臨床血液及檢驗(yàn),1,.,細(xì)胞化學(xué)染色,2,.,一、教學(xué)目的：根據(jù)血細(xì)胞化學(xué)染色的結(jié)果診斷血液疾病二、教學(xué)要求1.掌握:過氧化物酶染色、鐵染色的原理、操作及臨床意義2.熟悉:非特異性酯酶染色、堿性磷酸酶染色、過碘酸-雪夫反應(yīng)的原理、意義及臨床應(yīng)用3.了解:酸性磷酸酶染色的原理及意義,3,.,三、教學(xué)內(nèi)容1.常用血細(xì)胞化學(xué)染色（鐵染色、過氧化物酶染色、堿性磷酸酶染色、醋酸萘酚酯染色、過碘酸-雪夫反應(yīng)）2.結(jié)合血細(xì)胞化學(xué)染色鑒別急性白血病類型3.結(jié)合血細(xì)胞化學(xué)染色鑒別貧血類型,4,.,細(xì)胞化學(xué)染色，是一種以形態(tài)為基礎(chǔ)，結(jié)合運(yùn)用化學(xué)或生物化學(xué)技術(shù)對血細(xì)胞內(nèi)各種化學(xué)成分作定位、定性及半定量分析的方法。用于研究血細(xì)胞生理、病理和化學(xué)結(jié)構(gòu)；臨床上為某些血液病的診斷、鑒別診斷、療效觀察、預(yù)后監(jiān)測和發(fā)病機(jī)制的探討，提供重要依據(jù)。,5,.,血細(xì)胞化學(xué)染色的基本要求是在原位顯示細(xì)胞成分和結(jié)構(gòu)，反應(yīng)產(chǎn)物應(yīng)是有色沉淀物，具有一定的穩(wěn)定性。血細(xì)胞化學(xué)染色可顯示糖原、脂類、酶、蛋白質(zhì)等。,6,.,（一）固定固定有物理法與化學(xué)法，物理法為干燥和火焰固定，化學(xué)法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。,血細(xì)胞化學(xué)染色流程,7,.,（二）顯示1、偶氮偶聯(lián)法：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，產(chǎn)生分解產(chǎn)物，再與重氮鹽結(jié)合引起偶氮偶聯(lián)，使其形成不溶性的偶氮色素，以此證明酶的存在。2、聯(lián)苯胺法：粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中的過氧化物酶作用于過氧化氫，釋放新生態(tài)氧，使無色的聯(lián)苯胺形成藍(lán)色沉淀。,8,.,3、普魯士藍(lán)法：細(xì)胞內(nèi)、外鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用，形成藍(lán)色亞鐵氰化鐵沉淀。4、雪夫反應(yīng)：過碘酸氧化細(xì)胞內(nèi)糖類中乙二醇基形成乙醛基，醛基與雪夫試劑作用，使無色品紅形成紅色沉淀。5、金屬沉著法:其他尚有物理學(xué)方法，如脂溶性染料染色（顯示脂質(zhì)）、熒光顯示、放射自顯影以及體外活體染色亦常用于臨床血液細(xì)胞學(xué)診斷。,9,.,（三）細(xì)胞化學(xué)定量粗略估量，以染色反應(yīng)的強(qiáng)弱，受色的深淺，人為地區(qū)別為陰性和各種程度的陽性。百分法，只能反映細(xì)胞陽性率，不能反映受色強(qiáng)弱。積分法，是常用的半定量法，將等級估量與百分率相結(jié)合它既反映了細(xì)胞陽性率的高低，又反映了細(xì)胞受色的強(qiáng)弱。,10,.,下面介紹幾種常用的細(xì)胞化學(xué)染色方法,這些方法學(xué)在白血病的鑒別診斷上具有重要意義。,11,.,一、過氧化物酶染色（POX）,（一）四甲基聯(lián)苯胺法【原理】粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的胞漿內(nèi)的髓過氧化物酶（POXorMPO）分解過氧化氫，釋放新生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺氧化成藍(lán)色聯(lián)苯胺，后者進(jìn)一步變成棕色化合物沉著于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。