1、實(shí)驗(yàn)四玉米須中黃酮的提取、鑒別與含量測定（設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)）【前言】：本文以玉米須為原料,并以60%的乙醇為提取劑,分別采用常規(guī)提取法,超聲提取法和微波提取法對玉米須中所含的黃酮類化合物進(jìn)行提取,利用HCl-Zn粉氧化還原顯色反應(yīng)和鋁鹽絡(luò)合顯色反應(yīng),鑒定了黃酮的存在,以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸成線性方程,試樣最大吸光波長為510nm,在此波長下,利用分光光度計(jì),采用NaNO2-AlCl3比色法進(jìn)行比色,測定玉米須中總黃酮的含量,測得常規(guī)、超聲、微波三種提取方法的黃酮得率分別為1.781%、1.738%、1.775%,并對各工藝方法進(jìn)行分析,確定在不同要求下,黃酮的最佳提取工藝條件,為黃酮的工業(yè)

2、化提取提供一定的理論依據(jù).目的為充分利用玉米須植物資源，避免資源的浪費(fèi)，探討玉米須總黃酮的提取及鑒別方法。方法采用純物理的工藝流程過程和分光光度法從玉米須中提取黃酮類物質(zhì)，對所提取的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果測得樣品中總黃酮的含量C=6.45%，回收率為97.9%，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論該方法采用全物理過程，無任何化學(xué)變化及污染，是提取玉米須黃酮類物質(zhì)的有效途徑?！娟P(guān)鍵詞】：玉米須，黃酮，分離提取，含量測定，吸光度一、目的與要求通過對玉米須中黃酮和多糖的分步提取、鑒別和含量測定，掌握天然產(chǎn)物的提取、鑒別和含量測定的方法。二、基本原理黃酮類化合物多為結(jié)晶性固體，少數(shù)(如黃酮苷類為無定形粉末。黃酮

3、類化合物多為黃色，其顏色的深淺與其是否具有交叉共扼體系、助色團(tuán)的多少有關(guān)，一般具有交叉共軛體系的黃酮類化合物(如黃酮、黃酮醇、查耳酮多呈黃色或顏色較深，而不含有交叉共軛體系的黃酮類化合物(如二氫黃酮、二氫查耳酮、異黃酮多為無色或顏色較淺。黃酮類化合物在紫外光下一般具有熒光，熒光的顏色與分子的結(jié)構(gòu)有關(guān)。黃酮類化合物的溶解度因其結(jié)構(gòu)及存在的狀態(tài)(苷或苷元、單糖苷、雙糖苷或三糖苷不同而有很大的差異。一般的游離黃酮苷元難溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙腈等有機(jī)溶劑及稀堿中。黃酮類化合物糖苷化后，水溶性增加，脂溶性降低，一般易溶于熱水、甲醇、乙醇及稀堿溶液，而難溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚等親

4、脂性有機(jī)溶劑。游離黃酮和黃酮苷一般都含酚羥基，故都可溶于堿中，加酸后又沉淀出來，可利用此性質(zhì)提取、分離黃酮類化合物。玉米須中含黃酮類物質(zhì)，能清除羥基和DPPH自由基，有調(diào)節(jié)小鼠脂質(zhì)代謝、抗衰老和抗疲勞作用。研究結(jié)果表明低濃度的玉米須提取物也有很好的抗氧化能力。三、儀器和試劑1.儀器圓底燒瓶、冷凝管燒杯2只，10mL、50mL量筒各1個(gè)，濾布，玻璃棒，恒溫槽，紫外分光光度計(jì)，容量瓶。2.試劑玉米須1.0g（干燥至恒重，過40目篩，精密稱?。┮掖肌⒄麴s水、濃鹽酸、三氯化鋁、鋅粉。四、實(shí)驗(yàn)步驟1g玉米須放入150ml的圓底燒瓶中，以30倍水量、恒溫水浴鍋加熱至90，開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)1h，離心3min（

