1、word免疫組織化學(xué)抗體試劑與檢測試劑盒注冊申報資料的根本要求2013-01-0401:48免疫組織化學(xué)抗體試劑與檢測試劑是指一類利用免疫學(xué)原理結(jié)合酶催化底物顯色的化學(xué)方法，檢測組織標本中抗原的檢測試劑。此類試劑為待測抗原特異性單克隆或多克隆抗體，或抗體與顯色系統(tǒng)、對照試劑、質(zhì)控片與其它輔助試劑一同包裝成試劑盒形式的檢測試劑盒。該類產(chǎn)品檢測項目繁多，應(yīng)用廣泛，檢測過程為多步驟檢測，影響因素多，在臨床上主要用于檢測細胞的特異性抗原以確定細胞的表型。該類產(chǎn)品的預(yù)期用途與診斷、鑒別診斷、預(yù)后判斷、指導(dǎo)用藥相關(guān)，按照三類體外診斷試劑管理。基于該類產(chǎn)品臨床應(yīng)用的重要性與特殊性，根據(jù)目前注冊申報工作的需要

2、、依據(jù)體外診斷試劑注冊管理方法試行、體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原如此以與體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原如此的相關(guān)規(guī)定，結(jié)合臨床與病理檢測中的應(yīng)用實踐、臨床病理專家和生產(chǎn)企業(yè)的建議，現(xiàn)對免疫組織化學(xué)抗體試劑與檢測試劑盒注冊申報資料提出以下根本要求對于本要求未提與的局部，申請人均應(yīng)依據(jù)相關(guān)法規(guī)要求提交注冊申報資料。本要求是在目前科學(xué)技術(shù)認識水平與現(xiàn)階段免疫組化類產(chǎn)品技術(shù)審評根底上形成的，審評人員會密切關(guān)注相關(guān)技術(shù)的最新進展，隨著認識的提高將適時調(diào)整。由于該類產(chǎn)品種類繁多，根本要求不能涵蓋所有該類產(chǎn)品的特殊情況，如某些要求不適用，申請人也可采用其他方式證明產(chǎn)品的技術(shù)性能，建議申請人對此進展詳細說明，

3、并提交相應(yīng)的性能驗證資料。依據(jù)免疫組化不同標志物的臨床應(yīng)用情況，將其分為二個大類：A類：Her2/Neu、ERPRALKCD117c-met、CD20EGF噂與臨床治療、用藥密切相關(guān)的標志物；其他全新標記物，具有新的臨床意義。B類：臨床使用多個指標綜合診治的標志物之一，與輔助診斷、鑒別診斷、病情監(jiān)測、預(yù)后相關(guān)標志物：如：Ki67、CK5/6等。一、產(chǎn)品說明書1 .【產(chǎn)品名稱】：單獨的第一抗體試劑通用名稱建議采取以下命名方式：待測抗原特異性抗體+試劑免疫組織化學(xué)法?？贵w與顯色系統(tǒng)、對照試劑、質(zhì)控片與其它輔助試劑一同包裝成試劑盒形式的檢測試劑盒通用名稱建議采用以下命名方式：待測抗原+檢測試劑盒免疫

4、組織化學(xué)法。如：雌激素受體抗體試劑免疫組織化學(xué)法、孕酮受體檢測試劑盒免疫組織化學(xué)法。2 .【預(yù)期用途】：應(yīng)明確檢測的樣本類型冰凍和/或石蠟包埋等；明確抗體的類型、克隆號、陽性著色特點；明確臨床用途診斷、鑒別診斷、預(yù)后判斷、指導(dǎo)用藥；指明“對任何陽性或陰性結(jié)果的解讀，應(yīng)由病理醫(yī)生結(jié)合病理形態(tài)學(xué)、臨床表現(xiàn)與其它檢測方法進展，不作為單獨的診斷指標。3 .【樣本要求】：應(yīng)明確對適用樣本的取材、固定、包埋與穩(wěn)定性樣本處理前、后的儲存條件與有效期的具體要求；對于骨組織進展脫鈣處理等要求。此局部內(nèi)容可參考國內(nèi)、外相關(guān)標準操作性文件內(nèi)容進展編寫。4 .【檢測方法】：應(yīng)注明標準操作程序手工和/或自動化，明確推薦

5、的染色前處理步驟、抗原修復(fù)方式、各步驟處理時間、所用緩沖液的配制與pH等內(nèi)容；如果申報產(chǎn)品只包含第一抗體，應(yīng)注明配套使用的第二抗體與顯色系統(tǒng)的詳細信息；如果抗體為濃縮型抗體，還需明確推薦抗體工作液的濃度、稀釋液的詳細信息；應(yīng)明確詳細的“質(zhì)量控制方法，為用戶提供可作為內(nèi)部陽性和陰性對照的組織名稱。5 .【檢測結(jié)果的解釋】：配合彩色圖片對結(jié)果判讀進展說明，明確陽性著色特點，包括顏色與著色部位。對可能出現(xiàn)的假陰性、假陽性情況進展說明，并明確提出出現(xiàn)該情況后的處理方法。彩色圖片應(yīng)至少包含，陽性與陰性質(zhì)控片結(jié)果圖例；對于A類產(chǎn)品，應(yīng)包含不同級別如適用陽性與陰性質(zhì)控片的結(jié)果圖例。6 .【參考值參考X圍】：

