密級 ： 論文編號 ： 中國農業(yè)科學院 碩士學位論文 中西藥結合新制劑 “痢寶” 質量 控制 及 穩(wěn)定性研究 of of I 摘 要 “痢寶”是經過多年 臨床實踐并結合中獸醫(yī)理論而研發(fā)的一種中西結合口服液體制劑， 主要用于 犢牛 急慢性腹瀉的治療。 為了完善“痢寶”的生產工藝，建立規(guī)范的 質量控制體系，準備新藥申報材料， 以及為 檢驗和監(jiān)督管理部門 提供檢測依據 ， 本文 從以下幾個方面 進行了“痢寶”質量標準和穩(wěn)定性的研究 ： 處方方解 及 煎煮工藝研究。 本方具有健脾燥濕，清熱解毒，調氣活血的功能，用于治療外邪入侵或脾胃虛弱所致 “ 泄瀉 ” 。 秦皮為方中主藥。 以制劑中秦皮甲素和秦皮乙素的含量為指標，利用正交試驗，篩選和優(yōu)化了本藥的煎煮工藝： 煎煮 3 次， 每次 均 加 7 倍量的水， 煎煮 時 。 藥材 及原料藥質量標準 研究 。根據中國藥典（ 2005 年）收錄的方法對復方中各藥材進行了薄層鑒別 ，結果各藥材均符合處方要求。 利用 測定了秦皮中秦皮甲素和秦皮乙素的含量 ； 建立了原料藥中痢菌凈鑒別及含量測定的方法。 根據實驗結果規(guī)定： 按干燥品計，含 秦皮甲素 和秦皮乙素的總量 應不低于 ； 痢菌凈原料藥 含量應不低于 成藥 “痢寶” 質量標準研究 。 主要進行了制劑中秦皮、痢菌凈的薄層鑒別和秦皮甲素、乙素及痢菌凈的 含量測定研究。建立的鑒別方法直觀、簡單、專屬性強；含量測定方法準確、重現(xiàn)性好。 根據實驗結果規(guī)定： 制劑中 秦皮甲素 和秦皮乙素 含量不得低于 痢菌凈含量不得低于 制劑 穩(wěn)定性研 究 。 主要考察了光照、 度對秦皮甲素、乙素、痢菌凈含量的影響；并通過 經典恒溫試驗，對藥物的有效期進行了預測。 結果：制劑應做成 酸性 溶液 ， 右最好 ； 應避光和避免高溫放置 ；應保 存 在酸性環(huán)境 。 關鍵詞 ： 痢寶 ， 中西結合口服液體制劑 ， 煎煮工藝 ， 質量標準 ， 穩(wěn)定性 as a of of by of It to on to to to in on of in of i, It to by of or of By of as by of on of LC of 2005). in of of of be of be ,of . on of It of as as of in of of be of be of on of of pH on of of by be at of 錄 摘要 文縮略表 第一章 緒論 . 1 1 研究目的和意義 . 1 究目的 . 1 究意義 . 1 2 犢牛腹瀉概述 . 2 國傳統(tǒng)醫(yī)學對犢牛腹瀉病因及治療的概況 . 2 代醫(yī)學對犢牛腹瀉病因及治療的研究進展 . 4 3 復方中重要藥材及痢菌凈的研究進展 . 6 皮 . 6 頭翁 . 9 齒莧 . 12 術 . 15 楂 . 19 芪 . 24 菌凈 . 28 4 中（獸）藥合劑穩(wěn)定性研究概述 . 29 第二章 “ 痢寶 ” 方解及生產工藝研究 . 30 1 處方組成 . 30 2 處方分析 . 30 3 煎煮工藝的篩選 . 30 器與試藥 . 30 譜條件 . 