,12,.,【結(jié)果】細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)黑色顆粒者為陽性。（）無顆粒沉著；（）顆粒細(xì)小，分布稀疏；（+）顆粒較粗，局灶分布；（+）顆粒粗大，分布較密，占胞質(zhì)1/22/3；（+）顆粒粗大，呈團(tuán)塊分布；（+）全部胞質(zhì)均部滿顆粒，可覆蓋胞核。,13,.,【臨床意義】（1）粒系：POX主要分布在粒細(xì)胞和單核細(xì)胞內(nèi)，隨著粒細(xì)胞成熟的程度而逐漸增強(qiáng)，中性分葉核粒細(xì)胞為強(qiáng)陽性。嗜酸性粒細(xì)胞陽性程度最強(qiáng)，其陽性顆粒比中性粒細(xì)胞粗大，有折光。堿性粒細(xì)胞為陰性。,14,.,（2）單核細(xì)胞：原始單核細(xì)胞為陰性反應(yīng)，幼稚單核細(xì)胞和成熟單核細(xì)胞呈弱陽性反應(yīng)，顆粒細(xì)小，彌散分布。,15,.,（3）其他細(xì)胞淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、幼紅細(xì)胞、組織細(xì)胞、巨核細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。（4）血小板過氧化物酶主要定位于幼稚型巨核細(xì)胞的核膜上，可作為原巨核細(xì)胞的一種標(biāo)志物，有助于FABM7的識別。,16,.,（5）過氧化物酶染色主要用于鑒別急性白血病類型，急性髓細(xì)胞白血病多呈陽性反應(yīng)，以M3和M2型反應(yīng)最強(qiáng)，MI和M5型反應(yīng)較弱，故有助于區(qū)別M3和M5型。急性淋巴細(xì)胞白血病呈POX陰性反應(yīng)，故為急性髓細(xì)胞和淋巴細(xì)胞白血病鑒別的重要指標(biāo)。,17,.,AML-M1,18,.,19,.,M1-POX(+),20,.,21,.,二、酯酶染色,【原理】酯酶是分解各種酯類的水解酶，根據(jù)機(jī)制的不同,分為非特異性酯酶和特異性酯酶。單核巨噬細(xì)胞類為非特異性酯酶反應(yīng)而染色，中性粒細(xì)胞類則為特異性酯酶反應(yīng)而染色，因此在判別單核細(xì)胞類或中性粒細(xì)胞類時(shí)非常有用，特別是二重染色法非常重耍。,22,.,酯酶染色的方法較多，常根據(jù)其作用液的pH和底物的不同將常用的酯酶染色法分為兩類：特異性酯酶染色法，如氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色法；非特異性酯酶（NSE）染色法常用-乙酸萘酚酯酶和-丁酸萘酚酯酶染色法。,23,.,（一）特異性酯酶染色法,【原理】氯乙酸ASD萘酚被細(xì)胞內(nèi)特異性酯酶水解，產(chǎn)生ASD萘酚，再與穩(wěn)定的重氮鹽偶聯(lián)，生成不溶性紅色沉淀，定位于胞漿中。,24,.,【結(jié)果】陽性反應(yīng)為紅寶石色顆粒，定位于胞漿中。,25,.,【臨床意義】特異性酯酶又稱粒細(xì)胞酯酶主要分布在粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞內(nèi)。早幼粒細(xì)胞和中幼粒細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，分葉核粒細(xì)胞酶活性減弱，原粒細(xì)胞為陰性或陽性反應(yīng)。嗜酸性粒細(xì)胞呈陰性，嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和肥大細(xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng)。