1、；潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)測(cè)操作規(guī)程1 目的用于規(guī)范潔凈區(qū)溫濕度、壓差、噪音、照度、沉降菌、浮游菌監(jiān)測(cè)的操作。2 適用范圍適用于潔凈區(qū)溫濕度、壓差、噪音、照度、沉降菌、浮游菌觀察的測(cè)定。3 職責(zé)3.1 質(zhì)量保證部 QA 負(fù)責(zé)噪音、照度的檢測(cè)。3.2 生產(chǎn)車間人員負(fù)責(zé)溫濕度、壓差的觀察。3.3 生產(chǎn)部空調(diào)操作人員負(fù)責(zé)溫濕度、壓差的調(diào)控，并及時(shí)反饋信息。3.4 設(shè)備工程部計(jì)量人員負(fù)責(zé)監(jiān)控儀器、儀表的定期校驗(yàn)。3.5 質(zhì)量控制部人員負(fù)責(zé)潔凈區(qū)的沉降菌的配制、計(jì)數(shù)、報(bào)告的完成。3.6 質(zhì)量保證部現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控QA 負(fù)責(zé)潔凈區(qū)的沉降菌的監(jiān)測(cè)。3.7 生產(chǎn)車間配合潔凈區(qū)沉降菌監(jiān)測(cè)的完成。3.8 QC 人員負(fù)責(zé)浮游菌的監(jiān)測(cè)。

2、4 內(nèi)容4.1 潔凈區(qū)潔凈等級(jí)劃分4.1.1 A 級(jí)：指高風(fēng)險(xiǎn)操作區(qū)，如：灌裝、放置膠塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的區(qū)域及無菌裝配或連接操作的區(qū)域。通常用層流操作臺(tái)（罩）來維持該區(qū)的環(huán)境狀態(tài)。4.1.2 B 級(jí)：指無菌配制和灌裝等高風(fēng)險(xiǎn)操作A 級(jí)區(qū)所處的背景區(qū)域。4.1.3 C 級(jí)和 D級(jí)：指生產(chǎn)無菌藥品過程中重要程度較次的潔凈操作區(qū)。4.2 溫濕度4.2.1 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：潔凈區(qū)的溫度和相對(duì)濕度應(yīng)與藥品生產(chǎn)工藝要求相適應(yīng)。無特殊要求時(shí)，潔凈區(qū)溫度為 18 26 ，相對(duì)濕度控制在45% 65% 。有特殊要求車間根據(jù)工藝控制。4.2.2 溫度觀察：檢查溫濕度計(jì)是否完整，視線正對(duì)溫濕度計(jì)水平讀取顯示的

3、數(shù)據(jù)，需要記錄的應(yīng)立即填入表格中。4.2.3濕度觀察：視線正對(duì)濕度表，準(zhǔn)確讀數(shù)。需記錄的應(yīng)立即填入表格中。4.2.4 需要加水的濕度計(jì)，在觀察前應(yīng)檢查在蓄水腔內(nèi)是否有水，無水則需加入適量水，再觀察濕度。4.2.5潔凈區(qū)的溫濕度每天至少記錄兩次，上午一次，下午一次。4.2.6設(shè)備計(jì)量人員每年至少組織校驗(yàn)一次監(jiān)控系統(tǒng)的儀器設(shè)備。4.3 靜壓差4.3.1濕度觀察：標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間、不同等級(jí)潔凈區(qū)之間的壓差應(yīng)不低于10 帕斯卡，相同潔凈度等級(jí)不同功能的操作間之間應(yīng)保持2-3 帕的壓差梯度，以防止污染和交叉污染。4.3.2產(chǎn)塵房間與相鄰房間呈相對(duì)負(fù)壓。4.3.3 潔凈區(qū)的靜壓差以微壓差計(jì)顯