6、企業(yè)可根據(jù)適用情況進展編寫；如不適用，無需編寫。另：由于病理產(chǎn)品不存在“檢驗說法，建議申請人，將說明書各項標題中，所有【“檢驗】修改為【“檢測】。二、主要原材料研究資料應(yīng)包含以下內(nèi)容：1 .抗體的免疫源資料。2 .抗原的特性。3 .詳細的抗體制備資料，包括抗體的克隆選擇、抗體的純化。4 .抗體性質(zhì)鑒定資料，資料應(yīng)包含對抗體類型、特異性、抗體識別表位、親和力與效價的測定。申請人可通過雙向瓊脂擴散法、ELISAwesternblot等方法進展研究。5 .企業(yè)內(nèi)部質(zhì)控片與試劑盒配套質(zhì)控片如適用的研究資料。建議在試劑盒中，設(shè)置弱陽性質(zhì)控品如適用，可更加靈敏的監(jiān)控試驗過程中可能出現(xiàn)的錯誤結(jié)果。6 .封閉

7、液的研究資料，封閉液應(yīng)能夠封閉非特異結(jié)合、內(nèi)源性酶活性或內(nèi)源性生物素等。三、反響體系研究資料由于染色溫度、時間、抗原修復(fù)與否、修復(fù)方式等實驗條件對于染色結(jié)果有較大影響，對于檢測過程各步驟的實驗條件，均應(yīng)有充分的試驗驗證資料支持。四、分析性能評估資料1 .應(yīng)至少包含免疫反響性與精細度研究資料。1免疫反響性：正常組織：對30種正常人體組織見表1，每種組織類型不少于3例，進展特異性評價，同時對著色位置與染色特點進展描述。非正常組織：對相關(guān)良性、惡性病變組織進展特異性評價，每種組織類型不少于3例。2精細度：在進展精細度評價時，除申報試劑本身的影響外，還應(yīng)對檢測時間日內(nèi)/日間、批次三個批次、適用機型如適

8、用等要素進展相關(guān)的驗證。2 .對于半定量的免疫組化檢測試劑，應(yīng)對不同強度分別進展研究。如有手工和自動兩種修復(fù)、染色方式，還應(yīng)對兩種方式之間的精細度進展評價。3 .對于已廣泛應(yīng)用的與治療用藥與預(yù)后相關(guān)的病理產(chǎn)品，應(yīng)提供充分的文獻支持資料，論證標記物與療效、生存率之間的關(guān)系。支持資料可以為文獻資料或?qū)嶒炇?多中心臨床試驗資料。對于新病理產(chǎn)品且預(yù)期用途與治療用藥與預(yù)后相關(guān)，支持資料應(yīng)包括文獻資料與實驗室/多中心臨床試驗資料。4 .建議企業(yè)積極參加國內(nèi)衛(wèi)生部病理質(zhì)控評價中心、各省直轄市臨床病理質(zhì)控中心等、國際NordiQGUKNEQUASCA商質(zhì)控機構(gòu)的質(zhì)控活動，并提交質(zhì)控結(jié)果報告如有。五、穩(wěn)定性研究

9、資料由于抗體開瓶/稀釋后的穩(wěn)定性根據(jù)不同的貯存條件有較大變化，且開瓶使用后效價變化較快，直接影響實驗結(jié)果，因此，申請人除貨架穩(wěn)定性外，還應(yīng)提交開瓶、機載穩(wěn)定性研究資料。對于濃縮型的抗體，還應(yīng)提交稀釋后抗體工作液的穩(wěn)定性研究資料。六、參考值X圍確定資料對于上述A類產(chǎn)品中局部陽性級別與治療用藥相關(guān)的標記物，應(yīng)提交染色特點的研究資料與參考值確定資料。由于此類免疫組化診斷標記物的參考值，隨研究/應(yīng)用的進展不斷變化，參考值確定資料可提交參考文獻資料。對于上述其它A類與B類產(chǎn)品，僅需提交染色特點的研究資料。七、臨床試驗資料1 .臨床試驗機構(gòu)：該類產(chǎn)品臨床試驗應(yīng)在不少于三家省級醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)中完成，應(yīng)在通過病

