1、地塞米松磷酸鈉溫度敏感原位凝膠的藥物釋放行為考察李欣宇1 朱照靜2 吳青3 李艷3(1.重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院藥劑科 2.重慶醫(yī)藥高等?？茖W校 3.重慶醫(yī)科大學藥學院藥劑學教研室)摘要：目的 制備地塞米松磷酸鈉（DSP）溫度敏感原位凝膠，考察DSP的體外釋放行為及影響釋放行為因素。方法 以PluronicF127和F68為材料制備凝膠，在4制備F127 22.5、F68 2.5濃度的DSP溫度敏感原位凝膠；采用恒定升溫法測定膠凝溫度；采用無膜溶出法和HPLC法測定DSP的體外釋放行為；考察釋放介質接觸面積、釋放介質體積、釋放介質pH及振蕩頻率對DSP體外釋放行為的影響。結果 DSP溫度敏感原

2、位凝膠的膠凝溫度30.0，釋放介質的接觸面積、釋放介質的體積、振蕩頻率對藥物的釋放速率有明顯影響，釋放介質的pH對藥釋放速率無顯著影響。DSP溫度敏感原位凝膠的釋放行為遵循零級動力學方程。結論 DSP溫度敏感原位凝膠的緩釋效果良好，凝膠溶蝕是控制藥物釋放的主要因素。關鍵詞：泊洛沙姆，溫度敏感原位凝膠，地塞米松磷酸鈉，零級動力學中圖分類號R934.4 文獻標識碼 A 文章編號In vitro release of dexamethasone sodium phosphate from thermosensitive in situ gelLI Xin-yu1 ZHU Zhao-jing2 WU

3、Qing3 LI Yan3(1.The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University 2.Chongqing Medical and Pharmaceutical College 3.College of pharmacy, Chongqing medical University)Abstract: Objective To prepare poloxamer thermosensitive in situ gel, and to investigate drug release behavior of dexametha

4、sone sodium phosphate as well as its influencing factors. Methods: 22.5% PluronicF127 and 2.5% F68 were used to prepare thermosensitive in situ gel at 4 and its gelation temperature was measured. Membrane-free method and HPLC were used to determine DSP release, and the impact of gel area contacting

5、with release medium, volume and pH value of release medium as well as oscillation frequency on drug release were invistigated. Results: Gelation temperature of the DSP poloxamer gel was 30.Accumulative drug release was influenced by gel area contacting with release medium，the volume of release mediu

6、m and oscillation requency. But the pH value of the release medium had almost no impact on the drug release. DSP released from the gel followed the zero-order kinetics. Conclusion: sustained release of the drug from poloxamer thermosensitive in situ gel is desirable, and drug released was mainly inf

7、luence by gel erosion.Key words: poloxamer, in situ gel,dexamethasone sodium phosphate, zero-order kinetics溫度敏感型原位凝膠（thermosensitive in situ gel）是一種依從溫度而發(fā)生相轉變的凝膠，在儲藏條件下是自由流動的液體，進入人體后可填充于組織間隙，受到體溫的影響而迅速發(fā)生相轉變，在給藥部位形成半固體狀態(tài)凝膠，達到局部給藥或延緩藥物釋放的目的。該凝膠具有可注射、創(chuàng)傷小、給藥方便、延緩藥物釋放、與組織接觸緊密等優(yōu)點，適用于體內局部或植入給藥。地塞米松磷酸鈉(dexa

8、methasone sodium phosphate, DSP)為腎上腺皮質激素類藥，具有較強的抗炎作用，其性質穩(wěn)定、刺激性小、水溶性好，適合制備溫度敏感原位凝膠。DSP溫度敏感原位凝膠給藥時可以液體形式注射，在注射部位形成藥物儲庫，特別適用于關節(jié)腔或肌腱內注射治療關節(jié)炎、鼓室注射治療耳聾等疾病1。本實驗考察DSP溫度敏感原位凝膠的釋放行為及影響釋放的因素，為評價DSP溫度敏感原位凝膠在局部給藥中的藥物傳遞提供借鑒和參考。1儀器與材料高效液相色譜儀（Shimadzu LC2010），CHZ臺式恒溫振蕩器（江蘇太倉市試驗設備廠），玻璃刻度試管（10100mm，13100mm，15100mm、上海