31 法 . 31 果 . 33 4 生產工藝 . 33 第三章 “ 痢寶 ” 質量控制的研究 . 34 1 藥品原料（藥材）質量控制的研究 . 34 材和原料藥的鑒別 . 34 材和原料藥的含量測定 . 36 論 . 38 “痢寶”的質量控制研究 . 39 稱 . 39 方 . 39 法 . 39 狀 . 39 別 . 39 痢寶”中秦皮甲素和秦皮乙素的含量測定 . 41 痢寶”中痢菌凈的含量測定 . 47 能與主治 . 50 法與用量 . 50 格 . 50 藏 . 50 第四章 “ 痢寶 ” 穩(wěn)定性研究 . 51 1 儀器與試藥 . 51 器 . 51 藥 . 51 2 方法 . 51 照對秦皮甲素、乙素和痢菌凈含量的影響 . 51 H 對秦皮甲素、秦皮乙素和痢菌凈含量的影響 . 52 度對秦皮甲素、秦皮乙素和痢菌凈含量的影響 . 53 物有效期預測 . 53 3 結果 . 54 穩(wěn)定實驗結果 . 54 3.2 藥物穩(wěn)定性的影響 . 54 度對藥物穩(wěn)定性的影響 . 55 物有效期預測結果 . 55 4 討論 . 55 第五章 結論 . 57 參考文獻 . 58 致謝 . 62 附圖 . 63 作者簡介 . 68 V 英文縮略表 英文縮寫 英文全稱 中文名稱 替三線性分解 水型肝癌 氏腹水瘤 頭翁水提液 頭翁醇提液 頭翁注射液 甲肼 氧化物歧化酶 胱甘肽過氧化物酶 殖細胞核心抗原標記指數(shù) 瘤壞死因子 氧化值 4 白細胞三烯 多糖 否氏細胞 腔巨噬細胞 5烯基苯氧聚乙氧 乙醇 基苯氧聚乙氧乙醇 細胞介素 清谷丙轉氨酶 脂擴散敏感試驗 膽固醇 油三脂 密度脂蛋白膽固醇 . 齒莧多糖 二醛 文縮寫 英文全稱 中文名稱 氧化氫酶 蛋白脂酶 氧化物酶增殖激活體受體 氧化物酶增殖體反應元件 化型低密度脂蛋白 皮細胞對單核細胞 脈粥樣硬化 皮素 2 血栓素 列環(huán)素 酸脫氫酶 酸激酶 管內皮細胞 環(huán)內皮細胞 s 芪莖葉總黃酮 癌浸潤淋巴細胞 芪多糖 磷脂膽固醇?；D移酶 島素抵抗 白蛋白 氨酸轉氨酶 酰甲喹 （ 痢菌凈 ） 層色譜 效液相色譜 國食品與藥品管理局 對標準偏差 中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 緒論 1 第一章 緒 論 1 研究目的和意義 究目的 本課題組依據中獸醫(yī) “辨證論治 ”理論，結合中藥學現(xiàn)代研究成果，研制出一種治療犢牛腹瀉的中西藥結合復方 口服 液體制劑，并在臨床上取得了 較 好的治療效果 。 臨床資料統(tǒng)計表明，一次用藥治愈率在 80左右，二次用藥治愈率在 90左右。 因此， 本論文的研究目的為： 通過對“痢寶”的 質量控制 及穩(wěn)定性進行研究， 從而指導該藥的生產及貯存，確保本藥的質量和 療效穩(wěn)定可靠 ，進而推動“痢寶”的申報。 究意義 進犢牛腹瀉的防治 ，保證養(yǎng)牛業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展 犢牛腹瀉是新生犢牛的殺手，約占犢牛發(fā)病率的 80，常侵害出生后 2 周內的犢牛，如治療不及時，會造成犢牛死亡， 嚴重威脅著我國 養(yǎng) 牛業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展及相關產業(yè)的發(fā)展。 