低聚糖與水溶性膳食纖維對(duì)嬰兒腸道菌群益生作用研究秦雪梅，劉靜，霍貴成東北農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱150030摘要目的通過體外靜置培養(yǎng)，分析低聚糖包括低聚果糖FOS、低聚半乳糖GOS和水溶性膳食纖維聚葡萄糖POL對(duì)嬰兒腸道菌群的益生作用。方法取完全母乳喂養(yǎng)的新鮮嬰兒糞便，加已滅菌的磷酸鹽緩沖液，離心，取其上清液按10的體積比加到培養(yǎng)基中，在厭氧箱中靜置培養(yǎng)，在不同時(shí)間取樣，測定嬰兒腸道的菌落狀態(tài)及其各種腸道菌群的數(shù)量變化，用益生指數(shù)PI表示；通過測定不同時(shí)間代謝產(chǎn)物的PH來判斷低聚糖和水溶性膳食纖維的抗發(fā)酵能力，和被降解速率，最后分析代謝產(chǎn)物中的短鏈脂肪酸SCFA含量，綜合比較它們的益生作用。結(jié)果分析，F(xiàn)OS、GOS、POL都有一定的益生作用，POL的抗發(fā)酵能力比較顯著。關(guān)鍵詞低聚糖；水溶性膳食纖維；PI值；短鏈脂肪酸中圖分類號(hào)TS2014文獻(xiàn)標(biāo)志碼A文章編號(hào)10059989201106009605PREBIOTICEFFECTSOFOLIGOSACCHARIDESANDSOLUBLEDIETARYFIBERONINFANTINTESTINALFLORAQINXUEMEI,LIUJING,HUOGUICHENGKEYLABOFDAIRYSCIENCE,MINISTRYOFEDUCATION,NORTHEASTAGRICULTURALUNIVERSITY,HARBIN150030ABSTRACTOBJECTIVEPROBIOTICEFFECTSOFFRUCTOOLIGOSACCHARIDESFOS,GALACTOOLIGOSACCHARIDEGOS,ANDPOLYDEXTROSEPOLONINFANTINTESTINALFLORAWEREANALYZEDINVITROINTHISSTUDYMETHODSFRESHSTOOLOFINFANTSFEDBREASTMILKEXCLUSIVELYWASSELECTED,MIXEDWITHSTERILEPBSANDCENTRIFUGED,THENTHESUPERNATANTWASADDEDTOTHECULTUREMEDIUMWITHTHERATIOOF10V/VINPLATESTHEPLATESWEREINCUBATEDINTHEANAEROBICMEANWHILESAMPLINGATDIFFERENTTIMEANDDETERMININGTHESTATUSOFINFANTINTESTINALBACTERIAANDTHECHANGESINTHENUMBEROFINTESTINALFLORAWHICHWASEXPRESSEDASPREBIOTICINDEXPITHEANTIFERMENTATIONCAPACITYANDDEGRADATIONRATEOFOLIGOSACCHARIDEANDWATERSOLUBLEDIETARYFIBERWEREALSODETERMINEDBYTESTINGTHEPHVALUESOFDIFFERENTMETABOLITESINDIFFERENTTIMESWHILETHECONTENTSOFSHORTCHAINFATTYACIDSSCFAINMETABOLITESWEREANALYZED,THUSTOEVALUATETHEIRPROBIOTICEFFECTSRESULTALLOFFOS,GOSANDPOLSHOWEDPROBIOTICEFFECTSTOSOMEDEGREETHOUGHTHESIGNIFICANTHIGHERANTIFERMENTATIONCAPACITYWASSEENINPOLKEYWORDSOLIGOSACCHARIDESSOLUBLEDIETARYFIBERPIVALUESSHORTCHAINFATTYACIDS收稿日期20101206通訊作者基金項(xiàng)目東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生物乳制品理論與技術(shù)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目CXT007。