9、周靈玻璃儀器廠），游標卡尺（廣州市廣精精密儀器有限公司）。泊洛沙姆407(PluronicF127，德國BASF公司)，泊洛沙姆188(PluronicF68，德國BASF公司)，去離子水(重慶醫(yī)科大學自制)，地塞米松磷酸鈉（浙江仙琚制藥股份有限司（061205）2 方法與結果2.1空白溫度敏感原位凝膠制備 泊洛沙姆PluronicF127、PluronicF68分別按22.5、2.5濃度量加入4去離子水中，4放置，待形成澄清透明溶液，即得空白溫度敏感原位凝膠。2.2 DSP溫度敏感原位凝膠制備 取100ml空白溫度敏感原位凝膠， 加入125mg DSP，攪拌至完全溶解，即得DSP溫度敏感原位

10、凝膠。2.3膠凝溫度測定 取4DSP溫度敏感原位凝膠2ml加入玻璃試管（10100mm），置15水浴，凝膠液面低于水面2cm，0.5min-1升溫，每升高0.5，迅速倒轉試管，觀察流動情況。30.0時液面停止流動，此溫度為膠凝溫度。2.4 DSP溫度敏感原位凝膠的釋放度考察2.4.1DSP含量測定 (1)HPLC色譜條件：流動相為三乙胺水溶液（取7.5ml三乙胺，加水稀釋至1000ml，用磷酸調節(jié)pH值至3.0）甲醇乙腈（38：28：34）；色譜柱：DiamonsilTM C18(250 mm4.6 mm,5 um); 檢測波長：242nm；柱溫：30；流速：1.0mlmin1；進樣量：20u

11、l（2）標準曲線方程的建立：精密稱取DSP對照品，用50甲醇水溶液配制成100gml1的儲備液。最終配制成濃度約為1，10，20，40，60，80，100gml1系列標準溶液，以濃度C對峰面積A做線形回歸。方法學考察表明，DSP在1100 gml1范圍內，濃度C對峰面積A呈良好的線性關系，其回歸方程為C=2.2105A0.0606（r=0.9999）；高、中、低加入量的供試液中DSP的平均回收率為（99.160.52）%；日內、日間變異均小于5%；輔料對藥物測定無干擾。說明該方法可用于藥物釋放行為考察。2.4.2體外釋放度測定 采用無膜溶出法2，取DSP溫度敏感原位凝膠2ml加入玻璃刻度試管，

12、置37恒溫水浴，凝膠液面低于水面2cm，放置5 min。加入37pH值 7.0磷酸鹽緩沖溶液（PBS）2ml，37恒溫振蕩（50rmin1），每12小時取出全部溶液，補加2ml釋放介質，重復此操作，直至凝膠完全溶解。每次取出的溶液置10ml容量瓶中，PBS稀釋至刻度，微孔濾膜過濾，按2.4.1項下方法測定DSP含量，計算累積釋放度。2.5 影響DSP溫度敏感原位凝膠釋放度的因素2.5.1 釋放面積取三種規(guī)格的玻璃刻度試管（10100mm，13100mm，15100mm）各6支，游標卡尺測定內徑，計算平均橫截面積，即釋放介質與凝膠的接觸面積?？疾灬尫琶娣e對DSP溫度敏感原位凝膠藥物釋放度的影響，

13、按體外釋放度測定方法測定藥物釋放速率。由表1可知，藥物釋放速率隨接觸面積的增加而加快，接觸面積與累積藥物釋放量成正比關系。接觸面積小，藥物釋放量較小，測定誤差較大；接觸面積大，樣品消耗量多。故選擇面積適中的13100mm玻璃刻度試管進行釋放度測定。2.5.2 釋放介質pH分別配制pH 值為5.0、5.8、7.0、8.0的磷酸鹽緩沖溶液作為釋放介質，考察pH值對DSP溫度敏感原位凝膠藥物釋放度的影響，按體外釋放度測定方法測定藥物釋放速率。由表1可知，釋放介質的pH值對藥物的累積釋放量無顯著性影響。因人體體液pH值為7.07.2左右，故確定釋放介質pH值為7.0。2.5.3 釋放介質體積分別取pH

14、7.0磷酸鹽緩沖溶液1、2、3、4ml，考察釋放介質體積對DSP溫度敏感原位凝膠藥物釋放度的影響，按體外釋放度測定方法測定藥物釋放速率。由表1可知，體積對藥物釋放有顯著影響。當釋放介質體積為1ml時，各測定時間點間的藥物累積釋放量差距小、誤差較大；釋放介質體積為2、3、4ml時的藥物累積釋放量接近、誤差較小，故釋放介質體積確定為2ml。2.5.4 振蕩頻率分別以25、50、75、100rmin1的振蕩頻率，考察振蕩頻率對DSP溫度敏感原位凝膠藥物釋放度的影響，按體外釋放度測定方法測定藥物釋放速率。從表1可知，在25 rmin1時藥物釋放速率??；50、75、100rmin1時的藥物累積釋放量接近

