016    前  言本標準代替003食品中維生素010食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中維生素本標準與003相比,主要變化如下:標準名稱修改為“食品安全國家標準 食品中維生素增加了高效液相色譜法。0161    食品安全國家標準食品中維生素圍本標準規(guī)定了食品中維生素標準第一法為高效液相色譜法,適用于添加了維生素二法為微生物法,適用于各類食品中維生素一法 高效液相色譜法2 原理試樣經提取等前處理后,經效液相色譜標法定量測定維生素哆醇、吡哆醛、吡哆胺)的含量。3 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級水。烷磺酸鈉(乙酸(乙胺(色譜純。醇(色譜純。酸(氧化鈉(粉酶:酶活力酸溶液():量取45水稀釋并定容至100 鹽酸溶液():吸取9水稀釋并定容至1000 氫氧化鈉溶液():稱取2050卻后,用水定容至100 氫氧化鈉溶液():50卻后,用水定容至100酸吡哆醇(8純度98%,0162    的標準物質。酸吡哆醛(5純度99%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。鹽酸吡哆胺(24純度99%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。哆醇標準儲備液(1mg/鹽酸溶液溶解后定容到50避光保存,有效期1個月。哆醛標準儲備液(1mg/鹽酸溶液溶解后定容到50避光保存,有效期1個月。哆胺標準儲備液(1mg/鹽酸溶液溶解后定容到50避光保存,有效期1個月。生素0g/分別準確吸取吡哆醇、吡哆醛、鹽酸溶液稀釋并定容至50用前配制。生素100水定容。用前配制。注:標準儲備液在使用前需要進行濃度校正,校正方法參照附錄A。4 效液相色譜儀:帶熒光檢測器。平:.3 旋混合器。聲波振蕩器。光光度計。溫培養(yǎng)箱,或性能相當者。5 淀粉的試樣a) 固體試樣:稱取混合均勻的固體試樣約5g(于150入約2550的水,混勻。勻后向錐形瓶中充氮,蓋上瓶塞,置5060培養(yǎng)箱內約30出冷卻至室溫。b) 液體試樣:稱取混合均勻的液體試樣約20g(150勻。勻后向錐形瓶中充氮,蓋上瓶塞,置5060培養(yǎng)箱內約30出冷卻至室溫。含淀粉的試樣a) 固體試樣:稱取混合均勻的固體試樣約5g(于1500163    50的水,混勻。靜置50卻至室溫。b) 液體試樣:稱取混合均勻的液體試樣約20g(150置50 待測液的制備用鹽酸溶液,置約1上述錐形瓶放入超聲波振蕩器中,超聲振蕩約10試樣溶液轉移至50水沖洗錐形瓶。洗液合并于50水定容至50取50面放入漏斗和濾紙,把定容后的試樣溶液倒入其中,自然過濾。試管收集,轉移1:操作過程應避免強光照射。器參考條件儀器參考條件列出如下:a) 色譜柱:長150填料粒徑5m,或相當者;b) 流動相:甲醇50水溶解并定容到1000c) 流速:1mL/d) 柱溫:30;e) 檢測波長:激發(fā)波長293射波長395nm;f) 進樣體積:10L。準曲線的制作將維生素定各組分的峰面積,以相應標準工作液的濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,繪制標準曲線。樣溶液的測定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中,得到各組分相應的峰面積,根據標準曲線得到待測試樣溶液中維生素 分析結果的表述試樣中維生素)計算:001000(1)式中:試樣中維生素位為毫克每百克(00g);根據標準曲線計算得到的試樣中維生素位為微克每毫升(g/V試樣溶液的最終定容體積,單位為毫升(m試樣質量,單位為克(g);100換算為100克樣品中含量的換算系數(shù);1000將濃度單位g/0164    試樣中維生素)計算:X=醛胺(2)式中:X  試樣中維生素吡哆醇計)的含量,單位為毫克每百克(00g);試樣中吡哆醇的含量,單位為毫克每百克(00g);試樣中吡哆醛的含量,單位為毫克每百克(00g);吡哆醛的含量換算成吡哆醇的系數(shù);試樣中吡哆胺的含量,單位為毫克每百克(00g);吡哆胺的含量換算成吡哆醇的系數(shù)。結果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15%。8 法檢出限為:00g,00g,00g;方法定量限為:00g,00g,00g。第二法 微生物法9 原理食品中某一種細菌的生長必須要有某一種維生素的存在,卡爾斯伯(母菌在有維生素一定條作下維生素比濁法測定該菌在試樣液中生長的渾濁度,與標準曲線相比較得出試樣中維生素0 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的二級水。培養(yǎng)基可使用符合測試要求的商品化的培養(yǎng)基。酸(酸(氧化鈉(哆醇得含維生素脂(n。