目前對該病的治療，現(xiàn)代醫(yī)學主要采用抗生素治療并結合支持療法，但療效不理想，且 合成藥物的弊端（耐藥性、毒副作用等）不可忽視。中獸藥對該病的治療已取得較好的效果 ，但缺少高效、使用方便的制劑，不利于中獸藥的推廣及其大規(guī)模防控疾病作用的發(fā)揮。 本課題組研 制 的 “痢寶” 已取得較好的 臨床 治療效果 ，有必要建立相應的質控技術以確保其療效 。 因此， 對本藥 質量控制 和穩(wěn)定性的研究，將為其質量可控和療效穩(wěn)定提供更多的理論和技術支持，從而促進本藥在犢牛腹瀉 防治中的 應用，保證養(yǎng)牛業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展，進而取得更大的經濟和社會效益。 應中獸藥的國內外 市場發(fā)展趨勢，促進中獸藥的現(xiàn)代化 從總體上看，目前我國中獸藥 制劑的現(xiàn)狀是：制劑品種少，水平低，質量不夠穩(wěn)定，缺乏規(guī)?；a，缺乏創(chuàng)新產品， 重復生產嚴重， 缺乏競爭力，遠遠滿足不了國內市場的需要，更談不上走出國門與世界同類先進產品相抗衡。 進入新世紀以來 ，中獸藥正面臨著一個前所未有的大好 發(fā)展 機遇。有關資料表明，隨著國際畜產品貿易技術壁壘不斷增高，我國的一些禽類產品由于病原、獸藥殘留等技術指標超過歐盟及主要進口國日本的控制指標，曾被拒收、扣留、終止合同甚至封關等。同時歐盟也在大力開發(fā)天然植物藥、免疫調節(jié)劑等綠色環(huán)保型天然植物藥作為替代產品，在養(yǎng)殖生產中推廣。在此嚴峻的形勢下，安全 、 優(yōu)質 、 綠色畜禽產品生產呼喚中獸藥產品替代 合成 藥物，呼喚中西結合的畜禽防疫技術模式。與西藥相比，中獸藥 整體調節(jié)動物機體， 藥效慢，副作用少，不會形成對人們身體有害的藥物殘留。由于中獸藥 的這一傳統(tǒng)優(yōu)勢，中獸藥的應用前景越來越廣闊，中獸藥正在朝著現(xiàn)代化、國際化以及中西結合的方向發(fā)展。 在日韓等國家，中藥用于人的醫(yī)療保健有較長歷史，但用于動物不多 ； 歐美國家過去只對針灸感興趣，動物診療上應用中藥則很罕見 ； 近年來，在歐、美、日、韓以及我國的港澳臺等國家中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 緒論 2 和地區(qū)，中獸藥開始逐漸被認同。 現(xiàn)代化的中獸藥是高效、優(yōu)質、安全、穩(wěn)定、質量可控、給藥方便、具有現(xiàn)代化劑型而又不失中藥特色的新一代動物用藥 ， 包括單味、復方及以中藥為主的中西結合制劑。 人用 中藥現(xiàn)代化和國際化發(fā)展 過程 中的一條深刻教訓就是： 只有具備有效質控技 術的產品，才能搶占較多的國內外市場份額，否則只能出售低附加值的原料或半成品。 中獸藥要現(xiàn)代化 ,首先 就得 標準化 ,中獸藥 質量控制 已 成為中 獸 藥現(xiàn)代化的前提 ； 中獸藥 要國際化 ， 必須首先現(xiàn)代化。