1、有機(jī)酸分析柱使用手冊(cè)Chrompack Organic Acids Column注意Chrompack Organic Acids 色譜柱填充的是聚合物材料，需要特殊的維護(hù)。向柱內(nèi)導(dǎo)入以下介紹了的以外的有機(jī)溶劑會(huì)導(dǎo)致聚合物材料膨脹和過(guò)度增壓。因此，你應(yīng)當(dāng)在安裝柱子以前，先用異丙醇，然后用0.1N的硫酸十分徹底地沖洗管路以徹底去除有機(jī)溶劑。在使用這個(gè)柱子之前，你要充分地熟悉這本手冊(cè)講述的內(nèi)容。未正確地使用不能享受保修待遇。1 簡(jiǎn)介Chrompack Organic Acids柱填充有氫形式的陽(yáng)離子排斥樹(shù)脂，特別開(kāi)發(fā)用于在低牙條件下分離包括酒、果汁、奶制品、生物樣品、工業(yè)原料和環(huán)境樣品中的有機(jī)酸。

2、2 洗脫推薦使用濃度范圍在0.002到0.05N的稀硫酸溶液。大多數(shù)的分析使用0.01N的硫酸（pH=2.3）都可以獲得成功。其他的強(qiáng)酸例如磷酸和高氯酸也可以使用，但是鹵酸例如鹽酸不推薦使用，因?yàn)樗鼈儠?huì)腐蝕不銹鋼。當(dāng)有強(qiáng)酸用于柱子的洗脫液的時(shí)候，柱子就進(jìn)行了自身再生。所以，特別的再生步驟是不需要的。但是這樣并不能直接對(duì)洗提強(qiáng)度和大多數(shù)有機(jī)酸的保留性質(zhì)進(jìn)行校正，較強(qiáng)的洗提強(qiáng)度通常只減少最后餾出的化合物的保留時(shí)間。在使用以前，所有的洗脫液都要用0.45m濾膜過(guò)濾和脫氣。對(duì)于這個(gè)柱子，使用有機(jī)相修正，例如乙腈（最大20%），可以縮短保留時(shí)間。這樣做，總是會(huì)造成背壓的升高。所以，較高的操作溫度和較低的

3、洗提流速通?？捎糜诜乐巩a(chǎn)生過(guò)高壓力。注意，一旦對(duì)柱子使用了有機(jī)相修正，柱子就會(huì)保留使用了有機(jī)相修正的洗脫液的色譜特性，即使洗脫液已經(jīng)恢復(fù)到原始的100%的水相，柱子的性質(zhì)也不會(huì)回到當(dāng)初發(fā)貨時(shí)的狀態(tài)了。因此，如果你的應(yīng)用中包括有芳香酸或不飽和酸，它們會(huì)出現(xiàn)較長(zhǎng)的保留時(shí)間，我們推薦使用Chrompack的芳香酸柱（Cat.no.28352），它是專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)用于此類(lèi)化合物的。3 流量和壓力推薦用于Chrompack Organic Acids柱的流量是0.3-0.8ml/min。任何情況下洗脫流量都不能超過(guò)0.8 ml/min，記住柱子壓力產(chǎn)生的原因有洗脫流速，柱溫，洗脫液的黏度等等。要限制洗提流速，

4、使泵壓力不超過(guò)2200PSI。在45C，0.6ml/min流速時(shí)，預(yù)期的壓力應(yīng)當(dāng)在600-1500 PSI之間。如果在此條件下，柱壓超過(guò)了1200 PSI，通常指示有污染物沉積在填充材料上，必須采取改正的措施。（見(jiàn)有關(guān)柱效喪失的原因一節(jié)）。 4 樣品準(zhǔn)備保持柱子長(zhǎng)壽的關(guān)鍵是進(jìn)樣前適當(dāng)?shù)牡臉悠诽幚?。你必須防止將脂肪，油脂，蛋白質(zhì)物質(zhì)和重金屬離子導(dǎo)入色譜柱， 不管是流動(dòng)相還是樣品。特別地，要禁止導(dǎo)入顆粒雜質(zhì)。這些最終都會(huì)造成操作壓力的增高而且非常困難或者不可能去除。生物樣品在注射以前必須除去蛋白質(zhì)。較好的除蛋白試劑是磺基水楊酸。5 柱前過(guò)濾器柱前過(guò)濾器含有0.5-2.0um的多孔不銹鋼燒結(jié)物，安裝