紅系細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板、漿細(xì)胞、淋巴細(xì)胞呈陰性。,26,.,本染色法主要用于鑒別急性白血病類型。急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，原粒細(xì)胞和幼稚粒細(xì)胞均呈一定程度陽性。成熟粒細(xì)胞酶活性下降；急性單核細(xì)胞白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)，白血病細(xì)胞呈陰性；急性粒一單核細(xì)胞白血病時(shí)，部分白血病細(xì)胞(原粒和早幼粒細(xì)胞)呈陽性，有些白血病細(xì)胞(原單核和幼單核細(xì)胞)呈陰性。,27,.,【質(zhì)量保證】染色溫度以3839為宜，此時(shí)酶反應(yīng)強(qiáng)而無明顯擴(kuò)散。此酶不受氟化鈉抑制，并且萘酚較低溫時(shí)易溶解。,28,.,（二）非特異性酯酶染色,血細(xì)胞的非特異性酯酶及其同工酶種類很多，凡能作用于短鏈脂肪酸，水解醇和酚的羧酸酯的酶就稱為非特異性酯酶?，F(xiàn)僅介紹a一乙酸萘酚酯酶(-NAE)染色法。,29,.,【原理】,a一乙酸萘酚酯酶將乙酸萘酚水解，產(chǎn)生萘酚，再與重氮鹽（如堅(jiān)牢藍(lán)B）偶聯(lián)，生成不溶性的有色(灰黑或棕黑色)沉淀。,30,.,用氟化鈉抑制試驗(yàn)作對照，在40ml作用液中加人氟化鈉15mg，其余方法同上。兩種方法染色后用油鏡計(jì)數(shù)100或200個被檢細(xì)胞，分別計(jì)算出抑制前和抑制后的陽性率和積分。按公式計(jì)算出抑制率：,31,.,【結(jié)果】,細(xì)胞漿內(nèi)有灰黑色或棕黑色彌散性顆粒狀沉淀為陽性，胞漿內(nèi)無沉淀為陰性。,32,.,積分標(biāo)準(zhǔn),“”胞漿無灰黑色或棕色顆粒；“+”淺灰色，極少黑色沉淀；“2+”漿灰黑色片狀，占胞漿12；“3+”漿充滿灰黑色沉淀或彌散灰黑色；“4+”漿內(nèi)較深的灰黑色或充滿彌散黑顆粒?！耙弧庇洖镺分，“+”記為1分，“2+”記為2分，“3+”記3分，“4+”記為4分。,33,.,【臨床意義】,非特異性酯酶又稱單核細(xì)胞酯酶，主要存在于單核細(xì)胞和組織細(xì)胞內(nèi)。正常單核系細(xì)胞各階段均呈陽性，且該反應(yīng)可被氟化鈉抑制。該酶在粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞內(nèi)含量較少，通常呈弱陽性反應(yīng)(不被氟化鈉抑制)或陰性。巨核細(xì)胞和血小板為陽性反應(yīng)。,34,.,-乙酸萘酚酯酶染色對三種急性白血病類型的鑒別有重要意義，急性單核細(xì)胞白血病(M5型)、急性粒-單核細(xì)胞白血病(M4型)的單核系細(xì)胞與少數(shù)急性粒細(xì)胞白血病(主要是M3型)的早幼粒細(xì)胞，呈陽性反應(yīng)但前者可被氟化鈉抑制(抑制率在50以上)，而急性粒細(xì)胞白血病的早幼粒細(xì)胞不被氟化鈉抑制或僅部分輕度抑制。急性淋巴細(xì)胞白血病一般為陰性。,35,.,【質(zhì)量保證】,1.標(biāo)本必須新鮮，應(yīng)于取材后2天內(nèi)染色。2.重氮鹽可選擇，以堅(jiān)牢藍(lán)B、堅(jiān)牢藍(lán)RR及堅(jiān)牢黑B重氮鹽為好。3.染色時(shí)間和溫度應(yīng)恒定。,36,.,三、過碘酸一雪夫（PAS)染色,【原理】胞漿內(nèi)存在糖原或多糖類物質(zhì)（如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）經(jīng)過碘酸（periodicacid）氧化，轉(zhuǎn)變?yōu)槎┗–HO-CHO），與雪夫(Schiff)試劑中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色染料而沉積于胞漿中。