.,放射免疫分析Radioimmunoassay,.,一、原理：,Ag+AbAgAb+Ag+*Ag*AgAb+*Ag*Ag和Ab量恒定,競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,.,+,+,+,+,6,8,X100=75%,X100=50%,X100=25%,X100=12.5%,8,4,8,2,8,1,.,結(jié)論,*AgAb復(fù)合物的量取決于Ag的量Ag量越大，*AgAb量越少Ag量越小，*AgAb量越大測(cè)量*AgAb量或測(cè)量多余*Ag量可推算出Ag量,.,二、測(cè)量步驟,恒量的*Ag、Ab加入反應(yīng)管中加入待測(cè)樣品、或標(biāo)準(zhǔn)品（已知濃度）37或4溫育加入分離劑分離結(jié)合及游離部分測(cè)定以總放射性為分母，測(cè)定*AgAb為分子，計(jì)算結(jié)合%，以結(jié)合率為縱坐標(biāo)，濃度為坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線待測(cè)樣品的結(jié)合率從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度,.,0248163264128,8070605040302010,結(jié)合%,濃度,.,三、放免分析基本條件,標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)記抗原特異抗體分離劑分離結(jié)合與游離部分,.,分離劑要求,快速而完全分離操作簡(jiǎn)便、來(lái)源容易、價(jià)格便宜不受血清、外界條件及其它試劑的干擾適用于任何容積的反應(yīng)液非特異結(jié)合率小,.,常用液相分離技術(shù),雙抗體法特點(diǎn)：分離完全，非特異結(jié)合小，環(huán)境影響小，效價(jià)高，但成本高沉淀法聚乙二醇（w=6000）特點(diǎn)：快速，價(jià)廉，來(lái)源方便，受環(huán)境影響大,.,常用液相分離技術(shù)（續(xù)）,吸附法吸附游離部分，適用于分離小分子游離抗原?；钚蕴俊⒗w維素粉末特點(diǎn)快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性差鹽析法飽和硫酸胺、硫酸鈉固相分離技術(shù)，按材料不同，可分為試管法、顆粒法、小盤(pán)法、紙片法,.,四、放免分析的優(yōu)點(diǎn),靈敏度高特異性強(qiáng)精確度高用血量少體外測(cè)量,.,單位換算,1g=1000mg1mg=1000g1g=1000ng1ng=1000pg,.,非放射性體外分析技術(shù),.,非同位素標(biāo)記的條件,靈敏度結(jié)合特性均一性穩(wěn)定性環(huán)境因素的不敏感性臨床應(yīng)用安全性應(yīng)用性,.,非放射性體外分析技術(shù),酶免疫分析發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析酶放大化學(xué)發(fā)光免疫分析電化學(xué)放光免疫分析熒光免疫分析時(shí)間分辨熒光免疫分析或解離增強(qiáng)鑭系熒光免疫分析BCPDA強(qiáng)熒光螯合物