15、，故確定振蕩頻率為50 rmin1。表1 影響DSP溫度敏感原位凝膠釋放度的因素（累積釋放度的平均值，n6）Tab.1 Results of the test on influencing factors (accumulative drug release%.n=6)因素時間（hour）122436486072釋放面積mm2326.880.24 （10100mm）8.790.8717.510.8927.220.9434.930.9744.211.0351.191.31538.860.51（13100mm）14.430.5229.220.5444.70.5958.410.6172.190.67

16、86.630.79725.40.69（15100mm）19.790.3136.220.4559.310.4878.750.5196.940.59pH值5.015.010.4929.740.5345.060.5657.690.5872.440.6087.210.645.814.870.3928.650.5144.210.5458.430.5971.990.6286.950.717.014.960.3527.930.4244.240.4758.610.5171.420.5686.910.588.014.250.4229.610.4644.370.5158.940.5472.770.6286.580

17、.75釋放介質的體積ml19.360.8112.460.9213.761.3115.211.4416.741.8317.271.95214.660.4129.340.4445.210.4758.440.5170.060.5989.380.63315.020.3629.870.6646.990.5159.710.4971.210.5790.380.68415.240.3330.640.5547.510.6260.140.6972.030.7491.550.81振蕩頻率r min1256.440.6812.680.7918.460.8325.310.9131.171.2437.291.385014

18、.430.4229.220.4744.70.5158.410.6472.190.6786.630.717514.720.3730.010.4145.250.5859.630.6374.010.6987.410.8410015.210.3430.750.3946.830.5460.950.8175.60.6592.090.392.6 釋藥曲線擬合將DSP溫度敏感原位凝膠中的累積釋放量與時間分別按照零級動力學方程、一級動力學方程和Higuchi動力學方程進行擬合。由表2可知，DSP溫度敏感原位凝膠的釋放行為與更符合零級動力學方程。表2 釋藥動力學方程Tab 3 Release kinetics e

19、quation釋藥動力學方程r零級動力學Mt1.2173t0.9981一級動力學Ln（100Mt）0.0316t5.02760.9412Higuichi方程Mt14.489t39.4320.9901 3 討論3.1泊洛沙姆為非離子型表面活性劑，在水溶液中形成以疏水性聚氧化丙烯（PPO）為核心、親水性聚氧化乙烯（PEO）為外殼的球狀膠束。當環(huán)境溫度升高時，膠束的PEO外殼脫去水分子，互相纏結，緊密堆積，從而形成半固體狀凝膠3。3.2 泊洛沙姆溫度敏感原位凝膠水溶性好，水分子可由凝膠表面進入凝膠，其藥物釋放通過凝膠溶蝕與溶出來實現(xiàn)，而凝膠溶蝕是藥物釋放的主要方式。因此，凝膠與釋放介質接觸的面積對藥

20、物釋放有顯著影響。3.3 釋放介質體積為1ml時，由于凝膠的溶蝕，溶液的粘度增大，試管壁粘附多，誤差大，同時由于釋放介質體積過小，不能使藥物充分溶出。釋放介質體積2ml 時，可使藥物充分溶出。釋放介質體積3ml或4ml時，由于釋放介質接觸面積固定，故介質中的藥物累積釋放量與2ml數(shù)據(jù)接近。3.4在25 rmin1時，振蕩緩慢，溶出物在介質中不能充分擴散，造成藥物累積釋放量測定數(shù)據(jù)偏??；50 rmin1時振蕩已可使溶出物在介質中充分擴散，其藥物累積釋放量與75、100rmin1接近。3.5溫度敏感原位凝膠要求在體外是液體，體內為凝膠，其膠凝溫度一般控制在25.0-35.0之間，故設計DSP溫度敏感原位凝膠的膠凝溫度為30.0。3.6采用零級方程、一級方程和Higuchi動力學方程擬合，DSP原位凝膠中的藥物累積釋放量與時間之間均有較好的線性關系，但零級動力學方程擬合效果更好。參考文獻1Chen G, Hou SX, Liu J, et al. Study on dexamethasone thermosensistivie in sit