作者簡介秦雪梅1983，女，河北張家口人，碩士研究生，研究方向?yàn)槿橹破钒l(fā)酵。96食品科技FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY食品開發(fā)2011年第36卷第6期通常認(rèn)為，益生元PREBIOTICS是那些能夠選擇性地促進(jìn)機(jī)體腸道內(nèi)原有的一種或有限幾種有益細(xì)菌益生菌生長或其活性的一種非消化性的食品功能因子1。主要是指各種寡糖或低聚糖，它們除了能增殖雙歧桿菌、乳酸桿菌之外；主要的發(fā)酵終產(chǎn)物是短鏈脂肪酸SCFA。目前一些研究認(rèn)為聚葡萄糖也具有益生元的作用，可促進(jìn)腸道雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益菌的生長繁殖，同時(shí)產(chǎn)生大量短鏈脂肪酸，如乙酸、醋酸、葉酸和乳酸，改變腸道PH，改善有益菌群的繁殖環(huán)境，從而加快腸道蠕動(dòng)，使糞便順利排出，可有效地預(yù)防便秘2。便秘的不良后果有很多，時(shí)常伴有食欲不振，導(dǎo)致營養(yǎng)不良、精神萎靡、腸道功能紊亂，這樣會(huì)加重便秘。由此，找到對(duì)嬰兒腸道菌群有益生作用，可以有效預(yù)防嬰兒便秘的益生元尤為重要4。嬰兒理想的益生元應(yīng)是被益生菌高度選擇性發(fā)酵的，可以促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸桿菌增殖，抑制大腸桿菌等致病菌生長，其代謝產(chǎn)物應(yīng)和母乳喂養(yǎng)嬰兒的代謝產(chǎn)物相似。目前對(duì)益生元作用的研究仍以體內(nèi)分析法居多，這種方法不但所需條件苛刻，而且費(fèi)時(shí)費(fèi)力。采用厭氧發(fā)酵的體外分析方法，不但能節(jié)省時(shí)間，還能更好地控制整個(gè)發(fā)酵過程。體外分析益生元的方法由RYCROFT等5的靜置培養(yǎng)基發(fā)展到MACFARLANE等6的三階段恒化器或腸道模型法。OLANOMARTIN等7和PALFRAMAN等8也分別采用了靜置和動(dòng)態(tài)培養(yǎng)方法，分析了大量寡糖及低聚糖的益生元活性，有的還結(jié)合了體內(nèi)分析方法，證實(shí)了2種方法的一致性RYCROFT等5。本實(shí)驗(yàn)通過體外培養(yǎng)的方法，驗(yàn)證其對(duì)嬰兒腸道菌群的益生作用，為其在嬰兒食品的應(yīng)用方面提供參考依據(jù)。滅菌15MIN待用。碳水化合物溶液10，W/V通過022M孔徑過濾添加到培養(yǎng)基中，作為唯一的碳源。VK1SIGMA公司10L通過022M孔徑濾膜過濾除菌后添加到培養(yǎng)基中。在厭氧條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)發(fā)酵的過程中PH不受控制5。112主要儀器高效液相色譜儀WATERS2695；色譜柱BIORADAMINEXHPX87H柱30078MM；示差折光檢測器WATERS2487；FORMAANAEROBICSYSTEM1029厭氧箱THERMOELECTRONCORPORATION；離心機(jī)ANKEGL20G；高功率恒溫?cái)?shù)控超聲波清洗器KQ800GKDV型。12實(shí)驗(yàn)方法121益生作用為了評(píng)價(jià)碳水化合物對(duì)腸道重要有益菌促進(jìn)生長的能力，在低聚糖和聚葡萄糖發(fā)酵的0、8、24H時(shí)分別用無菌注射器取100L發(fā)酵液，測定其菌落總數(shù)和雙歧桿菌數(shù)、乳桿菌數(shù)、大腸桿菌數(shù)和梭菌數(shù)9。雙歧桿菌數(shù)測定GB/T4789342008；乳酸桿菌數(shù)測定采用GB/T4789352008；梭菌數(shù)測定采用GB/T4789132003；大腸桿菌數(shù)測定采用GB/T478932008；菌落總數(shù)的測定采用GB/T478922008。同時(shí)測定發(fā)酵液的OD值，作為參考。