G 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) 9689 2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 牛奶中甲砜霉素殘留 量的測(cè)定 高效液相色譜法 in 電子版本僅供參考，以標(biāo)準(zhǔn)正式出版物為準(zhǔn)） 2013布 2014施 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì) 發(fā)布 I 目 次 目 次 . I 前 言 . 奶中甲砜霉素殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法 . 1 范圍 . 2 規(guī)范性引用文件 . 3 原理 . 4 試劑和材料 . 5 儀器和設(shè)備 . 6 樣品的制備與保存 . 品的制備 . 品的保存 . 7 測(cè)定步驟 . 取 . 化 . . 效液相色譜測(cè)定 . 白試驗(yàn) . 8 結(jié)果計(jì)算和表述 . 9 檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 . 敏度 . 確度 . 密度 . 附錄 A . 言 本 標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)系國內(nèi)首次發(fā)布的國家標(biāo)準(zhǔn)。 牛奶中 甲砜霉素殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牛奶中甲砜霉素殘留量檢測(cè)的制樣和高效液相色譜測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于牛奶中甲砜霉素殘留量的檢測(cè)。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容 )或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)。然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適 用于本標(biāo)準(zhǔn)。 準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3 原理 試料 中 殘留 的甲砜霉素 ， 用乙酸乙酯提取，正己烷 除 脂， 凈化， 高效液相色譜 外標(biāo)法定量。 4 試劑和材料 以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純，水為符合 6682 規(guī)定的一級(jí)水。 砜霉素對(duì)照品： 含 量 酸乙酯 己烷 腈： 色譜純。 200 相當(dāng)者 。 1 mg/砜霉素標(biāo)準(zhǔn) 貯備 液： 精密 稱取甲砜霉素對(duì)照品 10 于 10 瓶中，用乙腈溶解并 稀釋至刻度 ，配制成濃度為 1 mg/標(biāo)準(zhǔn) 貯備 液 。 2 8 保存，有效期 1 個(gè)月。 10 g/砜霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液： 精密 量取 1 mg/砜霉素 標(biāo)準(zhǔn) 貯備 液 1.0 于 100 瓶 中， 用流動(dòng)相稀釋 ，配制成濃度為 10 g/甲砜霉素 標(biāo)準(zhǔn)工作液。 現(xiàn)配現(xiàn)用 。 5 儀器和設(shè)備 效液相色譜儀： 配 紫外檢測(cè)器。 析天平： 感量 1 g。 平： 感量 g。 心機(jī) 相萃取裝置。 氣吹干儀。 蕩混合器。 心瓶： 150 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。 塞塑料離心管： 50 膜 ： m。 6 試料 的制備與保存 料 的制備 取適量新鮮或冷藏的空白或供試牛奶， 混合 均勻 。 取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料 。 取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料 。 取 均質(zhì)后的空白樣品 ， 添加適宜濃度 的 標(biāo)準(zhǔn) 溶 液 ， 作為空白添加試料。 料 的保存 以下 保存 。 7 測(cè) 定步驟 取 稱取 試料（ 5g， 于 50 心管中，加乙酸乙酯 20 振蕩 10 4 000 r/心 5 取上清液于雞心瓶中， 殘?jiān)屑?乙酸乙酯 20 復(fù) 提取一次 ， 合并兩次提取液， 于 45 旋 轉(zhuǎn) 蒸發(fā)至近干 ， 加水 5 雞心瓶中 ， 超聲 5 充分溶解，轉(zhuǎn)至 50 心管中。再加水 5 20 己烷 ，振蕩 5 4 000 r/心 2 下層液備用。 化 依次用乙腈 5 水 5 化。取備用液過柱， 控制 流速 1 mL/擠干。用乙腈 5 收集洗脫液， 于 45 氮?dú)獯蹈桑?用流動(dòng)相 1.0 解 殘 余 物 ， 濾膜 過濾，供高效液相色譜測(cè)定。 線的制備 精密 量取 10 g/砜霉素標(biāo)準(zhǔn) 工作 液 適量 ，用流動(dòng)相稀釋 ，配制 成濃度 為 20、 50、 125、 250和 500 g/L 的 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液 ，供高效液相色譜 測(cè)定 。 以 測(cè) 得 峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液 濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。 效液相色譜測(cè)定 譜條件 色譜柱： 250 .6 徑 5 m） ，或相當(dāng)者； 流動(dòng)相：乙腈 +水（ 20+80， v/v)，使用前經(jīng)濾膜過濾，超聲； 流速： 1.0 mL/ 檢測(cè)波長： 225 柱溫： 30 ； 進(jìn)樣量： 20 L。 定法 取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，按外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算 。 標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液中甲砜霉素響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。 在上述色譜條件下， 標(biāo)準(zhǔn) 溶液 和空白組織添加試樣 溶液 的高效液相色譜圖分別見附錄 A。 白試驗(yàn) 除不加試料外，采用完全相同的步驟進(jìn)行平行操作。 8 結(jié)果 計(jì)算和表述 試料 中甲砜霉素 的殘留量 （ g/： 按下式計(jì)算 ： X 式中： X 試 試料 中甲砜霉素的 殘留量 ， g/ C 樣溶液中甲砜霉素的濃度， ng/ V 解殘余物流動(dòng)相體積 ， m 試試料 質(zhì)量， g。 注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。 9 檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 敏度 本方法 的檢測(cè)限 為 10 g/定量限為 10 g/ 確度 本方法在 10 100 g/加濃度 水平上的 回收率為 70 110。 密度