因此，加強中獸藥 質量控制 的 研究 對中 獸 藥現(xiàn)代化和國際化的實現(xiàn)都具有至關重要的作用。 討中西結合制劑 質量控制 及穩(wěn)定性研究的理論和方法 中獸藥的研究和應用正越來越多的朝著中西結合的方向發(fā)展。一方面， 西藥 具有 品種多、作用強且 迅速等特點，被廣 泛地應用于獸醫(yī)臨床， 但西藥 毒副作用及耐藥性問題日漸突出 ；另一方面， 中 獸 藥的特色和優(yōu)勢 不僅 在于預防 、 增強免疫功能、減少應激、延遲發(fā)病、緩減癥狀、促進病變恢復、防治并發(fā)癥或繼發(fā)感染 ，即中獸醫(yī)所講的 扶正又祛邪，標本兼顧 ，而且 毒副作用小，不會產生耐藥性 。 兩者相結合，可以取長補短，內外并重，整體與局部并重，起到相得益彰的效果。中西藥結合應用已為多數(shù)獸醫(yī) (藥 )工作者應用并取得良好的治療效果。中西藥的結合，是發(fā)展 中獸藥 的重要舉措。 目前，對純中藥制劑 質量控制 和穩(wěn)定性 研究， 已經有許多較為成熟的理論和方法，并在控制制劑 質量和療效等方面發(fā)揮了巨大的作用。但是，對中西結合制劑 質量控制 和穩(wěn)定性的研究，卻少見 ，難度也較大 。 一方面 證明 中西結合 制劑 療效優(yōu)于純中藥制劑或單一西藥制劑 有難度 ；另一方面，確定中西結合制劑 中藥理效應的物質基礎即有效成份有難度。 “痢寶” 經臨床拆方試驗證實：中西結合制劑的療效優(yōu)于純中藥或單一西藥制劑。在此基礎上， 本論文進行 了該藥 質量控制及穩(wěn)定性的研究 ； 在理論和方法上，對中西結合制劑的上述研究內容進行了一定程度的研究和探討。 至于中西結合制劑藥理效應的物質基礎，需要進行后續(xù)研究。 2 犢牛腹瀉概述 腹瀉 (新生犢牛的常見病之一， 發(fā)病率高，易致死亡 。 多種 細菌、病毒 和 寄生蟲等病原微生物感染以及一些非感染性因素 均可引起腹瀉。 大多數(shù)致命的腹瀉病發(fā)生在出生后的 前 2周。隨著 犢 牛的生長， 犢 牛對傳染性疾病的抵抗力明顯增強，但 3 4周齡的 犢 牛對該類傳染性疾病仍具有較高的易感性。 國傳統(tǒng)醫(yī)學對犢牛腹瀉病因及治療的概況 泄瀉，是指排糞次數(shù)增多，糞便稀薄，甚至瀉糞如水樣 1,2。 病因病 理 的認識 泄瀉的主要病變部位在脾胃和大小腸。但其他臟腑疾患，如腎陽不足等，也能導致脾胃功能失常，發(fā)生泄瀉。泄瀉發(fā)生的原因很多主要有以下幾個方面： 中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 緒論 3 受寒濕 外感寒濕，傳于脾胃，或內傷陰冷，直中胃腸，致使運化無力，寒濕下注，清濁不分，遂成泄瀉。 積胃腸 多因 暑月炎天，勞役太重，乘熱飼喂草料，郁而生熱，損傷脾胃，津液不能化生，水反為濕，濕熱下注，乃成其患。 食停積 因采食過量草料，致宿食停滯，損傷脾胃，不能運化水谷精微，則水反為濕，谷反為滯，致使合污下降而成泄瀉。 胃虛弱 因長期飲喂失調，使役過度，或草料劣質，致使脾胃虛弱，胃弱不能腐熟消導，脾虛不能運化水谷精微，以致中氣下陷，清濁不分，故而作瀉。 