該反應(yīng)稱為過碘酸一雪夫(PAS)陽性反應(yīng)。,37,.,【結(jié)果】（1）粒細(xì)胞系：原粒細(xì)胞多呈陰性反應(yīng)，也可弱陽性。自早幼粒細(xì)胞以后隨著細(xì)胞的成熟程度，陽性反應(yīng)逐漸增強(qiáng)。嗜酸粒細(xì)胞顆粒本身不著色，但顆粒間的胞質(zhì)呈彌漫性陽性反應(yīng)；嗜堿粒細(xì)胞為陽性反應(yīng)，顆粒紫紅色，大小不一。,38,.,中性粒細(xì)胞糖原含量參考標(biāo)準(zhǔn)（-）胞質(zhì)無顆粒（+）胞質(zhì)呈淡紅色，無顆粒（+）胞質(zhì)呈紅色，有少量顆粒（+）胞質(zhì)呈暗紅色，顆粒較密（+）胞質(zhì)呈紫紅色，顆粒極密,39,.,過碘酸-Schiff反應(yīng)(PAS),40,.,（2）淋巴細(xì)胞系：大多數(shù)淋巴細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，少數(shù)為（+）的陽性反應(yīng)。淋巴細(xì)胞糖原含量程度參考標(biāo)準(zhǔn)（-）胞質(zhì)內(nèi)無顆粒（+）胞質(zhì)內(nèi)有顆粒（+）有較粗紅色顆粒（+）有粗大紅色顆粒（+）顆粒粗大并有紅色塊狀,41,.,（3）紅細(xì)胞系：幼紅細(xì)胞和紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)紅細(xì)胞系列糖原含量程度參考標(biāo)準(zhǔn)（-）胞質(zhì)無顆粒（+）有少數(shù)紅色顆粒（+）有較粗紅色顆?；驈浡t色（+）有粗大紅色顆粒或深紅色（+）有粗大紅色塊狀或紫紅色,42,.,（4）巨核細(xì)胞：巨核細(xì)胞和血小板染色反應(yīng)均為陽性巨核細(xì)胞糖原含量程度參考標(biāo)準(zhǔn)（-）胞質(zhì)無顆粒（+）少量糖原包涵體（+）中等量糖原包涵體，定位于核膜出或分散胞質(zhì)中，占胞質(zhì)1/3（+）大量糖原包涵體分散于胞質(zhì)的1/2（+）糖原包涵體充滿整個胞質(zhì),43,.,PAS巨核細(xì)胞,巨核細(xì)胞包涵體,44,.,（5）單核細(xì)胞呈陰性或陽性，顆粒細(xì)小，往往位于胞質(zhì)邊緣；漿細(xì)胞大多呈陰性，少數(shù)為紅色顆粒陽性；組織細(xì)胞為陰性反應(yīng)；巨噬細(xì)胞可呈陽性，為紅色顆粒反應(yīng)。,45,.,【臨床意義】（1）M6與巨幼貧的鑒別M6的幼紅細(xì)胞PAS可呈強(qiáng)陽性，積分明顯增高，巨貧、再障、溶貧時(shí)PAS反應(yīng)為陰性。（2）急性白血病的類型鑒別ALL，PAS呈大塊狀陽性，也可是陰性，AML為陰性，急性單核細(xì)胞白血病時(shí)原單核細(xì)胞及幼單核細(xì)胞PAS陽性，積分增高，陽性顆粒小而多，呈彌散分布。,46,.,ALL-L1,47,.,L1PAS(+),48,.,AML-M5,49,.,M5PAS(+),50,.,AML-M6,51,.,AML-M6PAS(+),52,.,AML-M7,53,.,M7PAS(+),54,.,（3）巨核細(xì)胞和Sternberg細(xì)胞鑒別巨核細(xì)胞PAS強(qiáng)陽性，Sternberg細(xì)胞為陰性或弱陽性。（4）戈謝氏細(xì)胞強(qiáng)陽性，尼曼-皮克細(xì)胞陰性或弱陽性。（5）淋巴肉瘤、霍奇金病等，淋巴細(xì)胞的糖原積分增高；一般的病毒感染，糖原積分在正常范圍內(nèi)。