疾?。?*傳染源：患者、恢復(fù)期帶菌者、健康帶菌者 *傳播途徑：飛沫或污染（多在秋冬季） *臨床表現(xiàn)：,白喉急性呼吸道傳染病,* 臨床表現(xiàn)： 1）細(xì)菌與毒素共同作用引起局部癥狀： 炎癥，壞死，纖維蛋白滲出，假膜導(dǎo)致窒息 2）毒素入血引起全身中毒癥狀： 外周神經(jīng)炎：膈肌麻痹呼吸困難聲帶麻 痹聲音嘶啞軟頜麻痹吞 咽困難 心肌炎,3. 所致疾病：,1）人群易感性 * 普遍易感； * 15歲兒童；

5、 * 成人也有可能。,4. 免疫性,2）免疫特點(diǎn) * 抗毒素免疫； * 感染后機(jī)體可獲得牢固的免疫力； * 機(jī)體還可通過其它方式獲得免疫力： 六月以下嬰兒- 母親 成人- 隱性感染、疫苗,三、微生物學(xué)檢查法,* 標(biāo)本：假膜邊緣取材 * 涂片鏡檢：,革蘭染色 菌體顏色 奈瑟染色 典型 菌體排列 Albert染色 異染顆粒,標(biāo)本片,鏡下特點(diǎn),* 分離培養(yǎng)：,標(biāo)本,接種,呂氏血清斜面,37,612 h,直接涂片鏡檢,接 種,亞碲酸鉀瓊脂平板,培養(yǎng),黑色菌落,1218 h,灰白色小菌落,（快速診斷）,Elek平板試驗(yàn) 白喉?xiàng)U菌的有毒菌株可產(chǎn)生白喉外毒素，白喉抗毒素可與其特異性結(jié)合，中和白喉外毒素的毒性

6、，可用細(xì)菌培養(yǎng)法和動物試驗(yàn)予以證實(shí)。 【原理】 Elek平板毒力試驗(yàn)是一種體外的毒力測定方法。通過觀察白喉抗毒素與白喉外毒素的雙向瓊脂擴(kuò)散現(xiàn)象，判斷所培養(yǎng)的白喉?xiàng)U菌的產(chǎn)毒性。 【材料】 1產(chǎn)毒素的白喉?xiàng)U菌、類白喉?xiàng)U菌及待測的白喉?xiàng)U菌呂氏血清斜面24h培養(yǎng)物。 2Elek瓊脂蛋白胨培養(yǎng)基。 3白喉抗毒素(1000u/m1)、馬或兔血清(無菌)、無菌濾紙條(6.01.5cm)、無菌5ml刻度吸管、無菌平皿及鑷子等。,【方法】 1將Elek瓊脂蛋白胨培養(yǎng)基10ml加熱融化，待冷至5055時，加入無菌的馬或兔血清2ml，立刻混勻，并傾注平板。 2趁瓊脂未凝固前，用無菌鑷子將浸有白喉抗毒素(1000u/

7、m1)的濾紙條(盡量使濾紙條上的抗毒素流盡)貼于平板中央，待瓊脂凝固后將平板置37溫箱內(nèi)12h(平板面朝下)，使培養(yǎng)基略干燥。,3接種細(xì)菌，以接種環(huán)取產(chǎn)毒素白喉?xiàng)U菌、類白喉?xiàng)U菌和待檢的白喉?xiàng)U菌分別以與濾紙條成垂直的方向劃線接種，接種線須密且集中，接種的菌量宜多。若用此法測未知標(biāo)本需設(shè)陽性對照(產(chǎn)毒株)及陰性對照(無毒株)，一般每個平板可接種56個標(biāo)本。置37培養(yǎng)24、48、72h觀察結(jié)果。,【結(jié)果】 注意觀察在接種線兩側(cè)距濾紙條約1cm處有無與接種線呈45角的白色沉淀線出現(xiàn)。有沉淀者，白喉?xiàng)U菌毒力試驗(yàn)陽性，該菌株產(chǎn)生白喉外毒素；無沉淀線者，白喉?xiàng)U菌毒力試驗(yàn)陰性，該菌株不產(chǎn)生白喉外毒素。,* 毒力鑒定：動物試驗(yàn)，Elek平板毒力實(shí)驗(yàn),白喉?xiàng)U菌菌苔,沉淀線(陽性),含白喉抗