為了比較各種碳源的益生影響，用下面的公式計(jì)算生物指數(shù)PIBIF/TOTALESC/TOTALLAC/TOTALCLOS/TOTAL式中BIF、ESC、LAC、CLOS分別表示培養(yǎng)一定時(shí)間后雙歧桿菌、大腸桿菌、乳桿菌、梭菌與對(duì)應(yīng)菌初始時(shí)間的菌數(shù)之比；TOTAL為培養(yǎng)一定時(shí)間后的總菌數(shù)與初始時(shí)間總菌數(shù)之比。122PH測定評(píng)定低聚糖和水溶性膳食纖維被微生物的發(fā)酵速率，通過PH的變化來判斷各種碳源被嬰兒腸道菌群發(fā)酵的程度。分別在培養(yǎng)時(shí)間0、2、4、8、24H時(shí)，取3ML代謝產(chǎn)物，測定其PH，同時(shí)計(jì)算出PH的下降值10，觀察不同碳源的發(fā)酵液的PH變化。123代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸的測定1231高效液相色譜條件乙酸鹽、丙酸鹽和丁酸鹽的測定用色譜柱BIORADAMINEXHPX87H柱300MM78MM，流動(dòng)相是0005MOL/L的H2SO4，過膜，脫氣，流速是06ML/MIN，溫度是50。用示差折光檢測器，進(jìn)樣量20L11。1材料和方法11材料和儀器111試劑與材料低聚果糖FOS、低聚半乳糖GOS保齡寶生物股份有限公司；聚葡萄糖POL河南金潤食品添加劑有限公司；氫氧化鋇、硫酸鋅分析純，天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠。培養(yǎng)基成分蛋白胨2G，酵母浸出物2G，K2HPO4004G，KH2PO4004G，MGSO27H2O001G，CACL22H2O001G，NAHCO32G，半胱氨酸HCL05G，膽鹽05G，吐溫802ML，氯化血紅素005MG/ML10ML，刃天青00254ML，用蒸餾水定容至1000ML，調(diào)節(jié)PH為70，121下1232短鏈脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備取甲酸、97食品科技FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY食品開發(fā)2011年第36卷第6期乙酸、丙酸、丁酸標(biāo)準(zhǔn)品，加去離子水配成100MMOL/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，稀釋至合適的濃度，各濃度取1ML及試液注入色譜儀，平行測定3次，以色譜峰峰面積定量。1233代謝產(chǎn)物中短鏈脂肪酸含量測定分別在0、8、24H時(shí)取發(fā)酵液上清液2ML，加入4ML18BAOH2加4ML2ZNSO4劇烈震蕩，自然沉淀10MIN，13000R/MIN離心15MIN，除去菌體和其他微粒，取1ML上清液進(jìn)入液相色譜儀檢測。實(shí)驗(yàn)測定了5位嬰兒糞便中4種腸道菌的菌數(shù)變化，分別以低聚糖和水溶性膳食纖維為唯一碳源的研究中，發(fā)酵8H時(shí)，實(shí)驗(yàn)組中的雙歧桿菌、乳酸菌及大腸桿菌的菌落總數(shù)都有所增加，F(xiàn)OS和GOS組的雙歧桿菌增長比較快，POL組的雙歧桿菌增長速度相對(duì)比較緩慢。發(fā)酵24H后，F(xiàn)OS和GOS組的乳酸桿菌數(shù)繼續(xù)上升，雙歧桿菌數(shù)有所下降，大腸桿菌和梭菌的生長受到明顯的抑制。但是POL組的雙歧桿菌數(shù)和乳酸桿菌數(shù)都有明顯的增長，大腸桿菌數(shù)下降。以不同碳源為底物的嬰兒糞樣在靜置發(fā)酵8H和24H的各細(xì)菌數(shù)見表1。2結(jié)果與分析21益生作用表1不同碳源發(fā)酵過程中對(duì)嬰兒腸道細(xì)菌數(shù)量的變化LGCFU/MLSD碳源時(shí)間BIFLACESCCLOSTOTAL0812003628021691032551045894063FOS824887023854011703011720023756011745007614012614029931004956012GOS824896003856012709004723004758022753015621011616006932035958042POL824875005901022696013731020746011732009608022576015921003963004比較緩慢，在之后的4H，F(xiàn)OS組的下降幅度趕上GOS組，POL組與它們之間的PH差距逐漸拉大。