016 前 言本標(biāo)準(zhǔn)代替003食品中?；撬岬臏y(cè)定010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中牛磺酸的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)與003相比,主要變化如下:標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中?；撬岬臏y(cè)定”;增加了加了丹磺酰氯柱前衍生高效液相色譜法為第二法;刪除了薄層色譜法。0161 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中牛磺酸的測(cè)定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中?；撬釡y(cè)定的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒配方食品、乳粉、豆粉、豆?jié){、含乳飲料、特殊用途飲料、風(fēng)味飲料、固體飲料、果凍中?；撬岬臏y(cè)定。第一法 鄰苯二甲醛(后衍生高效液相色譜法2 原理試樣用水溶解,用偏磷酸沉淀蛋白,經(jīng)超聲波震蕩提取、離心、微孔膜過濾后,通過鈉離子色譜柱分離,與鄰苯二甲醛(生反應(yīng),用熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),外標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級(jí)水。磷酸。檬酸三鈉。酚。酸。醇:色譜純。酸。氧化鉀。苯二甲醛(0 聚氧乙烯月桂酸醚(鐵氰化鉀。酸鋅。粉酶:活力磷酸溶液(30g/L),用水溶解并定容至10000162 ),加950入1),用硝酸( 柱后熒光衍生溶液(鄰苯二甲醛溶液)酸鉀溶液():),),用水溶解并定容至1000苯二甲醛衍生溶液:),用10)溶解后,)0),硼酸鉀溶液(容至1000用前現(xiàn)配。淀劑:1),用水溶解并定容至100沉淀劑在室溫下3個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。淀劑:2),用水溶解并定容至100沉淀劑在室溫下3個(gè)月內(nèi)保持穩(wěn)定。準(zhǔn)品純度99%,07磺酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1mg/用水溶解并定容至100 牛磺酸標(biāo)準(zhǔn)工作液將?；撬針?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(水稀釋制備一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為:0g/用前現(xiàn)配。4 效液相色譜儀:帶有熒光檢測(cè)器。后反應(yīng)器。光衍生溶劑輸液泵。聲波震蕩器。4.5 心機(jī):不低于5000r/孔濾膜:平:0163 5 樣制備準(zhǔn)確稱取固體試樣1g5g(錐形瓶中,加入40左右溫水20勻使試樣溶解,放入超聲波振蕩器中超聲提取10加50),充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取105出冷卻至室溫后,移入100水定容至刻度并搖勻;樣液在5000r/濾,接取中間濾液以備進(jìn)樣。谷類制品,稱取試樣5g(錐形瓶中,加入40左右溫水40入淀粉酶(酶活力勻后向錐形瓶中充入氮?dú)?蓋上瓶塞,置5060培養(yǎng)箱中30出冷卻至室溫,再加50),充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取105出冷卻至室溫后,移入100水定容至刻度并搖勻;樣液在5000r/濾,接取中間濾液以備進(jìn)樣。準(zhǔn)確稱取液體試樣(乳飲料除外)5g30g(錐形瓶中,加50),充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取105出冷卻至室溫后,移入100水定容至刻度并搖勻;樣液在5000r/濾,接取中間濾液以備進(jìn)樣。牛磺酸含量高的飲料類先用水稀釋到適當(dāng)濃度,最后一步稀釋時(shí),加入50)充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取105出冷卻至室溫后,移入100水定容至刻度并搖勻;樣液在5000r/濾,接取中間濾液以備進(jìn)樣。果凍類試樣,稱取試樣5g(錐形瓶中,加入20060水浴20卻后,加入50)充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取105出冷卻至室溫后,移入100水定容至刻度并搖勻;樣液在5000r/濾,接取中間濾液以備進(jìn)樣。乳飲料試樣,稱取5g30錐形瓶中,加入40左右溫水30分混勻,置超聲波振蕩器上超聲提取10卻到室溫。渦旋混合,渦旋混合,轉(zhuǎn)入100分混勻,樣液于5000r/濾,接取中間濾液以備進(jìn)樣。譜柱:鈉離子氨基酸分析專用柱(25相當(dāng)者。動(dòng)相:檸檬酸三鈉溶液(動(dòng)相流速: 熒光衍生溶劑流速: 柱溫:55。測(cè)波長(zhǎng):激發(fā)波長(zhǎng):338射波長(zhǎng):425 進(jìn)樣量:20L。準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入高效液相色譜儀中,測(cè)定相應(yīng)的色譜峰高或峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo),以響應(yīng)值(峰面積或峰高)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。0164 樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中,得到色譜峰高或峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中?；撬岬臐舛?平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。6 分析結(jié)果的表述試樣中牛磺酸含量按式(1)計(jì)算:A=c000100(1)式中:A試樣中?；撬岬暮?