1、    通脈益智膠囊對小鼠反復(fù)腦缺血再灌流后行為學(xué)的影響*        摘要：為了觀察通脈益智膠囊對小鼠反復(fù)腦缺血再灌流后行為學(xué)的影響，我們將40只小鼠分為4組，經(jīng)反復(fù)腦缺血再灌加降血壓法造模后，分別給予生理鹽水、通脈益智膠囊、喜德鎮(zhèn)灌胃，術(shù)后進(jìn)行跳臺、水迷宮實驗測試。結(jié)果顯示，模型組小鼠潛伏期縮短、游全程時間延長、錯誤次數(shù)增多；通脈益智膠囊組能使上述指標(biāo)好轉(zhuǎn)，統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。本實驗證實了反復(fù)腦缺血再灌流明顯造成了小鼠學(xué)習(xí)、記憶功能障礙，而通脈益智膠囊可對抗此障礙，提高

2、學(xué)習(xí)、記憶能力。關(guān)鍵詞：通脈益智膠囊； 血管性癡呆； 腦缺血再灌； 學(xué)習(xí)記憶； 小鼠 Effects of TongMaiYiZhi Capsule on Mouse Behaviors under Repeated Cerebral Ischemic Reperfusion ConditionWang HaoYan Xiaoping(China-Japan Friendship Hospital, Beijing 100029)ABSTRACT: 40 mice models with vascular dementia (VD) were divided into 4 groups and

3、 administered respectively with 0.9% NS, TongMaiYiZhi capsule (TMYZ) and hydergine. Observe their behaviors in step-down avoidance test and water-maze test. Results: The mouse's performance in the water labyrinth was obviously affected. The whole-distance-swimming time was prolonged and mistakes

4、 increased. TMYZ can improve the above indice and there was remarkable difference in statistics. It proved that TMYZ could strengthen the mouse in learning and memory.KEY WORDS: TongMaiYiZhi capsule; Vascular dementia; Cerebral ischemic reperfusion; Learning and memory; Mouse血管性癡呆（Vascular Dementia,

5、VD）是由一系列腦血管病變所導(dǎo)致腦組織損害而產(chǎn)生的一種癡呆綜合征，造成患者記憶、認(rèn)知等方面的功能障礙，本病的發(fā)生是以腦血管病為基礎(chǔ)，而腦血管病在我國人口死亡的三大疾病（惡性腫瘤、中風(fēng)、冠心病）中位居第二1，由于VD患者的生活能力下降、給家庭和社會造成了巨大負(fù)擔(dān)，所以對VD的防治工作日益受到醫(yī)學(xué)和社會的重視。我們采用具有補肝益腎、痰瘀并祛、益智醒神作用的中藥通脈益智膠囊，對小鼠雙側(cè)頸總動脈反復(fù)缺血再灌流加降壓法造成智力下降的VD動物模型給予干預(yù)性實驗，其目的旨在進(jìn)一步研究通脈益智膠囊治療血管性癡呆的機理。1材料與方法1.1實驗動物昆明種二級小白鼠40只，體重2022g，雌雄各半，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院

6、實驗動物所提供。1.2藥物通脈益智膠囊：由女貞子、何首烏、丹參、赤芍、石菖蒲、遠(yuǎn)志等組成，中日友好醫(yī)院制藥廠制，批號：971028；喜德鎮(zhèn)：意大利寶利化大藥廠制，中國進(jìn)口藥品注冊編號：X970355。1.3動物模型制作以10%水合氯醛按480mg/kg腹腔注射麻醉，75%酒精消毒頸前皮膚，頸正中切口，分離雙側(cè)頸總動脈，穿線備用。硝普鈉按3.5mg/kg腹腔注射造成低血壓。立即關(guān)閉雙側(cè)頸總動脈10min ,再通10min，如此反復(fù)3次，撤線，縫合，放回籠中飼養(yǎng)。1.4動物分組與給藥小鼠隨機分為4組：假手術(shù)組10只：只剝離雙側(cè)頸總動脈，既不關(guān)閉血管，也不降血壓；模型組10只：造模方法如上述；中藥組