由表4可知，在開始的4H和8H以FOS和GOS為碳源的發(fā)酵組，PH下降幅度相近，比較快。以POL組為碳源的發(fā)酵組PH相對(duì)其他2組下降比較慢。在之后的16H，以POL為碳源的發(fā)酵組PH下降幅度小，F(xiàn)OS組最快，依次為FOSGOSPOL。POL組PH下降速度比較緩慢，所需時(shí)間較長。由此可見POL的抗發(fā)酵能力比較強(qiáng)。23代謝產(chǎn)物中短鏈脂肪酸含量表5不同碳源代謝產(chǎn)物SCFA含量的平均值MMOL/L，平均值SD通過計(jì)算得出的PI值如表2所示，可知，在發(fā)酵8H，F(xiàn)OS、GOS和POL都有一定的益生作用。在24H，POL的益生作用持續(xù)的時(shí)間比較長，效果比較顯著。表2以不同碳源為底物的嬰兒糞樣發(fā)酵8H和24H的PI值時(shí)間FOSGOSPOL8H24H02315022490242502192023560336422PH的變化FOS、GOS和POL在發(fā)酵過程中0、2、4、8、24H的PH見表3。表3底物為不同碳源的糞樣在不同發(fā)酵時(shí)間中的PH碳源時(shí)間/H乙酸鹽丙酸鹽丁酸鹽碳源0H2H4H8H24H08230050601405015870344100615002FOSGOSPOL893892894788745802730732745605545642512479586FOS241083395801224067082421062980451138909016290073604305021180322902由表3可知，在發(fā)酵開始2H，GOS組的PH就表現(xiàn)出明顯的下降優(yōu)勢，POL組的PH下降的速度GOS表4不同碳源的糞樣在各個(gè)時(shí)間段的PH變化值08242308496032136085060354101161023060130701108028碳源04H48H824HPOLFOSGOSPOL163160149125187103093066056由表5可知，所有底物發(fā)酵8H后，乙酸鹽含量都有所增加；發(fā)酵24H后，乙酸鹽含量較8H時(shí)98食品科技FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY食品開發(fā)2011年第36卷第6期有明顯增加，POL組的乙酸鹽含量最高。GOS和FOS發(fā)酵組乙酸鹽增加幅度相近，且實(shí)際含量相差不多。發(fā)酵8H后的丙酸鹽含量均有明顯增加，F(xiàn)OS組增加比較快，GOS組的丙酸鹽含量比較少，但是丁酸鹽含量比FOS和GOS組高。發(fā)酵24H后的，GOS組的丙酸鹽含量還是最少，POL組的丙酸鹽含量相對(duì)比較高?？傮w分析，POL組的主要SCFA是乙酸鹽和丙酸鹽，丁酸鹽含量幾乎很少；FOS組和GOS組的乙酸鹽含量也比較高，還產(chǎn)生一些丁酸鹽?？梢钥闯?，以0H為對(duì)照，以不同碳源為底物的嬰兒糞樣發(fā)酵8H后，短鏈脂肪酸含量都有所增加。發(fā)酵24H后，POL組短鏈脂肪酸含量增加顯著，尤其是乙酸鹽含量。做高效液相分析時(shí)發(fā)現(xiàn)FOS、GOS和POL還產(chǎn)生了其他種類的短鏈脂肪酸，例如乳酸。物的溶解度、聚合度等化學(xué)特性。腸道菌群通過產(chǎn)生SCFA，對(duì)人體多個(gè)器官和代謝產(chǎn)生較大的影響17。結(jié)腸上皮細(xì)胞中SCFA的代謝活動(dòng)，可能是腸道細(xì)菌與宿主間相互作用最重要的體現(xiàn)。3種主要的SCFA，如乙酸、丙酸和丁酸，對(duì)上皮細(xì)胞的代謝具有重要意義。母乳喂養(yǎng)的嬰兒幾乎不產(chǎn)生丁酸鹽，而乙酸鹽占96，接近于總的SCFA，和母乳喂養(yǎng)狀態(tài)接近的被認(rèn)為益生效果最好18。本研究僅檢測了主要的SCFA，如乙酸、丙酸、丁酸。