4、示，每日至少記錄兩次，上午一次，下午一次。（包括潔凈區(qū)與室外，不同潔凈級(jí)別間及所有有壓差指示的房間）。.；4.3.4測(cè)試時(shí)所有的空調(diào)系統(tǒng)和層流系統(tǒng)應(yīng)處于連續(xù)的正常運(yùn)行狀態(tài)。4.3.5潔凈室所有的門應(yīng)關(guān)閉，測(cè)試時(shí)不允許有人穿越房間。4.3.6 當(dāng)發(fā)現(xiàn)監(jiān)測(cè)結(jié)果超出標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的范圍時(shí)，應(yīng)立即檢查原因，必要時(shí)對(duì)空調(diào)系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)整。4.4 噪音4.4.1標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：潔凈區(qū)噪音不得高于70 分貝。4.4.2 潔凈區(qū)的噪音檢查每年不得少于一次，在經(jīng)過設(shè)備大修、廠房改造、工藝布局調(diào)整等變更的時(shí)候應(yīng)在變更結(jié)束后重新檢測(cè)噪音。4.4.3 檢測(cè)方法檢測(cè)點(diǎn)布置，當(dāng)面積50m2時(shí)，僅測(cè)房間中心一個(gè)點(diǎn)；當(dāng)房間面積較大時(shí)，每增加

5、50m2 增加一個(gè)點(diǎn)，測(cè)點(diǎn)距在1.2m 。4.5 照度4.5.1 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：潔凈區(qū)主要操作間照度不得少于 300 勒克斯，一般照明的照度均勻度不應(yīng)小于 0.7 。4.5.2 潔凈區(qū)的照度檢查每年不得少于一次，在經(jīng)過設(shè)備大修、廠房改造、工藝布局調(diào)整等變更的時(shí)候應(yīng)在變更結(jié)束后重新檢測(cè)照度。4.5.3 檢測(cè)要求：室內(nèi)照度測(cè)度必須在室溫已趨穩(wěn)定，光源光輸出趨于穩(wěn)定后進(jìn)行（對(duì)熒光燈必須有 100h ）。4.5.4檢測(cè)方法測(cè)點(diǎn)平面離地面 0.85m ，按間距 1-2m 布點(diǎn)，測(cè)點(diǎn)距墻面 1m 。其要求基本與潔凈度的測(cè)定位置要求相同。記錄實(shí)測(cè)照度值并計(jì)算總的平均照度。照度測(cè)量一般僅測(cè)定除局部照明之外的一般照

6、明。4.6 沉降菌4.6.1方法概述：本測(cè)試方法利用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿， 經(jīng)若干時(shí)間， 在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)， 以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來評(píng)定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評(píng)定潔凈區(qū)的潔凈度。4.6.2使用的儀器和設(shè)備4.6.2.1高壓消毒鍋：使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。4.6.2.2恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。4.6.2.3培養(yǎng)皿一般采用 90mm15mm 硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使用前將培養(yǎng)皿置于121 濕熱滅菌 20min 。4.6.2.4 培養(yǎng)基：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45 在無菌操作條件下

7、將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml 。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入30 35 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 小時(shí)，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長(zhǎng)，即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2 8的環(huán)境中存放。4.6.3測(cè)試步驟.；4.6.3.1 采樣方法：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先確定取樣點(diǎn)，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露 0.5h ，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。4.6.3.2培養(yǎng)在 30 35 培養(yǎng)，時(shí)間為 5 天。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定 3 只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。4.6.3.3菌落計(jì)數(shù)：用肉眼直接計(jì)數(shù)，然后用5 10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或 2個(gè)以

8、上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2 個(gè)或 2 個(gè)以上的菌落計(jì)數(shù)。4.6.4注意事項(xiàng)4.6.4.1測(cè)試用具要做滅菌處理，以確保測(cè)試的可靠性、正確性。4.6.4.2采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。4.6.4.3對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。4.6.4.4 由于細(xì)菌種類繁多， 差別甚大， 計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。4.6.4.5采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。4.6.5測(cè)試規(guī)則4.6.5.1測(cè)試狀態(tài)?沉降菌測(cè)試前， 被測(cè)試潔凈區(qū)的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差必須控制在規(guī)定值內(nèi)。? 沉降菌測(cè)

