1、    肢體缺血再灌流致腸損傷的組織學(xué)觀察        【摘要】目的：通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察肢體缺血再灌流損傷對(duì)腸粘膜形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)的影響。方法：110只Wistar大鼠隨機(jī)分成三個(gè)組：缺血2h，缺血3h和對(duì)照組。缺血、再灌注1、2、3和24h取材行光鏡觀察和組織學(xué)評(píng)估。結(jié)果：肢體缺血和再灌流期間，大腸和小腸粘膜固有層毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血、多核白細(xì)胞浸潤(rùn)，粘膜厚度和隱窩深度明顯減少(P<0.01)。小腸絨毛高度相對(duì)增加，隱窩細(xì)胞變性、壞死。結(jié)論：肢體缺血再灌流可引起腸結(jié)構(gòu)和功能改

2、變。【關(guān)鍵詞】缺血再灌流腸損傷組織形態(tài)學(xué) Histological observation of the intestinal structure after lower limb ischemic reperfusion injuryChen Jianchang，Wang lenong，Shi Zhenman，et al（Department of Orthopaedics，Ulumqi General Hospital of Lanzhou Command，Ulumqi 830000）【Abstract】 Objective：An experimental study to observe

3、 pathological changes of the intestinal structure after lower limb ischemic reperfusion injuryMethods： One hundred and ten rats were divided into control group，ischemia 2 hours and ischemia 3 hours groupsThe histological assessment of the bowel were undertaken at o，1，2，3 and 24 hours after reperfusi

4、onResults：Evidences of  microvascular congestion，massive aggregation of polymorphonuclear leukocytes within the lamina propria were observed in experimental groups at different timesBowel mucosal thickness and crypt depth decreased significantly，while the villus height of small intestine increa

5、sed significantly comparing to the control groupAdditionally，degeneration and necrosis of crypt cells were found in experimental groupsConclusion： Reperfusion of acutely ischemic extremities may produce structural and functional changes in intestine【Key Words】Ischemic reperfusion Intestine injury Hi

6、stomorphology正常腸腔內(nèi)含有多種細(xì)菌和內(nèi)毒素，其粘膜結(jié)構(gòu)的完整對(duì)細(xì)菌和毒素的入侵起著屏障作用，許多研究結(jié)果表明膿毒血癥和多器官功能不全與腸屏障功能破壞有關(guān)1-2，最近國(guó)外有人報(bào)告肢體缺血再灌流損傷可導(dǎo)致腸粘膜結(jié)構(gòu)和功能改變3，但國(guó)內(nèi)尚無報(bào)道，為此我們用Wistar大鼠作為動(dòng)物模型，觀察了肢體不同缺血時(shí)間再灌流后腸粘膜結(jié)構(gòu)和多核白細(xì)胞(PMN)聚集情況。1材料與方法1.1動(dòng)物與分組健康Wistar大鼠110只，體重350450g，雌雄不限，按缺血時(shí)間長(zhǎng)短分為對(duì)照、缺血2h、缺血3h三個(gè)組，對(duì)照組10只，其余每組50只。1.2動(dòng)物模型術(shù)前12h禁食，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%戊巴比妥納(40mgk

7、g)腹腔麻醉，對(duì)照組每只麻醉6h，不做其它任何處理，實(shí)驗(yàn)組麻醉后在后肢大腿中部用橡皮止血帶環(huán)扎，制成雙側(cè)后肢缺血模型，達(dá)缺血時(shí)間后撤去止血帶，恢復(fù)肢體血流，繼續(xù)觀察和飼養(yǎng)。1.3取材與觀察對(duì)照組麻醉6h，實(shí)驗(yàn)組于缺血、再灌流1、2、3和24h用頸椎脫位法每批各處死10只動(dòng)物。在距回盲部0.5cm的回腸末端和結(jié)腸近端分別取回腸和結(jié)腸各1cm，縱行剪開，生理鹽水沖洗，泡入10%中性福爾馬林48h以上，脫水，包埋，5m切片，HE染色，光鏡觀察。低倍鏡下(100×)測(cè)量小腸全層粘膜厚度、絨毛高度、隱窩深度，以及大腸粘膜厚度和隱窩深度，油鏡計(jì)數(shù)粘膜固有層每個(gè)高倍(1000×)視野多核

8、白細(xì)胞(PMN)數(shù)。每個(gè)鼠大腸和小腸分別隨機(jī)測(cè)10個(gè)值，取平均值(x±s)作統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)處理。2結(jié)果2.1組織形態(tài)學(xué)觀察缺血期間小腸粘膜基底膜水腫，隱窩細(xì)胞變性，絨毛血管擴(kuò)張、充血、多核白細(xì)胞增多，隱窩變淺，絨毛相對(duì)變長(zhǎng)。再灌流后這種改變更加明顯，隱窩細(xì)胞變性、壞死、絨毛頂端細(xì)胞偶見有變性壞死(12)。大腸粘膜缺血期和再灌流期，僅見血管擴(kuò)張，充血和少量多核白細(xì)胞浸潤(rùn)，未見細(xì)胞變性、壞死。     1肢體缺血3h小腸粘膜結(jié)構(gòu)變化10×10     2肢體缺血3h再灌注24h小腸粘膜結(jié)構(gòu)變化10&#

