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文檔簡介
1、分子生物學(xué)常用溶液配方: 抗生素 儲(chǔ)備液濃度 儲(chǔ)存溫度 工作濃度 工作濃度 (嚴(yán)緊型質(zhì)粒) (松弛型質(zhì)粒) 氨芐青霉素 500mg/ml(溶于水) -20 20g/ml 60g/ml 氯霉素 34mg/ml(溶于乙醇) -20 25g/ml 170g/ml 卡那霉素 10mg/ml(溶于水) -20 10g/ml 50g/ml 鏈霉素 10mg/ml(溶于水) -20 10g/ml 50g/ml 四環(huán)素 5mg/ml(溶于水) -20 10g/ml 50g/ml BCIP 0.5g 5-溴-4氯-3-吲哚磷酸二氫鈉(BCIP)加到10ml 100%二甲基甲酰胺中, 4保存 NBT 0.5g氯化
2、氮藍(lán)四唑加4ml 70%二甲基甲酰胺中, 保存于4中 0.5mol/L EDTA(pH 8.0) 800ml水中加186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na.H2O), 劇烈攪拌, NaOH調(diào)pH 至8.0(約需20g), 定容至1L, 份裝高壓滅菌備用. 10mg/ml EB (溴化乙錠) 100ml水中加入1g溴化乙錠, 攪拌數(shù)小時(shí), 鋁箔包裹或轉(zhuǎn)移到棕色瓶中室溫保存 IPTG IPTG為異丙基硫代-D半乳糖苷(分子量為238.3D), 8ml蒸餾水溶解2g IPTG后定容至10ml, 用22m濾器過濾除菌, 分裝成1ml, -20儲(chǔ)存. 10mml/L PMSF(苯甲基磺酰氟) 用
3、異丙醇溶解PNSF成1.74mg/ml(10mml/L)分裝成小份儲(chǔ)存 PBS(磷酸緩沖鹽溶液) 800ml蒸餾水溶8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4、0.24g KH2PO4,HCl調(diào)pH至8.0, 加水定容至1L, 高壓滅菌20分鐘, 室溫保存 I液 50mM 葡萄糖(無菌過濾后使用) 25mM Tris.Cl(pH8.0) 10mM EDTA(pH8.0) 高壓滅菌后存于4。 II液 0.2M NaOH 0.1% SDS 液(乙酸鉀溶液) 60 ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水 10%SDS (十二烷基硫酸鈉) 900ml水中加入1
4、00g電泳級SDS, 加熱至68. 加入幾滴濃鹽酸調(diào)pH至7.2, 定容1L, 分裝備用 1M Tris 800ml水溶121.1gTris堿, 加入濃HCl調(diào)pH至所需值 pH HCl7.4 70ml7.6 60ml8.0 42ml 室溫時(shí)調(diào)pH定容至1L,分裝后滅菌 X-gal X-gal 為5-溴-4氯-3-吲哚-D半乳糖苷, 用二甲基酰胺溶解X-gal配制成20mg/ml的儲(chǔ)備液. 保存于玻璃管或聚丙烯管中, 鋁箔包裹-20保存 溶菌酶 用水配制成50mg/ml,分裝成小份, -20保存, 一經(jīng)使用后便丟棄 蛋白酶K 儲(chǔ)存液:20mg/ml(溶于水); 保存: -20; 反應(yīng)濃度: 5
5、0g/ml; 反應(yīng)緩沖液:0.01mol/LTris(pH8.0), 5 mmol/L EDTA, 0.5%SDS; 反應(yīng)溫度:37-56 RNA酶 將胰RNA酶(RNA酶A)溶于10mmol/L Tris.Cl(pH7.5)、15mmol/LNaCl中,配成10mg/ml,于100加熱15分鐘,緩慢冷卻至室溫,分裝成小份,保存于-20。 STE(亦稱TEN)0.1mol/L NaCl; 10mmol/L Tris.Cl(pH 8.0); 1mmol/L EDTA(pH 8.0)。 TE pH 7.410mmol/L Tris.Cl(pH 7.4) 1mmol/L EDTA(pH 8.0) p
6、H 7.6 10mmol/L Tris.Cl(pH 7.6) 1mmol/L EDTA(pH 8.0) pH 8.010mmol/L Tris.Cl(pH 8.0) 1mmol/L EDTA(pH 8.0) TNT(WB專用)50mmol/L Tris.Cl(pH 7.5)150mmol/L NaCl0.05% Tween 20 堿性磷酸酶緩沖液100 mmol/L NaCl5mM MgCl2 100 mmol/L Tris.Cl(pH9.5) 2XSDS蛋白凝膠加樣緩沖液 100mmol/L Tris.Cl(pH6.8)200mmol/L二硫蘇糖醇(DTT)4%SDS(電泳級)0.2%溴酚藍(lán)
7、20% 甘油 Tris-甘氨酸 使用液:1X :25mmol/L Tris 濃儲(chǔ)備液(每升):5X: 15.1g Tris堿 250mmol/L甘氨酸 94g甘氨酸(電泳級)(pH8.0) 0.1%SDS 50ml 10%SDS(電泳級) 6X DNA Loading buffer 25%溴酚藍(lán)40%(W/V)蔗糖水溶液 4儲(chǔ)存 脫脂奶封閉液 5% 脫脂奶粉 0.02% 疊氮鈉 轉(zhuǎn)移緩沖液配制1L 轉(zhuǎn)移緩沖液,需稱取2.9g甘氨酸、5.8gTris堿、0.37g SDS, 并加入200ml甲醇,加水至總量為1L。 細(xì)胞及細(xì)菌裂解緩沖液 50 mmol/LTris.Cl(pH8.0) 1 mmol/L EDTA(pH8.0) 100 mmol/L NaCl 水 丙烯酰胺 Tris.Cl 10%SDS 10%過硫酸銨 TEMED 10ml 12%分離膠 3.3ml 4ml 2.5ml(1.5M ,pH8.8) 0.1ml 0.1ml 0.004ml10ml 5% 積層膠 6.8ml 1.7ml 1.25ml(1M
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