10、理權(quán)威機構(gòu)認證的實驗室進展如有,2 .臨床樣本：1樣本選?。阂蛎庖呓M化實驗在臨床上作為HE染色的后續(xù)步驟，應(yīng)選擇已有HE染色病理診斷的石蠟包埋組織和/或冰凍樣本作為入選樣本，該診斷應(yīng)在原始數(shù)據(jù)記錄表中予以表現(xiàn)，必要時，其結(jié)果應(yīng)在臨床總報告中列表進展總結(jié)。2樣本例數(shù)：對于上述分類A類產(chǎn)品，臨床總樣本數(shù)至少應(yīng)滿足1000例，陽性樣本例數(shù)不應(yīng)少于300例；上述B類產(chǎn)品，臨床總樣本數(shù)至少應(yīng)滿足500例，陽性樣本例數(shù)不應(yīng)少于150例。如適用冰凍樣本，也需進展臨床試驗，且至少滿足冰凍樣本總例數(shù)不少于200例，其中應(yīng)包含不少于60例陽性樣本。對于發(fā)病率低的病種，臨床試驗陽性樣本可適當(dāng)減少。3樣本類型：應(yīng)包括

11、說明書預(yù)期用途聲稱的陽性樣本。對于上述A類標記物，不同臨床適應(yīng)癥均應(yīng)涉與，每種適應(yīng)癥陽性樣本不應(yīng)少于100例，總陽性樣本例數(shù)不應(yīng)少于300例；對于B類標記物，要求陽性病例在說明書預(yù)期用途聲稱的表達組織中均應(yīng)有所涉與，每種組織類型陽性樣本不應(yīng)少于30例。陰性樣本除了癌旁正常對照外，還應(yīng)包括易混淆的良、惡性疾病病例等。注：對于適用樣本類型為石蠟包埋切片的檢測試劑，臨床試驗樣本也可使用組織芯片進展。3 .對照試劑的選擇：由于該類試劑目前在境內(nèi)注冊較少，建議臨床試驗選擇公認較好的試劑進展比對，如：該抗體克隆經(jīng)過國際權(quán)威機構(gòu)如NordiQC等年度評分成績較好。與對照試劑不符的樣本應(yīng)使用最終臨床診斷結(jié)果進

12、展確認。4 .結(jié)果報告：1原始數(shù)據(jù)：1應(yīng)提交CRF匯總表，內(nèi)容應(yīng)包括：性別、年齡、被考核試劑檢測結(jié)果、對照試劑檢測結(jié)果、HE染色結(jié)果等。2應(yīng)提交入選樣本染色代表性彩色圖片。2統(tǒng)計：大多數(shù)免疫組化標記物的臨床應(yīng)用為定性類產(chǎn)品，一般應(yīng)使用四格表進展統(tǒng)計，報告敏感性、特異性或陽性符合率、陰性符合率等；對于指導(dǎo)用藥的定量、半定量產(chǎn)品而言，除了進展整體數(shù)據(jù)線性相關(guān)分析外，還應(yīng)依據(jù)結(jié)果判定方法進展分級統(tǒng)計。各結(jié)果應(yīng)報告95嘴信區(qū)間并進展統(tǒng)計檢驗。5 .質(zhì)控：由于免疫組化實驗前處理步驟較多，導(dǎo)致判讀結(jié)果可能會在實驗人員間、實驗室間產(chǎn)生差異。為了客觀單一評價試劑性能，盡量減少這種人為差異對最終結(jié)果造成的影響，

13、臨床試驗開始前，各臨床機構(gòu)應(yīng)進展判讀一致性試驗與統(tǒng)一的質(zhì)量控制，統(tǒng)一操作步驟，確保同樣的染色片在不同醫(yī)院的判讀結(jié)果保持一致。該預(yù)評估內(nèi)容，實現(xiàn)方法、結(jié)果等應(yīng)在臨床報告中表現(xiàn)。6 .其他：除上述要求外：1如該抗體試劑適用不同檢測體系，如配合使用的第二抗體、顯色劑等，如此不同檢測體系包括不同組合均需在一種檢測體系滿足臨床試驗最低例數(shù)要求的前提下，增加的另外檢測體系應(yīng)再提交臨床樣本至少各200例。2如抗體試劑包含濃縮型與即用型、手工操作與上機操作等不同劑型，在一種劑型滿足臨床試驗最低例數(shù)要求的前提下，另一種劑型，需提交臨床樣本至少200例。以上1、2需在不少于3家臨床試驗機構(gòu)完成，且選擇的臨床樣本應(yīng)包含一定比例的陽性樣本。表1:正常組織列表中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦、大腦灰質(zhì)與白質(zhì)神經(jīng)元、膠質(zhì)等腦、小腦內(nèi)分泌系統(tǒng)腎上腺皮質(zhì)與髓質(zhì)卵巢胰腺胰島與外分泌胰腺甲狀旁腺垂體腺垂體與神經(jīng)垂體睪丸甲狀腺濾泡上皮、濾泡:旁細胞、膠體等乳腺乳腺乳腺小葉、乳腺管、肌