,55,.,四、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色,偶氮偶聯(lián)法（Kaplow法）【原理】中性粒細(xì)胞胞漿中的堿性磷酸酶在pH9.29.8緩沖液中，能水解磷酸萘酚鈉，并釋放出磷酸與萘酚。再以重氮鹽與萘酚偶聯(lián)成不溶性有色偶氮染料沉淀于胞漿中。,56,.,【結(jié)果】堅(jiān)牢藍(lán)RR陽性為紫黑色顆粒，堅(jiān)牢紫醬GBC陽性為棕紅色沉淀?！耙弧标幮苑磻?yīng)，胞漿中無陽性染色顆粒。“”胞漿中含有少量顆?；虺蕪浬\紅色（或彌散紫色）?！?”胞漿中含有中等量顆粒或彌散受色?！?”胞漿中有豐富的顆?；驈浬⑸钌?，胞核清晰。“4”有極豐富的粗大顆粒，充滿胞漿，或彌散深色，胞核不清晰。,57,.,中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(NAP),偶氮偶聯(lián)法,58,.,NAP積分法計(jì)數(shù)100個成熟中性粒細(xì)胞，按其反應(yīng)強(qiáng)度分級，各級百分率與其級數(shù)乘積的總和，即為積分。例如：NAP反應(yīng)結(jié)果（%）（-）（+）（+）（+）（+）204020155積分=（020）+（220）+（315）+（45）=145參考值：正常人血細(xì)胞堿性磷酸酶除成熟中性粒細(xì)胞（桿狀核及分葉核）可見陽性外，其他血細(xì)胞均為陰性。中性粒細(xì)胞NAP活性積分值一般為1050分，但有時(shí)可高達(dá)162分。,59,.,【臨床意義】（1）生理變化：新生兒NAP增高，成人較兒童減低，老人更低；激烈運(yùn)動增高；月經(jīng)期經(jīng)前增高，行經(jīng)后降低，經(jīng)后期恢復(fù)正常；妊娠期2-3月輕度增高，以后逐漸增高，分娩時(shí)達(dá)到高峰，產(chǎn)后恢復(fù)正常。,60,.,（2）、病理變化增高：嚴(yán)重化膿性感染、類白血病反應(yīng)、AA、CML加速期、ALL、CLL、惡性淋巴瘤、癌轉(zhuǎn)移、MM、真紅、骨髓纖維化等。減低：PNH、CML、惡性組織細(xì)胞病、MDS。,61,.,（3）疾病鑒別診斷慢粒與類白的鑒別：CML減低，類白增高。急性白血病的鑒別：AML減低，ALL增高。PNH與AA鑒別：PNH減低，AA增高。病原微生物的鑒別：病毒感染減低，細(xì)菌感染增高。,62,.,63,.,NAP(+),CML-NAP(-),64,.,五、骨髓鐵染色,【原理】正常人骨髓中的貯存鐵主要存在于骨髓小粒和幼紅細(xì)胞中，骨髓中的鐵在酸性環(huán)境下與亞鐵氰化鉀作用，形成普魯士藍(lán)反應(yīng)，形成藍(lán)色的亞鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位，從而反映骨髓中鐵的儲存量?；瘜W(xué)反應(yīng)過程為：4Fe3+3K4Fe（CN）6Fe4Fe（CN）6312K+（含鐵物質(zhì)）（亞鐵氰化鉀）（亞鐵氰化鐵）,65,.,【結(jié)果】（1）細(xì)胞外鐵的觀察：細(xì)胞外鐵呈藍(lán)色的顆粒狀、小株?duì)罨驁F(tuán)塊狀。以油鏡觀察定級標(biāo)準(zhǔn)（-）無鐵?？梢?。（+）少數(shù)鐵?；蜩F小珠。（+）較多鐵粒和鐵小珠。（+）很多鐵粒、鐵小珠和少數(shù)小塊。（+）極多鐵粒、鐵小珠并有很多小塊，密集成堆。正常范圍：+，“+”占2/3，“+”占1/3。,66,.,細(xì)胞外鐵,67,.,（2）細(xì)胞內(nèi)鐵觀察：細(xì)胞內(nèi)鐵指有核紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)色顆粒，以油鏡計(jì)100個中、晚幼紅細(xì)胞，記錄胞質(zhì)中含有藍(lán)色小顆粒（即鐵粒紅細(xì)胞）的比值。并根據(jù)細(xì)胞鐵顆粒的數(shù)目、大小、染色深淺和顆粒分布情況，將鐵粒幼紅細(xì)胞分為如下四型：,68,.,型：僅含1-2個鐵顆粒。