證施治 瀉 主證：發(fā)病較急，瀉糞稀薄如水，耳鼻 俱冷，腸鳴如雷，尿少；口色青白或青黃，口內滑利，脈象沉遲。 治則：溫中散寒，利水止瀉。 方藥：五 苓散加干姜、茴香。水瀉嚴重者，加訶子、烏梅、天仙子止瀉。 針治：火針脾俞、后海等穴。 瀉 主證：瀉糞稀薄或粘膩，氣味惡臭；患畜精神沉郁，草料減少或不食，發(fā)熱，有時腹痛不安，尿赤短；口色赤紅，舌苔黃膩，口臭，脈象沉數(shù)。 治則：清熱燥濕，利水止瀉。 方藥：五苓散加干姜、茴香。水瀉嚴重者，加訶子、烏梅、天仙子止瀉。 針治：火針脾俞、后海等穴。 食 瀉 主證：食欲廢絕，牛反芻停止，肚腹微脹 ，糞便稀軟酸臭，含有未消化的谷料，間有輕微疼痛，瀉后痛減；口色紅，舌苔厚，脈象沉緊。 治則： 消食導滯 。 方藥： 保和丸加味 。 食 滯 重者，加 大黃 、 枳實 、 檳榔；水瀉甚者，加豬苓、木通、澤瀉；熱盛者，加黃芩、黃連。 針治： 同熱瀉 。 虛瀉 主證：體瘦毛焦，精神倦怠，四肢無力，肷軟，慢草；瀉糞粗糙，完谷不化，或糞中帶水，中國農業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 緒論 4 腸鳴如雷，尿少；口色青黃，脈象沉細。 治則：補中益氣，利水止瀉。 方藥：補中益氣湯加味。水瀉重者，加茯苓、豬苓；完谷不化的，加山楂、麥曲、建曲。 針治：針脾俞、后海。 虛瀉 主證： 病程較長 ， 夜間（特別是在黎明之前）作瀉 ， 糞便稀軟 ， 甚至完谷不化；四肢發(fā)涼 ，腰腿無力 ， 肛門松弛；口色淡白 ，脈象沉細 無力 。 治則： 溫補腎陽 ， 澀腸 止瀉 。 方藥： 巴戟散，去檳榔，加 茯苓、豬苓 等 ； 或用四神丸 。 針治： 火 針脾俞、 白會、 后海 等 。 代醫(yī)學對犢牛腹瀉病因及治療的研究進展 病因的認識 引發(fā)犢牛腹瀉的病因多且復雜，常常是多種致病因素同時作用于機體。 染性因素 菌感染 劉明春等 3從患病犢牛糞便中分離出的主要致病菌為大腸桿菌， 藥敏試驗結果表明，該分離菌對頭孢哌酮、頭孢他啶、妥布霉素、卡那霉素、慶大霉素、丁胺卡那、呋喃妥因、氟哌酸、利福平等高度敏感；對紅霉素、氨芐西林中度敏感；對四環(huán)素、萬古霉素和復合磺胺耐藥。喻華英等 4從腹瀉犢牛糞便樣品中分離 到得到 5株沙門氏菌 （ 占 ） ，其余 均為大腸桿菌；藥敏試驗發(fā)現(xiàn)該場的沙門氏菌對青霉素，紅霉素，慶大霉素等中度敏感 ； 對環(huán)丙沙星，諾氟沙星敏感度極高。何昭陽等 5研究證實 ， 腹瀉或即將腹瀉時，大腸桿菌數(shù)增加，雙歧桿菌和乳桿菌數(shù)下降；腹瀉康復或即將康復時，大腸桿菌減少，雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)增加。 毒感染 引起犢牛腹瀉的病毒包括輪狀病毒，冠 狀 以及黏膜病病毒。輪狀病毒進入犢牛胃腸道后，在酶 (胃蛋白酶、胰酶 )的作用下被激活，然后侵入小腸絨毛上的柱狀上皮細胞，并在胞漿內繁殖，致使細胞功能 喪失 ，最后死亡。同時輪狀病毒通 過腸壁的變化而使其對細胞感染更敏感。由冠 狀病毒引起的犢牛腹瀉通常發(fā)生在 5日齡以上，病毒進入犢牛消化道后，即進入小腸前段的絨毛上皮細胞，感染并迅速擴大到后段，致 時表現(xiàn)腹瀉 ； 繼