9、試前，被測(cè)試潔凈區(qū)已經(jīng)過消毒。? 測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種， 測(cè)試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。4.6.5.2測(cè)試人員?測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境級(jí)別的工作服。?靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2 個(gè)人。4.6.5.3 測(cè)試時(shí)間?對(duì)單向流， 如 A級(jí)凈化房間內(nèi)及層流工作臺(tái)，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10分鐘后開始。? 對(duì)非單向流，如 B級(jí)、 C 級(jí)、 D 級(jí)以上的凈化房間，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于 30 分鐘開始。4.6.5.4沉降菌采樣點(diǎn)? 采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置：最少采樣點(diǎn)數(shù)目：沉降菌的最少采樣點(diǎn)數(shù)可按表 1 確定。在滿足最少測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，不宜滿足最少培

10、養(yǎng)皿數(shù)，見表 2 。? 采樣點(diǎn)的布置：工作區(qū)測(cè)試點(diǎn)位置離地 0.8 1.5m 左右（略高于工作面）?？稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)， 采樣點(diǎn)的布置應(yīng)力求均勻， 避免采樣點(diǎn)在某局部區(qū)域過于集中， 某局部區(qū)域過于稀疏。4.6.5.5記錄：測(cè)試報(bào)告中應(yīng)記錄房間溫度、相對(duì)濕度、壓差、測(cè)試狀態(tài)及測(cè)試數(shù)據(jù)。.；表 1 最少采樣點(diǎn)數(shù)目潔凈度級(jí)別面積（）A 、 B 級(jí)C 級(jí)D 級(jí)102-322 10-20422 20-40822 40- 1001642 100-20040103注：表中的面積，對(duì)于單向流潔凈室，指的是送風(fēng)面積，對(duì)于非單向流潔凈室，指的是房間面積表2最少培養(yǎng)皿數(shù)潔凈度級(jí)別所需 90mm

11、 培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降0.5h 計(jì)）A 級(jí)14B 、 C 級(jí)2D 級(jí)24.6.6結(jié)果計(jì)算4.6.6.1用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。4.6.6.2 平均菌落數(shù)的計(jì)算見下式：式中： m為平均菌落數(shù)；m1 為 1 號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；m2 為 2 號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；mn 為 n 號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；n 為培養(yǎng)皿總數(shù)。4.6.7結(jié)果評(píng)定：用平均菌落數(shù)判斷潔凈室的空氣中的微生物。4.6.7.1 潔凈區(qū)內(nèi)的平均菌落數(shù)必須符合所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。見表3。4.6.7.2 若某潔凈區(qū)的菌落數(shù)超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)， 則必須對(duì)此區(qū)域先行消毒， 然后重新測(cè)試兩次，測(cè)試結(jié)果必須合格。4.6.7.3重新測(cè)試仍不合格，按“潔凈室環(huán)境監(jiān)控管理

12、規(guī)程”進(jìn)行超標(biāo)調(diào)查。.；表 3級(jí)別A 級(jí)B 級(jí)C 級(jí)D 級(jí)狀態(tài)標(biāo)準(zhǔn)（靜態(tài)） 1個(gè)/ 皿1個(gè) /皿3個(gè)/皿10個(gè) /皿標(biāo)準(zhǔn)（動(dòng)態(tài)） 1個(gè)/ 皿5個(gè) /皿50個(gè) /皿100個(gè) /皿4.7 浮游菌4.7.1 取樣前準(zhǔn)備工作：4.7.1.1 依據(jù)檢測(cè)區(qū)域的取樣點(diǎn)數(shù)，按照培養(yǎng)基配制、滅菌標(biāo)準(zhǔn)操作程序制備適量的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。4.7.1.2在超凈工作臺(tái)內(nèi)， 以無菌操作法將配制好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基以每皿約15ml 的裝量分裝，待培養(yǎng)基凝固后移出潔凈區(qū)。4.7.1.3將制備的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿倒置于隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內(nèi)于30 35 培養(yǎng) 48小時(shí)。取出逐個(gè)檢查，確認(rèn)無菌落數(shù)后即可使用。4.7.1.4采樣：將上述制備