型：含3-4個鐵顆粒。型：含6-9個以上鐵顆粒。型：10個鐵顆粒。正常范圍：30%90%，平均60%，多見型，少見型，無、型。,69,.,細(xì)胞內(nèi)鐵,70,.,（3）環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞：指含鐵顆粒6個，其中2/3以上鐵顆粒圍繞核周排列成完整環(huán)形或不完整環(huán)形。正?；蚍氰F粒幼細(xì)貧血無環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞，鐵粒幼細(xì)貧血中環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞6%。,71,.,環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞,72,.,【臨床意義】1缺鐵性貧血時(shí)，骨髓細(xì)胞外鐵明顯減少，為“一”“士”，細(xì)胞內(nèi)鐵平均5.9%，僅為I型。經(jīng)有效鐵劑治療后，外鐵增多。因此骨髓鐵染色是診斷缺鐵性貧血及指導(dǎo)鐵劑治療的重要方法。,73,.,2鐵粒幼細(xì)胞性貧血時(shí)，外鐵“2”一“3”，內(nèi)鐵平均70%，其鐵粒粗大，以型為主，出現(xiàn)較多環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞。因此，本實(shí)驗(yàn)是診斷鐵粒幼細(xì)胞貧血的有效方法。MDS也可出現(xiàn)環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞。,74,.,3.非缺鐵性貧血如巨幼細(xì)胞貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血等骨髓鐵正?；虿煌潭鹊脑黾印５偕系K性貧血不會出現(xiàn)環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞，可作為與MDS鑒別的參考。4.繼發(fā)性貧血的部分患者細(xì)胞內(nèi)鐵可減少，但細(xì)胞外鐵不減少。,75,.,教學(xué)提綱：（一）.常用血細(xì)胞化學(xué)染色1.鐵染色2.過氧化物酶染色3.堿性磷酸酶染色4.醋酸萘酚酯染色5.過碘酸-雪夫反應(yīng)（二）.結(jié)合血細(xì)胞化學(xué)染色鑒別急性白血病類型（三）.結(jié)合血細(xì)胞化學(xué)染色鑒別貧血類型,76,.,五.重點(diǎn)：過氧化物酶染色、鐵染色的原理臨床意義難點(diǎn)：結(jié)合血細(xì)胞化學(xué)染色鑒別急性白血病類型六.學(xué)科發(fā)展動態(tài)：參考書目:臨床血液學(xué)及檢驗(yàn)第7版，許文榮人民衛(wèi)生出版社，2007年7月全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第3版，葉應(yīng)嫵，中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司，2006年11月臨床血液學(xué)細(xì)胞學(xué)圖譜第3版，劉志潔，科學(xué)出版社，2006年8月學(xué)習(xí)網(wǎng)站：中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)(),77,.,七.思考題：1.急性白血病患者一般要做哪些細(xì)胞化學(xué)？2.如何用細(xì)胞化學(xué)鑒定急粒及急淋？3.慢粒最常用的細(xì)胞化學(xué)染色是？4.外鐵染色的臨床應(yīng)用。5.為了區(qū)別紅白血病與巨幼紅細(xì)胞性貧血，下列首選試驗(yàn)是：A、POX染色B、PAS染色C、ALP積分測定D、a-NAE染色E、鐵