5、3500轉(zhuǎn)/min），上清液抽濾，1.提取黃酮苷：取玉米須柱頭1.0g放入圓底燒瓶中，以130為料液比，用60%乙醇于80水浴內(nèi)提取45min，倒出；加入10mL溶劑提取30min，共提取2次，合并兩次提取液置50mL容量瓶中定容后，每次使用過濾。2.鑒別鹽酸一鎂（或鋅）粉試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液1mL，加放少量鎂粉（或鋅粉），然后加濃鹽酸45滴，置沸水浴中加熱23分鐘，再加入少量碳酸鈉，觀察顏色。如出現(xiàn)紅色示有游離黃酮類或黃酮甙?？瞻讓?shí)驗(yàn)：以同法不加鎂或粉做一對照。如兩管都顯紅色則有花色素存在。如繼續(xù)加碳酸試液使成堿笥即變成紫色雙轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，即證明含花色素。黃酮類的乙醇溶液，在鹽酸存在的情況下

6、，能被鎂粉還原，生成花色甙元而呈現(xiàn)紅色或紫色反應(yīng)（個(gè)別為淡黃色、橙色、紫色或藍(lán)色）。這是由于酮類化合物分子中含有一個(gè)堿性氧原子，致能溶于稀酸中被還原成帶四價(jià)的氧原子即鋅鹽。本法是鑒別黃酮類的一個(gè)反應(yīng)。但花色素本身在酸性下（不需加鎂粉）呈紅色，應(yīng)加以區(qū)別。3.含量測定方法黃酮含量測定：精密量取1mL黃酮濾液于10mL容量瓶中，精密加入0.1moL/LALCL3甲醇顯色劑溶液，搖勻，定容，放置10min?？瞻讓?shí)驗(yàn)：以60%乙醇為空白，測定吸光度，代入上述回歸方程中，計(jì)算出百分含量。Y=29.302X+0.0213相關(guān)系數(shù)：r=0.9999。黃酮在4ug-20ug/mL范圍內(nèi),吸收度和糖含量呈良好的

7、線性關(guān)系。五、實(shí)驗(yàn)記錄黃酮的鑒別：樣本液顯橙色，對照顏色略淺，加入碳酸鈉后，容易未變藍(lán)，說明不含色素。含量測定：六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及產(chǎn)率計(jì)算實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：在272nm 以60%乙醇為空白測得吸光度Y=0.577根據(jù)回歸方程Y=29.302X+0.0213將Y=0.577 帶入公式可得X=0.0189645757968mg/ml玉米須中的黃酮經(jīng)過抽濾后加入60%乙醇定容于50ml 容量瓶，后抽取1ml 定容于10ml 容量瓶里m = X *10* 50 =9.482287 mg質(zhì)量分?jǐn)?shù)=m黃銅/m玉米須*100%=9.482287/1=0.95%七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論：1、黃酮提取率：0.95%2、試劑的誤差

8、分析（1）在抽濾過程中有部分黃酮類物質(zhì)殘留在玉米須濾渣中；（2）在過濾時(shí)有部分黃酮類物質(zhì)殘留在濾紙及漏斗壁上；（3）轉(zhuǎn)移溶液時(shí)，由于有溶液殘留造成誤差；（4）用玻璃棒攪拌溶液，使溶液 濺出，產(chǎn)生誤差；七、實(shí)驗(yàn)討論與心得1、討論a、改變?nèi)軇゜、改變玉米須及溶劑的料液比c、改變溫度d、先定容與后定容2、心得a、在料液比為1:30，黃酮提取溫度為80時(shí)，提取率最高八、注意事項(xiàng)1、玉米須完全浸泡2、定容、移液準(zhǔn)確3、正確操作紫外儀器，比色皿的取放九、參考文獻(xiàn)1、首都師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）2009年4期玉米須中總黃酮的提取及含量測定傅樺，薄楠楠2、江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)2007年9期青玉米須中黃酮成分提取工藝研究，閆征，李春陽3、黃曄,龍光錦,姜林華,等.玉米須總黃酮的提取及鑒別J.時(shí)珍國醫(yī)國藥,2006,17(6:1084、玉米須化學(xué)成分、藥理作用及其應(yīng)用研究進(jìn)展中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教教育2007年02期5、唐傳核.植物功能性的食品M.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004：1216、李冬菊.山楂葉總黃酮的提取及鑒別J.遼寧中醫(yī)雜志，2003，30（7）：5787、曹緯國，劉志勤，邵云，等.黃酮類化合物藥理作用研究進(jìn)展J.西北植物學(xué)報(bào)，2003，23（12）：2241.8、姜國芳，謝宗波，樂長高.銀杏葉黃酮類化合物的研究進(jìn)展J.時(shí)珍國醫(yī)國藥