發(fā)現(xiàn)POL的主要SCFA組成是乙酸，和母乳接近。但是其是否有一些副作用還有待研究。FOS被雙歧桿菌降解，主要產(chǎn)生乙酸、丙酸、葉酸和乳酸，從而改變腸腔PH，降解致病物質(zhì)，直接抑制病菌生長，并且加快腸腔推進(jìn)運(yùn)動(dòng)。POL主要代謝成乙酸鹽和丙酸鹽，而幾乎不產(chǎn)生丁酸鹽；和FOS和GOS相比，POL代謝產(chǎn)生了百分比更高的乙酸鹽和更低的丁酸鹽，更接近母乳益生元的狀態(tài)。另外，聚葡萄糖引起了雙歧桿菌和乳酸桿菌等有益菌的增殖，也引起梭狀芽孢桿菌和大腸桿菌等致病菌的降低。在FOS和GOS組，乙酸含量也很高，但是丁酸鹽含量也有所增長。有研究報(bào)道，丁酸是上皮細(xì)胞特別重要的能量來源，在細(xì)胞分化和生長中起著非常重要的作用。目前丁酸對(duì)于嬰兒的作用報(bào)道比較少，還有待于研究。通過上述研究，根據(jù)PI值、PH的下降速度、SCFA量綜合分析，F(xiàn)OS、GOS和POL對(duì)嬰兒腸道都有一定的益生作用。在開始的8H，GOS的PI值相對(duì)比較高；但是發(fā)酵24H后，POL的PI值比較顯著。從PH下降的速度考慮，在開始的8H，F(xiàn)OS組和GOS組下降幅度比較大；在整個(gè)發(fā)酵過程中，POL組PH下降速度比較緩慢，可見POL的抗發(fā)酵能力比較強(qiáng)。根據(jù)SCFA判斷，POL組代謝產(chǎn)物中的乙酸含量比較高，丁酸鹽含量比較少，和母乳接近。由此可知，這3種碳源對(duì)嬰兒腸道菌群都有一定的益生作用，但是對(duì)嬰兒的生長是否有副作用還有待研究，還需要對(duì)其做相關(guān)的安全性評(píng)價(jià)。3討論P(yáng)I值是一個(gè)定量描述益生元作用的指標(biāo)，公式是基于發(fā)酵過程中主要菌群數(shù)量的變化，通過將這些數(shù)值帶入PI公式進(jìn)行計(jì)算，然后得出具體的PI分?jǐn)?shù)，即PI值；公式中的字母表示的均是比值，即培養(yǎng)一定時(shí)間后的菌數(shù)與初始時(shí)間菌數(shù)之比；PI值越大，益生元作用越強(qiáng)1216。PI值是判斷益生元作用的一種簡單并且實(shí)用的方式，通過比較PI值的大小，可以定性、定量地描述益生元的作用。本實(shí)驗(yàn)中，通過比較8H和24H時(shí)PI值的平均值，可以看出FOS、GOS和POL都有一定的益生作用。相對(duì)來說，在開始的8HFOS和GOS組對(duì)嬰兒腸道中雙歧桿菌及乳桿菌的選擇性增殖作用較高，在之后的時(shí)間發(fā)酵速度比較慢，POL組的益生作用持續(xù)的時(shí)間比較長，在發(fā)酵24H時(shí)的PI值明顯增加?？紤]可能是碳鏈偏長，聚合度高對(duì)嬰兒腸道菌群的發(fā)酵作用有更高的抵抗力，導(dǎo)致發(fā)酵的時(shí)間延長，遠(yuǎn)端結(jié)腸逐漸膨脹，不容易被嬰兒腸道菌選擇性發(fā)酵，發(fā)酵所需時(shí)間較長。益生作用持續(xù)PH的變化間接說明不同碳源被嬰兒腸道菌群發(fā)酵的程度及其自身的抗發(fā)酵能力，PH下降比較快，說明碳源的抗發(fā)酵能力比較弱。POL對(duì)嬰兒腸道菌群有高的抗發(fā)酵能力，導(dǎo)致發(fā)酵的時(shí)間延長，遠(yuǎn)端結(jié)腸逐漸膨脹，可以減少嬰兒便秘的發(fā)生。SCFA主要是大腸內(nèi)碳水化合物發(fā)酵和蛋白質(zhì)降解的產(chǎn)物，產(chǎn)生速率和數(shù)量取決于碳水化合參考文獻(xiàn)BOEHMG,STAHLB,JELINEKJ,ETALPREBIOTICCARBOHYDRATESINHUMANMILKANDFORMULASACTAPAEDIATR,2005,944491821KUNZC,RUDLOFFS,BAIERW,ETALOLIGOSACCHARIDESIN1299食品科技FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY食品開發(fā)2011年第36卷第6期HUMANMILKSTRUCTURAL,FUNCTIONALANDMETABOLICASPECTSANNUREVNUTR,2000,20699722AGGETTPJ,AGOSTONIC,AXELSSONI,ETALNONDIGESTIBLECARBOHYDRATESINTHEDIETSOFINFANTSANDYOUNGCHILDRENACOMMENTARYBYTHEESPGHANCOMMITTEEEONNUTRITIONJPEDIATRGASTROENTEROLNUTR,2003,3632937FANAROS,BOEHMG,GARSSENJ,ETALGALACTOOLIGOSACCHARIDESANDLONGCHAINFRUCTOOLIGOSACCHARIDESASPREBIOTICSININFANTFORMULASAREVIEWACTAPAEDIATR,2005,944492226CERYCROFT,MRJONES,GRGIBSON,ETALACOMPARATIVEINVITROEVALUATIONOFTHEFERMENTATIONPROPERTIESOFPREBIOTICOLIGOSACCHARIDESJOURNALOFAPPLIEDMICROBIOLOGY,2001,91878887MACFARLANEGT,MACFARLANES,GIBSONGRVALIDATIONOFATHREESTAGECOMPOUNDCONTINUOUSCULTURESYSTEMFORINVESTIGATINGTHEEFFECTOFRETENTIONTIMEONTHEECOLOGYANDMETABOLISMOFBACTERIAINTHEHUMANCOLONMICROBECOL,1998,3521807OLANOMARTINE,GIBSONGR,RASTELLRACOMPARISONOFTHEINVITROBIFIDOGENICPROPERTIESOFPECTINSANDPECTICOLIGOSACCHARIDESJAPPLMICROBIOL,2002,93350511PALFRAMANRJ,GIBSONGR,RASTALLRAEFFECTOFPHANDDOSEONTHEGROWTHOFGUTBACTERIAONPREBIOTICCARBOHYDRATESINVITROANAEROBE,2002,8528792NEWBURGDSOLIGOSACCHARIDESINHUMANMILKANDBACTERIALCOLONIZATIONJPEDIATRGASTROENTEROLNUTR,2000,30S81711AGGETTPJ,AGOSTONIC,AXELSSONI,ETALNONDIGESTIBLECARBOHYDRATESINTHEDIETSOFINFANTSANDYOUNGCHILDRENACOMMENTARYBYTHEESPGHANCOMMITTEEEONNUTRITIONJPEDIATRGASTROENTEROLNUTR,2003,3632937FANAROS,BOEHMG,GARSSENJ,ETALGALACTOOLIGOSACCHARIDESANDLONGCHAINFRUCTOOLIGOSACCHARIDESASPREBIOTICSININFANTFORMULASAREVIEWACTAPAEDIATR,2005,944492226KNOLJ,SCHOLTENSP,KAFKAC,ETALCOLONMICROFLORAININFANTSFEDFORMULAWITHGALACTOANDFRUCTOOLIGOSACCHARIDESMORELIKEBREASTFEDINFANTSJPEDIATRGASTROENTEROLNUTR,2005,403642MORRISONDJ,MACKAYWG,EDWARDSCA,ETALBUTYRATEPRODUCTIONFROMOLIGOFRUCTOSEFERMENTATIONBYHUMANFAECALFIORAWHATISTHECONTRIBUTIONOFEXTRACELLULARACETATEANDLACTATEBRJNUTR,2006,9657EMMABEARDS,ETALBACTERIAL,SCFAANDGASPROFILESOFARANGEOFFOODINGREDIENTSFOLLOWINGINVITROFERMENTATIONBYHUMANCOLONICMICROBIOTAANAEROBEJUNE,201016BRITTANYM