單位為毫克每百克(00g);c試樣測(cè)定液中牛磺酸的濃度,單位為微克每毫升(g/V試樣定容體積,單位為毫升(m試樣質(zhì)量,單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。8 法檢出限為:00g;00g。第二法 丹磺酰氯柱前衍生法9 原理試樣用水溶解,用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白質(zhì)。取上清液用丹磺酰氯衍生反應(yīng),衍生物經(jīng)紫外檢測(cè)器(254熒光檢測(cè)器(激發(fā)波長(zhǎng):330射波長(zhǎng):530測(cè),外標(biāo)法定量。10 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級(jí)水。腈:色譜純。乙酸。酸。水碳酸鈉。酸鈉。0165 酸甲胺(甲胺鹽酸鹽)。磺酰氯(5色譜純。注:丹磺酰氯對(duì)光和濕敏感不穩(wěn)定,在干燥器中避光保存。酸溶液(1):吸取9用水稀釋并定容到100酸鈉緩沖液(80):加401鹽酸溶液(水定容至50溶液在室溫下3個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定?；酋Ｂ热芤?用乙腈(解并定容至100使用前配制。酸甲胺溶液(20):用水溶解并定容至100溶液保存在4下3個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。酸鈉緩沖液(10,加800冰乙酸(水定容至1000準(zhǔn)品純度99%,07磺酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1mg/用水溶解并定容至100磺酸標(biāo)準(zhǔn)工作液(紫外檢測(cè)器用)將牛磺酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(水稀釋制備一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為:0g/用前現(xiàn)配?；撬針?biāo)準(zhǔn)工作液(熒光檢測(cè)器用)將?；撬針?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(水稀釋制備一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為:0g/用前現(xiàn)配。11 效液相色譜儀:帶有熒光檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。旋混合器。聲波震蕩器。11.4 心機(jī):不低于5000r/孔濾膜:平:0166 12 液提取準(zhǔn)確稱取固體試樣1g5g(錐形瓶中,加入40左右溫水40勻使試樣溶解,放入超聲波振蕩器中超聲提取10卻到室溫,渦旋混合,渦旋混合,轉(zhuǎn)入100水定容至刻度,充分混勻。樣液于5000r/上清液備用。上清液在4暗處保存放置24類制品,稱取試樣5g(錐形瓶中,加入40左右溫水40入淀粉酶(酶活力勻后向三角瓶中充入氮?dú)?蓋上瓶塞,置5060培養(yǎng)箱中30出冷卻至室溫。放入超聲波振蕩器中超聲提取10卻到室溫,渦旋混合,渦旋混合,轉(zhuǎn)入100水定容至刻度,充分混勻。樣液于5000r/上清液備用。上清液在4暗處保存放置24確稱取液體試樣(乳飲料試樣除外)5g30g(錐形瓶中,加20分搖勻。渦旋混合,渦旋混合,轉(zhuǎn)入100水定容至刻度,充分混勻。樣液于5000r/上清液備用。上清液在4暗處保存放置24磺酸含量高的飲料類先用水稀釋到適當(dāng)濃度,最后一步稀釋時(shí),渦旋混合,渦旋混合,之后轉(zhuǎn)入100水定容至刻度,充分混勻,樣液于5000r/上清液備用。上清液在4暗處保存放置24凍類試樣,稱取試樣5g(錐形瓶中,加入20060水浴20卻后,加入50)充分搖勻,放入超聲波振蕩器中超聲提取105出冷卻至室溫后,移入100水定容至刻度并搖勻;樣液在5000r/上清液備用。上清液在4暗處保存放置24飲料試樣,稱取5g40錐形瓶中,加入40溫水20分混勻,置超聲波振蕩器上超聲提取10卻到室溫。渦旋混合,渦旋混合,轉(zhuǎn)入100水定容至刻度,充分混勻,樣液于5000r/上清液備用。上清液在4暗處保存放置24充分混合,室溫避光衍生反應(yīng)2h(1旋混合,以終止反應(yīng),避光靜置至沉淀完全。濾,取濾液備用。衍生物在4以下可避光保存48h。與試液同步進(jìn)行衍生。譜柱:50m)或相當(dāng)者。動(dòng)相:乙酸鈉緩沖液(乙腈(70+30(體積比)。動(dòng)相流速:0167 溫:室溫。測(cè)波長(zhǎng):熒光檢測(cè)器:激發(fā)波長(zhǎng):330射波長(zhǎng):530外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器:254樣量:20L。準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的衍生液分別注入高效液相色譜儀中,測(cè)定相應(yīng)的色譜峰高或峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo),以響應(yīng)值(峰面積或峰高)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中,得到色譜峰高或峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中?；撬岬臐舛?平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。13 分析結(jié)果的表述試樣中牛磺酸含量按式(2)計(jì)算:A=c000100(2)式中:A試樣中?；撬岬暮?單位為毫克每百克(00g);c試樣測(cè)定液中?；撬岬臐舛?單位為微克每毫升(g/V試樣定容體積,單位為毫升(m試樣質(zhì)量,單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。14 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。15 00g;定量限為:00g。00g;定量限為:500g。0168 附 錄 苯二甲醛(后衍生法液相色譜圖鄰