化鈉(甲酚綠(0165    酸溶液():水稀釋并定容至1000酸溶液():于2000水稀釋至1000酸溶液():于20008水稀釋至1000氧化鈉溶液(10):稱取4040卻后,用水定容至100氧化鈉溶液():移取10氫氧化鈉溶液1水定容至100理鹽水(9g/L):稱取9水溶解后定容至1000121下高壓滅菌15卻后備用。甲酚綠溶液():氫氧化鈉溶液研磨,加少許水繼續(xù)研磨,直至完全溶解,用水稀釋到250養(yǎng)基(培養(yǎng)基組分與配制方法參見附錄C)哆醇哆醇芽浸粉瓊脂培養(yǎng)基。準品鹽酸吡哆醇(8純度99%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。哆醇標準儲備液(100g/準確稱取122的鹽酸溶液溶解并定容至10004下避光保存,有效期1個月。哆醇標準中間液(1g/準確吸取1水稀釋并定容至100哆醇標準工作液(50ng/準確吸取5水定容至1001 柵分光光度計。平:熱恒溫培養(yǎng)箱,或性能相當者。壓釜,或性能相當者。旋混合器。心機。凈工作臺,或性能相當者。0166    12 分析步驟注:預包埋了菌種的商業(yè)化維生素檢測原理相同,檢測效果相當,實際使用時按試劑盒中的操作指南進行操作。種的制備及保存(避光處理)種復壯:卡爾斯伯酵母(080菌種或等效菌種凍干品,幾滴復溶的菌液分別接種2支裝有1030水浴振蕩培養(yǎng)20h24h。儲備菌種制備:將菌種復壯培養(yǎng)液劃線接種于代培養(yǎng)基)斜面上,于30培養(yǎng)20h24h,于28冰箱內保存,此菌種為第一代月儲備菌種;以后每月將上一代的月儲備菌種劃線接種于代培養(yǎng)基)斜面,于30培養(yǎng)20h24h,于28冰箱內保存,有效期一個月,此菌種為當月儲備菌種。儲備菌種制備:每周從當月儲備菌種接種于代培養(yǎng)基)斜面,于30培養(yǎng)20h24h,于28冰箱內保存,有效期7d。保存數(shù)星期以上的菌種,不能立即用作制備接種液之用,一定要在使用前每天移種一次,連續(xù)2d3d,方可使用,否則生長不好。種菌懸液制備:在維生素周儲備菌種轉接于10子培養(yǎng)液)中,可同時制備2管,于30振蕩培養(yǎng)20h24h,得到測定用的種子培養(yǎng)液,從月儲備菌種到種子培養(yǎng)液總代數(shù)不超過5代。將該種子培養(yǎng)液于3000r/去上清液;用10心,傾去上清液,用生理鹽水重復洗滌2次;再加10離心管置于渦旋混勻器上充分混合,使菌種成為混懸液,將此菌懸液倒入已消毒的注射器內,立即使用。0g(中維生素入100硫酸溶液。放入高壓釜121下水解5h,取出冷卻,溴甲酚綠做指示劑(指示劑由黃將錐形瓶內的溶液轉移到100蒸餾水定容至100紙過濾,保存濾液于冰箱內備用(有效期不超過36h)。注:整個試樣處理過程需要注意避光操作。準曲線的制備:6勻,加棉塞。樣管的制備:棉塞塞住試管,將制備好的標準曲線和試樣測定管放入高壓釜121下高壓滅菌10至室溫備用。種和培養(yǎng):每管種一滴接種液,于30溫箱中培養(yǎng)18h22h。定將培養(yǎng)后的標準管和試樣管從恒溫箱中取出后,用分光光度計于550標準管的零管調零,測定各管的吸光度值。以標準管維生素光度值為縱坐標,繪制維生素試樣管得到的吸光度值,在標準曲線上查到試樣管維生素0167    13 分析結果的表述試樣提取液中維生素)計算:=1+2+33(3)式中: 試樣提取液中維生素位為納克每毫升(ng/i各試樣測定管中維生素位為納克每毫升(ng/試樣中維生素)計算:X=V100m106(4)式中:X 試樣中維生素吡哆醇計)的含量,單位為毫克每百克(00g);試樣提取液中維生素位為納克每毫升(ng/V試樣提取液的定容體積與稀釋體積總和,單位為毫升(m試樣質量,單位為克(g);100106折算成每100算結果保留到小數(shù)點后兩位。14 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15%。15 00g。0168    附 錄 哆醛、吡哆胺標準儲備液,鹽酸溶液定容到100為標準校正液。鹽酸溶液作為對照溶液。收值的測定用1對照溶液為空白對照,測定各標準校正溶液的吸收值。準溶液的濃度計算各標準儲備液的質量濃度按式(算:i=(中:i 維生素哆醇、吡哆醛、吡哆胺)標準儲備液的質量濃度,單位為微克每毫升(g/維生素哆醇、吡哆醛、吡哆胺)標準測試液在各自最大吸收波長維生素哆醇、吡哆醛、吡哆胺)標準品的分子量(i維生素哆醇、吡哆醛、吡哆胺)鹽酸溶液中的吸收系數(shù)(V稀釋因子;無維生素哆醇、吡哆醛、吡哆胺)的對照溶液的換算因子(生素)0169    附 錄 01610   附 錄 哆醇餾水1000解于10021滅菌15用。解于100熱煮沸使瓊脂融化,混合均勻后分裝于試管中,每管1021滅菌15成斜面?zhèn)溆?。解?000熱煮沸使瓊脂融化,混合均勻后分裝于試管中,每