13、好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿交與QA 人員取樣。4.7.2 儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基：4.7.2.1所用的儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基：? 浮游菌采樣器? 培養(yǎng)皿（ 90mm 15mm）? 培養(yǎng)基（營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基）? 恒溫培養(yǎng)箱4.7.2.2儀器、設(shè)備、培養(yǎng)基的要求：? 浮游菌采樣器：? 浮游菌采樣器必須要有流量計(jì)和定時(shí)器。? 應(yīng)嚴(yán)格按儀器說明書的要求進(jìn)行操作。? 采樣器必須按儀器的檢定周期， 定期對(duì)儀器作檢定， 以保證測(cè)試數(shù)據(jù)的可靠性， 檢驗(yàn)項(xiàng)目有：定時(shí)器，轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速，流量計(jì)。? 每次測(cè)試前應(yīng)先接通電源，啟動(dòng)真空抽氣泵，然后調(diào)節(jié)流量計(jì)和定時(shí)器。?空氣采樣量根據(jù)需要選定，已知采樣器的流量（L/min ） ,設(shè)定采樣時(shí)間（m

14、in ）兩者相乘即得采樣量（L）。?采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的材料制造，采樣管嚴(yán)禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑， 采.；樣管的長(zhǎng)度應(yīng)根據(jù)測(cè)定點(diǎn)的高度定，盡量減少彎曲。4.7.3測(cè)試方法：4.7.3.1測(cè)試用儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。?采樣器進(jìn)入被測(cè)房間前先用消毒劑滅菌。?用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。?采樣前， 先用消毒劑消毒采樣器的頂盤、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。? 采樣口及采樣管使用前必須高溫滅菌， 如用消毒劑對(duì)采樣管的外壁、 內(nèi)壁進(jìn)行消毒，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。? 采樣者應(yīng)穿戴與被測(cè)潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服， 在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前， 雙手用

15、消毒劑消毒。4.7.3.2采樣程序：? 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿， 開動(dòng)真空泵抽氣， 使儀器的殘余消毒劑蒸發(fā)， 時(shí)間不少于 5min ，并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速。? 關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣品縫隙高度。? 置采樣器于采樣點(diǎn)后，開啟采樣器、轉(zhuǎn)動(dòng)定時(shí)器，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時(shí)間。4.7.4 測(cè)試規(guī)則：4.7.4.1測(cè)試狀態(tài)：? 浮游菌測(cè)試前微生物限度檢查室已經(jīng)消毒過。? 測(cè)試狀態(tài)為靜態(tài)測(cè)試，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。4.7.4.2測(cè)試人員：? 測(cè)試人員必須穿戴符和被測(cè)環(huán)境級(jí)別的工作服。? 靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)人員不得多于 2 人。4.7.4.3測(cè)試時(shí)間：?對(duì)單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常

16、運(yùn)行不少于10min 后開始。?對(duì)非單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min 后開始。4.7.4.4最少采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置，最小采樣量，見下表:潔凈度級(jí)別面積（ m2 ）ABC驗(yàn)證監(jiān)測(cè)驗(yàn)證監(jiān)測(cè)驗(yàn)證監(jiān)測(cè)102 31212- 10 2042212- 20 4083212- 40 100164412-.； 100 20040-10-3- 20040080-20-6-400160-40-13-? 工作區(qū)測(cè)點(diǎn)位置離地0.8m 1.5m 左右， 送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開送風(fēng)面30cm 左右； 可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。? 每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次? 對(duì)于單向流或送風(fēng)口， 采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向； 對(duì)于非單向流， 采樣管口向上。?布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)離開塵粒較集中的回風(fēng)口1m 以上。? 采樣時(shí)，測(cè)試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)。4.7.5培養(yǎng)：取樣結(jié)束后將平皿復(fù)倒置隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內(nèi)于30 35 培養(yǎng) 48 小時(shí)。并以未采樣的