7、10只：造模方法同模型組；西藥組10只：造模方法同模型組。經(jīng)過上述造模，待動物清醒后當(dāng)日即開始給藥。中藥組予通脈益智膠囊0.7g/(kg.d）、西藥組予喜德鎮(zhèn)0.65mg/(kg.d），用生理鹽水稀釋成藥液，灌胃；模型組和假手術(shù)組予生理鹽水灌胃，均每天2次。以上4組均灌胃1個月。1.5跳臺實驗方法跳臺裝置由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院制造，為60cm×12cm×33cm的被動回避反應(yīng)箱。四周用黑色塑料板分隔，箱底為可通電的銅柵，反應(yīng)箱的右后角均放置一直徑和高為4.5cm的絕緣橡皮墊，作為小鼠回避電擊的安全臺。由一調(diào)壓器調(diào)節(jié)電壓、提供交流電。實驗時，將小鼠放入此裝置中適應(yīng)3min ,然后立

8、刻通以40V交流電，動物受電擊后，其正常反應(yīng)是跳到安全臺躲避電擊，記錄通電后其跳至安全臺上的時間，作為反應(yīng)期；觀察5min內(nèi)受電擊的次數(shù)為錯誤次數(shù)。以反應(yīng)期和錯誤次數(shù)作為其學(xué)習(xí)成績。24h后重復(fù)試驗，將小鼠置于安全臺上，即刻通電，觀察5min內(nèi)小鼠從臺上跳至銅柵上的時間為潛伏期，受電擊次數(shù)為錯誤次數(shù)，以潛伏期和錯誤次數(shù)為記憶成績。1.6水迷宮實驗方法水迷宮（提供單位同跳臺）由黑色塑料板制成。水深10cm，水溫(23±1)，分為4個區(qū)：A區(qū)、B區(qū)、C區(qū)和終點區(qū)，終點區(qū)有臺階供小鼠爬出水面。各區(qū)至終點區(qū)為一階段訓(xùn)練，每一階段訓(xùn)練3次。其后記錄小鼠5min內(nèi)從起點A區(qū)游至終點臺階處的時間為

9、游全程時間，其進(jìn)入盲端次數(shù)為錯誤次數(shù)，以此作為學(xué)習(xí)成績。24h后復(fù)測，作為記憶成績。若動物5min內(nèi)未游到終點則以5min計算。2結(jié)果2.1跳臺實驗各組動物分別于術(shù)后10、30d記錄學(xué)習(xí)和記憶成績。模型組與假手術(shù)組相比：前者反應(yīng)期明顯延長，潛伏期明顯縮短，錯誤次數(shù)顯著增加。中藥通脈益智膠囊組與模型組相比：前者反應(yīng)期縮短，潛伏期明顯延長，錯誤次數(shù)明顯減少。喜德鎮(zhèn)組與中藥組相比無差異（P0.05）。表明模型組小鼠的學(xué)習(xí)、記憶功能已造成損害，且隨著術(shù)后時間的延長，損害亦加重。通脈益智膠囊和喜德鎮(zhèn)均能改善學(xué)習(xí)和記憶功能損害，詳見表1。表1跳臺實驗小鼠的學(xué)習(xí)、記憶成績組別學(xué)習(xí)成績記憶成績反應(yīng)期/s錯誤次

10、數(shù)/次潛伏期/s錯誤次數(shù)/次假手術(shù)組(10d)5.20±4.390.76±0.42230.31±98.200.38±0.23假手術(shù)組(30d)4.70±3.300.80±0.79227.10±105.200.40±0.52模型組(10d)19.00±5.62*2.60±0.70*41.7±33.27*2.90±0.88*模型組(30d)50.60±44.33*#3.00±1.05*15.10±16.74*#3.20±0.79*通脈益智膠

11、囊組(10d)5.90±4.120.90±0.99258.00±86.000.30±0.48通脈益智膠囊組(30d)6.80±4.080.80±0.35239.10±85.640.50±0.53喜德鎮(zhèn)組(10d)8.50±5.740.90±0.88220.60±86.210.90±0.88喜德鎮(zhèn)組(30d)7.10±4.860.70±0.52227.40±95.700.50±0.71     注:

12、與假手術(shù)組相比*P0.01?*P0.001;與模型組相比P0.05P0.01P0.001;與模型組(10 d)相比#P0.01#P0.0012.2水迷宮實驗各組動物分別于術(shù)后10、30d檢測學(xué)習(xí)和記憶成績。模型組與假手術(shù)組相比：前者游全程時間和錯誤次數(shù)均明顯增加。中藥通脈益智膠囊組與模型組相比：前者游全程時間、錯入盲端次數(shù)明顯減少。喜德鎮(zhèn)組與通脈益智組相比則無差異（P0.05）。結(jié)果表明：模型組小鼠發(fā)生了嚴(yán)重的空間分辨性障礙，隨術(shù)后時間的延長，其障礙程度愈加嚴(yán)重，詳見表2。表2水迷宮實驗小鼠的學(xué)習(xí)、記憶成績組別學(xué)習(xí)成績記憶成績游全程時間/s 錯誤次數(shù)/次游全程時間/s 錯誤次數(shù)/次假手術(shù)組(1

13、0d)93.20±42.805.88±2.1893.00±42.3510.50±6.85假手術(shù)組(30d)90.12±34.696.10±3.2192.54±52.606.50±3.18模型組(10d)187.40±76.80*20.90±8.86*228.80±65.61*22.50±6.57*模型組(30d)270.70±38.79*#29.40±5.44*#269.80±28.26*#33.10±6.77*#通脈益智膠囊組(10d

14、)104.60±35.619.30±2.9899.30±45.2312.00±5.14通脈益智膠囊組(30d)91.20±4.556.20±2.39102.40±33.906.70±2.41喜德鎮(zhèn)組(10d)100.90±31.209.40±4.99135.00±43.8413.10±4.43喜德鎮(zhèn)組(30d)86.50±42.326.70±2.3693.00±42.308.00±4.52    

15、 注:與假手術(shù)組相比*P0.01*P0.001;與模型組相比P0.05P0.01P0.001;與模型組(10 d)相比#P0.05 #P0.013討論21世紀(jì)將成為重點研究生命科學(xué)的新世紀(jì)，人類大腦功能研究將是醫(yī)學(xué)界面臨的重要課題，其中對于VD的防治與康復(fù)治療亦是重點研究之一。由于記憶力衰退及計算力、判斷力、定向力、理解力等不同程度的改變等精神癥狀是構(gòu)成癡呆的主要癥狀，其中記憶力衰退是早期的核心癥狀。因反復(fù)腦缺血是VD發(fā)生發(fā)展的重要病因，所以本實驗選擇了腦缺血反復(fù)再灌流加降壓法造成的小鼠行為學(xué)改變的智能障礙模型，觀察中醫(yī)藥對其干預(yù)的療效。該模型具有易于肌肉和血管分離、出血少、操作簡便、造模時間

16、短、死亡率低、生存期長等優(yōu)點，術(shù)后以跳臺試驗和水迷宮試驗為定量測定動物行為學(xué)改變的重要手段，前者又稱一次性被動回避反射法，后者又稱方向辨別性實驗2，是動物行為學(xué)研究的經(jīng)典方法。實驗中我們采用了閆小萍教授在臨床上多年治療VD的經(jīng)驗而總結(jié)出的具有補肝益腎、痰瘀并祛、益智醒神等功效的通脈益智膠囊，治療小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙，并與西藥喜德鎮(zhèn)對照。方中女貞子、何首烏等補肝益腎、填精補髓、有滋陰強壯之力為君藥；丹參、赤芍等活血化瘀為臣藥；石菖蒲、遠(yuǎn)志等芳香化濁、祛痰利竅為佐藥；使以漏蘆清熱通竅疏經(jīng)，共奏補肝益腎、化瘀祛痰、益智醒神作用。一方面，補肝益腎則精足髓充血旺，繼而腦健神明；另一方面，化瘀祛痰則經(jīng)絡(luò)暢通無阻，五臟精華之血、六腑清陽之氣得以上聚于腦，竅絡(luò)升降有常，脈絡(luò)疏通有度，使心神聰明，腦神旺健，記憶充足。通脈益智膠囊通過此兩方面的調(diào)節(jié)，使內(nèi)環(huán)境平衡，痰瘀消解，神明腦健。從實驗結(jié)果可看出：跳臺實驗中，模型組反應(yīng)期延長、錯誤次數(shù)增多、潛伏期明顯縮短，通脈益智膠囊和喜德鎮(zhèn)治療組可明顯改善上述指標(biāo)；水迷宮試驗中，模型組的游全程時間延長、錯誤次數(shù)增多，