5、在樣品注射器和柱子之間用于從洗脫液中去除顆粒物。這樣可以防止分析柱產(chǎn)生壓力增高的問(wèn)題，延長(zhǎng)柱子的壽命。當(dāng)有保護(hù)柱的時(shí)候，柱前過(guò)濾器就可以不用了。6 保護(hù)柱保護(hù)柱應(yīng)當(dāng)用在這個(gè)柱上，因?yàn)闃悠泛拖疵撘何廴究赡軙?huì)造成柱壓力的增高。樣品中諸如鹽和蛋白質(zhì)類(lèi)的污染物可能會(huì)使柱效降低，在注射進(jìn)柱子以前應(yīng)當(dāng)去除。7 樣品量通常使用的樣品量在10-50微升的范圍內(nèi)，但是進(jìn)樣高達(dá)100微升應(yīng)當(dāng)沒(méi)有問(wèn)題。進(jìn)樣500微升或者更多可能會(huì)導(dǎo)致峰變寬或者融合。8 溫度Chrompack Organic Acids柱可以在20-90C使用。提高柱溫會(huì)改善柱效。然而，柱溫也會(huì)樣品的保留，所以建議使用柱溫箱以保證得到可以重復(fù)的結(jié)果

6、。由于某些分離對(duì)溫度非常敏感，所以有必要仔細(xì)地操控溫度以?xún)?yōu)化分離效果。如果在室溫使用這個(gè)柱子，洗脫流速必須降低保持泵壓不高于2200PSI。9 貯存柱子提供給你的時(shí)候使用0.01N的硫酸作為平衡。這也是建議的用于貯存的洗脫液。柱子在保存的時(shí)候，一定要使用提供的螺絲和墊圈將端口密封。色譜柱必須以這種方式使用和保存，在任何時(shí)候都要保證不使柱床干涸。不正確的貯存（沒(méi)有密封）或不正確的使用，會(huì)導(dǎo)致填充材料部分地干涸，會(huì) 發(fā)生高的柱壓。在這種情形下，可以倒轉(zhuǎn)柱子，要以0.1ml/min的流速在90C向柱子泵入0.01N的硫酸。逐漸增加流速到0.5ml/min。你將會(huì)得到正常的壓力，柱子將可以用于任意方向

7、。如果這樣還不能解決問(wèn)題，柱子可能有顆粒物或其他物質(zhì)的污染。10 柱效喪失的可能原因1 額外的峰展寬。要保證管路的長(zhǎng)度和內(nèi)徑都保持最小。2 不正確的柱溫。3 不正確的洗脫流速。4 在開(kāi)始洗脫的時(shí)候，平衡時(shí)間不夠。5 洗脫液的pH或離子強(qiáng)度不正確。6 不正常的陽(yáng)離子（如Na+或H+）。7 聚合物污染。a. 高柱壓伴隨柱效降低。1 顆粒物積聚在燒結(jié)物或者聚合物床上。（a） 樣品來(lái)源-過(guò)濾或離心（b） 洗脫液來(lái)源-過(guò)濾洗脫液，封閉洗脫液容器。（c） 系統(tǒng)來(lái)源-沖洗整個(gè)系統(tǒng)管路和泵；安裝在線系統(tǒng)過(guò)濾器。2 蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)的積聚（a） 微生物在樣品中生長(zhǎng)。（b） 微生物在洗脫液中生長(zhǎng)。b. 正常柱壓伴隨柱

