1、大腸桿菌的分離鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)及生化實(shí)驗(yàn),目的要求,熟悉鑒別培養(yǎng)基的原理 了解大腸桿菌的主要生理生化特性,一、鑒別培養(yǎng),培養(yǎng)基類別,菌種,分離鑒定-麥康凱培養(yǎng)基,原理：在培養(yǎng)基中含有膽鹽，可抑制大部分革蘭氏陽性菌的生長，培養(yǎng)基含乳糖，大腸桿菌能分離乳糖，使pH下降（中性指示劑5.5-7.5，紅-黃）形成紅色菌落，而沙門氏菌和志賀氏菌，不能分解乳糖，菌落小且為無色,術(shù)式,兩試管斜面移植時(shí)，左手斜持菌種管和被接種管，管口相齊，管底放在拇指和食指間，松動兩管棉塞，將管口進(jìn)行火焰滅菌，使其靠近火焰，將接種環(huán)深入管內(nèi)，先在無菌生長的培養(yǎng)基上接觸使之冷卻，再挑取少量的細(xì)菌后，拉出接種環(huán)，立即伸入另一管斜面培

2、養(yǎng)基上，勿碰到斜面和管壁，直達(dá)斜面底部，從底部開始劃曲線，向上到斜面頂端，管口火焰滅菌，塞好棉塞，接種完畢。接種環(huán)火焰滅菌后，放下接種棒最后在斜面管壁上注明日期、接種者。置370C，溫箱培養(yǎng),結(jié)果判定,鮮桃紅色或微紅色，菌落中心呈深桃紅色 圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑，濕潤,二、藥敏試驗(yàn),方法：取一菌種，用滅菌的接種環(huán)致密劃線于瓊脂表面（可重復(fù)來回劃線），用無菌鑷子，將各種抗菌藥物圓紙片，分別貼于培養(yǎng)基表面。各片距離相等，370C，24h后，觀察結(jié)果。,藥敏結(jié)果判定,三、生化實(shí)驗(yàn) 1糖發(fā)酵試驗(yàn),原理：各種細(xì)菌具有不同的酶，有的細(xì)菌能分解某些糖類而產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的細(xì)菌雖能分解某種糖類，但只產(chǎn)酸不

3、產(chǎn)氣，有的細(xì)菌則不能分解。從而鑒別細(xì)菌。 方法：將需要鑒別的細(xì)菌純培養(yǎng)物，分別接種在各種含指示劑的糖發(fā)酵管內(nèi)，將發(fā)酵管倒置與370C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h 結(jié)果：培養(yǎng)液不變色-無變化（） 培養(yǎng)液變?yōu)辄S色-產(chǎn) 酸（+） 培養(yǎng)液變黃并有氣泡-產(chǎn)酸產(chǎn)氣（+）,2 硫化氫試驗(yàn),原理：某些細(xì)菌能分離蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸，生成硫化氫，遇培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽，形成黑色的沉淀物。 方法：將需要鑒別的細(xì)菌純培養(yǎng)物，分別接種在硫化氫培養(yǎng)基中，370C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h 結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽性，不產(chǎn)生黑色為陰性。大腸桿菌為陰性，沙門氏菌為陽性,3 硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn),原理：有些細(xì)菌能將培養(yǎng)基中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，在酸性條件下，亞硝酸鹽與對位氨基苯磺酸起作用后，在與-萘胺反應(yīng)，生成紅色偶氮化合物。 方法：將被檢細(xì)菌接種于硝酸鈉蛋白胨培養(yǎng)基內(nèi)，370C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h。 結(jié)果：再加試