9、215;10     2.2粘膜成分厚度測(cè)量實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組腸粘膜成分厚度比較有明顯差別(P0.01)。實(shí)驗(yàn)組缺血和再灌流期間，小腸粘膜厚度和隱窩深度較對(duì)照組明顯減少，絨毛變細(xì)，其高度相對(duì)增加，這種變化在再灌流期更明顯，其中再灌流24h改變最明顯。實(shí)驗(yàn)組間比較差別不明顯。大腸粘膜厚度和隱窩深度也較對(duì)照組明顯減少。2.3粘膜固有層PMN計(jì)數(shù)高倍顯微鏡下，粘膜固有層多核白細(xì)胞(PMN)計(jì)數(shù)，實(shí)驗(yàn)組大腸和小腸均明顯多于對(duì)照組(P0.01)，缺血3h組多于缺血2h組(P0.01)，小腸粘膜固有層多形核白細(xì)胞比大腸聚集明顯要多。 3討論腸粘膜損傷的評(píng)價(jià)，以往多采用分

10、級(jí)或計(jì)分的辦法來評(píng)估4，5，本研究在光鏡下定性、定量研究分析了腸粘膜各成分形態(tài)和結(jié)構(gòu)變化，較傳統(tǒng)的形態(tài)評(píng)估方法更加敏感和可靠，尤其是在形態(tài)學(xué)改變不明顯時(shí)，這種定量觀察的方法，意義則更大。本研究發(fā)現(xiàn)肢體缺血和再灌流后均可見粘膜基底膜水腫，小腸粘膜厚度變薄，隱窩變淺，絨毛變細(xì)且相對(duì)變長(zhǎng)，固有層血管擴(kuò)張、充血、多核白細(xì)胞浸潤(rùn)，隱窩細(xì)胞變性壞死明顯重于絨毛細(xì)胞。大腸粘膜稍有變薄，有血管擴(kuò)張，充血和少量多核白細(xì)胞浸潤(rùn)，但無細(xì)胞變性壞死。這些病變的規(guī)律類似于肢體自身的缺血再灌流損傷，腸粘膜的損傷也是再灌流期重于缺血期。大腸與小腸比較，小腸相對(duì)更易受損傷。Yassin3研究發(fā)現(xiàn)病變主要集中在小腸，而大腸無明

11、顯變化，我們的觀察除了小腸明顯的粘膜結(jié)構(gòu)變化外，實(shí)驗(yàn)組大腸結(jié)構(gòu)也有較明顯改變，但比起小腸來說則相對(duì)輕得多，無明顯細(xì)胞變性和壞死。與腸局部缺血再灌流損傷比較，其損傷部位有明顯差別，腸缺血再灌流損傷病變主要在絨毛，病變一般從絨毛頂部向基底部發(fā)展，不累及或很少累及隱窩6，本研究發(fā)現(xiàn)病變主要在隱窩部，而絨毛則受累較輕微。有關(guān)肢體缺血再灌流后遠(yuǎn)隔器官損傷的詳細(xì)機(jī)制還不十分清楚。許多作者7認(rèn)為與活性氧自由基有關(guān)，肢體缺血再灌流后，肢體恢復(fù)血流，大量氧在黃嘌呤氧化酶作用下產(chǎn)生自由基，除損傷肢體本身外，通過血流還可轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)隔組織器官，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，造成肢體以外一些敏感遠(yuǎn)隔器官的損傷。在腸壁小腸比大腸易感

12、性高，黃嘌呤氧化酶濃度也高于大腸，因此其損傷也明顯重于大腸。另外中性白細(xì)胞被活化，也是造成遠(yuǎn)隔器官損傷的另一原因8，我們的研究也發(fā)現(xiàn)粘膜固有層中性白細(xì)胞明顯增加，也證明了這一點(diǎn)。肢體缺血刺激PMN活化，肢體恢復(fù)血流后，活化中性白細(xì)胞可通過血流轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)隔器官，引發(fā)“呼吸爆發(fā)”，加上自由基作用，遠(yuǎn)隔器官中大量中性白細(xì)胞被激活，產(chǎn)生更多的自由基，并釋放顆粒物質(zhì)，自由基引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，釋放顆粒中的蛋白酶消化和分解彈性蛋白和膠原蛋白，造成組織損傷和血管通透性增加。另外還可能與自由基和前列腺素等激活肥大細(xì)胞引起腸粘膜損傷有關(guān)。作者單位：陳建常（830000烏魯木齊，蘭州軍區(qū)烏魯木齊總醫(yī)院全軍骨科中心）

13、王樂農(nóng)（830000烏魯木齊，蘭州軍區(qū)烏魯木齊總醫(yī)院全軍骨科中心）史振滿（830000烏魯木齊，蘭州軍區(qū)烏魯木齊總醫(yī)院全軍骨科中心）盧開柏（830000烏魯木齊，蘭州軍區(qū)烏魯木齊總醫(yī)院全軍骨科中心）參考文獻(xiàn)1，Levoyer T，Cioffi WG Jr，Pratt L，et alAlteration intestinal permeability after thermal injuryArch Surg，1992，127：262，Pape HC，Dwenger A，Regel G，et alIncreased gut permeability after multiple traumaBr

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15、scopy studyInt J Exp Pathol，1992，73：1615，Leung FW，Su Kc，Passaro E Jr，et alRegional differences in gut  blood flow and mucosal damage in response to ischemia and reperfusionAm J Physiol，1992，263：G3016，Parks DA，Granger DNContribution of ischemia and reperfusion to mucosal lesion formationAm J physiol，1986，250：G7497，Soong CV，Young IS，Lightbody JH，et alReduction of fre