1、4.2 4.2 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理 光的波長(zhǎng)(cm)、頻率 (Hz) ，它們與光速c的關(guān)系是：4.2.2 光的基本性質(zhì)光的基本性質(zhì)cEhhc 在真空介質(zhì)中，光速為2.99791010cm/s。單個(gè)光子的能量E與上述三要素的關(guān)系是： E光子的能量，J；h普朗克常數(shù)（6.6251034Js）能復(fù)合成白光的兩種顏色的光叫能復(fù)合成白光的兩種顏色的光叫互互補(bǔ)色光。補(bǔ)色光。物質(zhì)所顯示的物質(zhì)所顯示的顏色是吸顏色是吸收光的互補(bǔ)色。收光的互補(bǔ)色。01lntIk bI02lgtIk bI上式稱為朗伯定律。如用A=lg(I0/It)或lg(1/T),則021lglgtIAk bITA稱為吸光度

2、。 通常稱比耳定律。04lgtIAk cIT1/3T2 這說明濃度與01lglgtIAkcbIT即通常所稱的 Ac11111222221 21212121 2121212AAAccAAAccA 原理雙光束光度計(jì)動(dòng)畫示意 單波長(zhǎng)單光束分光光度計(jì)有國(guó)產(chǎn)751型、XG-125型、英國(guó)SP500型和伯克曼DU-8型等。 單波長(zhǎng)雙光束分光光度計(jì)有國(guó)產(chǎn)710型、730型、740型、日立UV-340型等就屬于這種類型。 雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)的優(yōu)點(diǎn)：是可以在有背景干憂或共存組分吸收干憂的情況下對(duì)某組分進(jìn)行定量測(cè)定。 國(guó)產(chǎn)WFZ800-5型、島津UV-260型、UV-265型等。 分子和原子一樣，也有它的特征分子能

3、分子和原子一樣，也有它的特征分子能級(jí)級(jí) 。分子內(nèi)部的運(yùn)動(dòng)可分為價(jià)電子運(yùn)動(dòng)，分子。分子內(nèi)部的運(yùn)動(dòng)可分為價(jià)電子運(yùn)動(dòng)，分子內(nèi)原子在平衡位置附近的振動(dòng)和分子繞其重心內(nèi)原子在平衡位置附近的振動(dòng)和分子繞其重心的轉(zhuǎn)動(dòng)。因此分子具有電子能級(jí)、振動(dòng)能級(jí)和的轉(zhuǎn)動(dòng)。因此分子具有電子能級(jí)、振動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)。轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)。 分子的能量分子的能量 E 等于下列三項(xiàng)之和：等于下列三項(xiàng)之和： E=Ee+Ev+Er 分子從外界吸收能量后，就能引起分子分子從外界吸收能量后，就能引起分子能級(jí)的躍遷，即從基態(tài)能級(jí)躍遷到激發(fā)態(tài)能級(jí)。能級(jí)的躍遷，即從基態(tài)能級(jí)躍遷到激發(fā)態(tài)能級(jí)。分子吸收能量具有量子化的特征，即分子只能分子吸收能量具有量子化的

4、特征，即分子只能吸收等于兩個(gè)能級(jí)之差的能量：吸收等于兩個(gè)能級(jí)之差的能量： E=EE=E2 2-E-E1 1=h=h =hc=hc/ 電子能級(jí)轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)振動(dòng)能級(jí) 有機(jī)化合物的紫外有機(jī)化合物的紫外可見吸收光可見吸收光譜，是其分子中外層價(jià)電子躍遷的結(jié)果譜，是其分子中外層價(jià)電子躍遷的結(jié)果（三種）（三種）電子、電子、電子、電子、n電子。電子。 外層電子吸收紫外或可見輻射后，外層電子吸收紫外或可見輻射后，就從基態(tài)向激發(fā)態(tài)就從基態(tài)向激發(fā)態(tài)(反鍵軌道反鍵軌道)躍遷。主躍遷。主要有四種躍遷所需能量要有四種躍遷所需能量大小順序?yàn)榇笮№樞驗(yàn)閚 n 200nm的光的光)，但當(dāng)它們與生色團(tuán)相連，但當(dāng)它們與生色團(tuán)相連時(shí)，就會(huì)發(fā)生時(shí)，就會(huì)發(fā)生n共軛作用，增強(qiáng)生色團(tuán)的生色共軛作用，增強(qiáng)生色團(tuán)的生色能力能力(吸收波長(zhǎng)向長(zhǎng)波方向移動(dòng)，且吸收強(qiáng)度增加吸收波長(zhǎng)向長(zhǎng)波方向移動(dòng)，且吸收強(qiáng)度增加)，這樣的基團(tuán)稱為助色團(tuán)。這樣的基團(tuán)稱為助色團(tuán)。有機(jī)化合物的吸收譜帶常有機(jī)化合物的吸收譜帶常常因引入取代基或改變?nèi)艹Ｒ蛞肴〈蚋淖內(nèi)軇┦棺畲笪詹ㄩL(zhǎng)劑使最大吸收波長(zhǎng)max和吸收強(qiáng)度發(fā)生變化和吸收強(qiáng)度發(fā)生變化: max向長(zhǎng)波方向移動(dòng)向長(zhǎng)波方向移動(dòng)稱為稱為紅移紅移，向短波方向移，向短波方向移動(dòng)稱為動(dòng)稱為藍(lán)移藍(lán)移 (或紫移或紫移)。吸。吸收強(qiáng)度即摩爾吸光系數(shù)收強(qiáng)度即摩爾