實驗八 維生素B1片含量測定的方法驗證,設(shè)計性實驗,實驗原理,維生素B1又稱鹽酸硫胺 （thiamine hydrochloride），化學(xué)名稱為氯化4-甲基-3(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)-甲基-5-(2-羥基乙基噻唑鎓鹽酸鹽,性 質(zhì),溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶硫色素反應(yīng)：紫外吸收特性：Amax=246nm與生物堿沉淀試劑反應(yīng)氯化物特性：,特征性鑒別,含量測定,氯化物檢查,原理,特征性鑒別硫色素反應(yīng)維生素B1在堿液中可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素，色素轉(zhuǎn)溶于正丁醇(或異丁醇、異戊醇)中，顯現(xiàn)于酸中消失的藍(lán)色熒光。（見劉文英主編藥物分析第六版，P258）含量測定維生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，,實驗方法,鑒別反應(yīng)取本品約5mg，加氫氧化鈉試液2.5ml使其溶解，加鐵氰化鉀試液0.5ml與正丁醇5ml，強(qiáng)力振搖2min，放置使成兩液層，上層醇液即顯強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，加酸使成酸性熒光即消失，再加堿使成堿性，則熒光復(fù)現(xiàn)。,含量測定 1.精密稱取片粉40.98mg(相當(dāng)于維生素B125mg，標(biāo)示量為每1g藥物中含有0.164g維生素B1)，置100ml量瓶中 加鹽酸溶液（91000）約70ml，搖勻15分鐘使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻 干燥濾紙過濾精密量取續(xù)濾液5.0ml，置100ml量瓶中，鹽酸溶液（91000）定容至刻度，搖勻 得到供示品溶液。,含量測定2.精密稱取維生素B1對照品25mg，置100ml量瓶中，鹽酸溶液（91000）定容至刻度，搖勻 得到對照品溶液。3.將2份溶液用紫外分光光度計在246nm處分別測定吸光度，計算即得。,實驗內(nèi)容與要求,鑒別試驗吸收波長選擇精密度試驗：用同一份樣品溶液測定6次，計算RSD%重復(fù)性試驗：引用其他組同學(xué)數(shù)據(jù)（稱樣量，吸光度）計算標(biāo)示量%，計算RSD%穩(wěn)定性試驗：考察樣品溶液30min內(nèi)的穩(wěn)定性，計算RSD%加樣回收率試驗：根據(jù)重復(fù)性試驗的結(jié)果，設(shè)計加樣回收率試驗含量測定：根據(jù)測定結(jié)果計算含量，標(biāo)示量%。,如何引用？,線性關(guān)系和范圍,分析方法的驗證,1,精密度試驗,2,重現(xiàn)性試驗,3,加樣回收試驗,4,穩(wěn)定性試驗,5,線性與范圍,精密稱取片粉40.98mg(相當(dāng)于維生素B125mg)，置100ml量瓶中 加鹽酸溶液（91000）少量，使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻 分別取上述溶液3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加鹽酸溶液（91000）至刻度，搖勻?qū)⑵渲糜谧贤夥止夤舛扔嬛性?46nm處測量并用C做A的回歸曲線。,線性關(guān)系,穩(wěn)定性試驗,精密稱取片粉40.98mg(相當(dāng)于維生素B125mg)，置100ml量瓶中 加鹽酸溶液（91000）少量，使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻 將其置于紫外分光光度計中在246nm處測量在0、15、30、45、60min時間點分別測定樣品的A246在0、1、2、4、8、12h分別測定樣品的峰面積.RSD 2.0%，則需要重新選取時間點進(jìn)行計算，直到RSD 2.0%，否則要盡快測定,精密度試驗,目的檢測儀器、試劑、操作人員、實驗條件等的可信程度要求用對照品按樣品溶液的制備方法制備對照品溶液，同濃度至少平行操作6份，濃度與信號值要在線性范圍內(nèi)RSD 2.0% 儀器分析,同批、同法,穩(wěn)定性試驗,重現(xiàn)性試驗,目的考察樣品溶液制備方法的可靠程度要求同批樣品按相同方法制備樣品溶液，至少6份,濃度與信號值均要在線性范圍內(nèi)RSD 2.0% 儀器分析,重現(xiàn)性試驗(示例),精密度試驗（示例 ）,加樣回收率試驗,目的考察準(zhǔn)確度，即用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度要求設(shè)計高、中、低三個濃度，每個濃度各分別制備三份供試品溶液進(jìn)行測試，計算回收率RSD 2.0%,加樣回收試驗,取含量測定時一半的稱樣量，0.5g/2,98102%,撰寫方法學(xué)驗證