8、效降低1 金屬離子污染（a） 不確切的鋼合金存在于系統(tǒng)中。（b） 洗脫液含鹵素。（c） 在制備或者運(yùn)輸過(guò)程中洗脫液金屬離子污染。2 有機(jī)污染（a） 樣品中有脂肪，油脂，脂質(zhì)。聚合物的表面被覆蓋。（b） 從樣品中或者未正確制備的洗脫液中帶來(lái)的非特定的有機(jī) 物。（c） 在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機(jī)物，例如在運(yùn)輸時(shí)從大氣中帶來(lái)。8.床壓縮a. 過(guò)高的洗提流速b. 使用了不正確的有機(jī)相修正或其濃度過(guò)高。c.11 色譜柱再生使用稀硫酸（或其他強(qiáng)酸），通常這種洗脫液會(huì)將被樣品組分替換掉的氫離子補(bǔ)充回來(lái)而再生柱子。因此，不必要采取特別的再生步驟。12 用于糾正聚合物污染或聚合物床壓縮的可能的

9、操作1 制備新鮮的洗脫液在很多情況下，柱效的喪失會(huì)歸結(jié)為洗脫液的污染。所以，要在使用柱子以前要制備新鮮的洗脫液，沖洗所有液體管路。洗脫液在使用以前，應(yīng)當(dāng)用0.2到0.4微米的濾膜過(guò)濾。2 聚合物床的“放松”如果使用了不正確的高流速的話，很多聚合物與硅膠連接會(huì)缺乏硬度而可以被壓縮或坍塌。然而，它們是可以回彈的，在很多情況下，壓縮是可以恢復(fù)的。要修復(fù)坍塌的聚合物床，關(guān)閉泵，使聚合物放松30分鐘。倒轉(zhuǎn)色譜柱，泵入洗脫液，0.1毫升流速，65C淋洗過(guò)夜?；謴?fù)色譜柱的正常條件。3 倒轉(zhuǎn)色譜柱如果柱效問(wèn)題依舊存在，可以將柱子倒轉(zhuǎn)，用標(biāo)準(zhǔn)的操作條件在這個(gè)反方向操作。如果柱效恢復(fù)正常，繼續(xù)在這樣的狀態(tài)工作。如

10、果沒(méi)有改善，聚合物也許就永久地污染了而需要更換。如下所述，清洗和再生步驟的關(guān)鍵在某種意義下是從聚合物床上清洗污染物，從而恢復(fù)柱效。然而，重要的是在再次使用柱子之前要嘗試查找問(wèn)題的根源。4 色譜柱清洗準(zhǔn)備25%乙腈的水溶液。設(shè)定柱溫為65C，使洗脫液反方向0.1毫升流過(guò)色譜柱。然而，不要使柱壓超過(guò)2200psi，如果必要，調(diào)整柱流速，向柱內(nèi)泵入此溶液4小時(shí)（如果污染特別嚴(yán)重，就要過(guò)夜）。在正常條件下測(cè)試柱子。如果壓力恢復(fù)到正常，但是分辨率依然很差，就要嘗試如下所述的柱再生步驟。如果壓力沒(méi)有恢復(fù)正常，柱子也許就永久地?fù)p壞了而需要更換。5 色譜柱再生準(zhǔn)備含0.05N的硫酸溶液。設(shè)定柱溫為65C。使柱子反方向，以正常洗提流速泵入此酸溶液。注意觀察柱壓，不要是柱壓超過(guò)2200psi，如果必要，調(diào)整柱流速。向柱內(nèi)泵入此溶液2小時(shí)（如果污染特別嚴(yán)重，就要過(guò)夜）。6 色譜柱的檢查將柱溫恢復(fù)到正常。以正常的流速在正常分析條件下操作，但是要反方向。如果柱效沒(méi)有恢復(fù)，將柱子正方向安裝，重復(fù)以上步驟。注意可能需要一些時(shí)間來(lái)使基線穩(wěn)定。7色譜柱的更換以上步驟只在某些情況下可以恢復(fù)柱效。對(duì)于這些處理手段，重金屬和某些有