1、百度文庫(kù)-讓每個(gè)人平等地提升自我PCR凈化實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)整體規(guī)劃1 PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局PCR擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域： 試劑貯存和準(zhǔn) 備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。 為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行， 即 只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)一標(biāo)本制備區(qū)一擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)一擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。2實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉 污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí)，要嚴(yán)格控制 送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。2.1 PCR試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū) 該實(shí)驗(yàn)區(qū)主

2、要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、 試劑的分裝和主反應(yīng)混 合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)， 不得經(jīng) 過(guò)其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需 的貯存試劑。對(duì)與氣流壓力的控制，本區(qū)并沒(méi)有嚴(yán)格的要求。2.2 PCR標(biāo)本制備區(qū)該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為樣本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定 DNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎海员苊鈴泥徑鼌^(qū)進(jìn) 入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所 致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。2.3 T增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為 DNA擴(kuò)增

3、。止匕外，已制備的DNA模板（來(lái) 自樣本制備區(qū)）的加入和主反應(yīng)混合液（來(lái)自試劑貯存和制備區(qū)）制備 成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本 區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的 走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。2.4 T增產(chǎn)物分析區(qū)該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，因此對(duì)本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。3污染的預(yù)防與控制PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問(wèn)題是如何避免污染。 在實(shí)際工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴(kuò)增產(chǎn)物的污染；天然基因

4、組 DNA的污染； 試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，實(shí)驗(yàn)就必須停止， 直到找到污染源為止，而且實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須作廢，需重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所 以發(fā)生污染后再圍繞實(shí)驗(yàn)室來(lái)尋找污染源不但耗時(shí)而且繁瑣，浪費(fèi)人力物力。因此要避免污染，首先應(yīng)是預(yù)防，而不是排除。3.1工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分(1)各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)置合理；(2)各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域要有明顯的標(biāo)記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等)，以避免各個(gè)不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。3.治理的系統(tǒng)設(shè)置(1)合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；(2)嚴(yán)格的氣流壓力控制，保證不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。3.硼范的操作(1)擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)

5、人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn)，經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的工作；(2)在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。止匕外，操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效地防止污染的措施；(3)清潔工作及時(shí)、正確。實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后，必須立即對(duì)本區(qū)進(jìn)行 清潔。除常規(guī)的消毒液體對(duì)表面進(jìn)行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒 外，對(duì)一些實(shí)驗(yàn)設(shè)備還應(yīng)進(jìn)行高壓消毒處理。3.4T格的管理(1)嚴(yán)格控制進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的人員。與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室，有條件的情況下要設(shè)置獨(dú)立的通道和進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的門；(2)盡量減少在實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)以減少交叉污染的可能性。(3)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，廢液不能在實(shí)驗(yàn)室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉，用過(guò)的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如焚燒等；(4)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安