1、妥布霉素滴眼液對家兔細菌性角膜炎體內外抗菌作用        【摘要】     目的：研究妥布霉素滴眼液的抗菌作用。方法：體外采用M-H肉湯稀釋法，妥布霉素滴眼液對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、化膿性鏈球菌、肺炎克雷伯菌、肺炎鏈球菌進行體外抑菌、殺菌試驗。體內用角膜環(huán)鉆損傷兔眼角膜，感染大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、化膿性鏈球菌造成角膜炎動物模型。然后用妥布霉素滴眼液滴眼4次/d，每眼0.1mL，連續(xù)給藥7d。d8處死家兔。以觀察角膜病理切片，臨床癥

2、狀評分統(tǒng)計學t檢驗處理及角膜分泌物細菌培養(yǎng)判斷療效。結果：體外試驗表明妥布霉素滴眼液對上述6種細菌最低殺菌濃度(MBC)分別為0.19，0.39，0.78，46.88，93.75， 187.50g/mL。體內抗菌試驗顯示，家兔眼感染大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、化膿性鏈球菌感染后，妥布霉素滴眼液在治療3d評分結果與未治療對照組比較均有顯著差異，5d細菌培養(yǎng)轉陰率大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌均為100%，化膿性鏈球菌83%。角膜病理結果顯示除化膿性鏈球菌傷口愈合較慢，余3種菌傷口斑痕愈合良好。結論：妥布霉素滴眼液對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌敏感性較強；所致家兔角膜炎治療

3、效果較好，化膿性鏈球菌、肺炎克雷伯菌、肺炎鏈球菌對其敏感性較弱。     【關鍵詞】  妥布霉素滴眼液；最低抑菌濃度；最低殺菌濃度； 細菌性角膜炎；療效         Anti-bacterial effect of Tobramycin Eye Drops against rabbit keratitis in vitro and in vivo    Yi Xiao1, Chen Li1, Qi-Bing Mei1，Feng Zh

4、ang1, Si-Yuan Zhou1, Ji-Xian Ma2    1Department of Pharmacology, the Fourth Military Medical University, Xi'an 710032, Shaanxi Province , China; 2Department of Ophthalmology, Xijing Hospital, the Fourth Military Medical University, Xi'an 710032, Shaanxi Province , China &

5、#160;  · KEYWORDS: Tobramycin Eye Drops; minimal inhibitory concentration; minimal bactericidal concentration; bacterial keratitis; efficacy    0引言    近年來，隨著抗生素及糖皮質激素在眼科的普遍應用，眼部微生物菌群發(fā)生了變遷，由金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌感染眼部引起角膜炎是目前眼科的常見疾患1，2。由于濫用抗生素和耐藥菌株出現，臨床抗感染治療失敗已屢見不鮮，合

6、理選用抗生素成為眼科醫(yī)生不得不考慮的問題。妥布霉素滴眼液是近幾年用于臨床的抗生素，臨床常見菌對其敏感性到底如何？我們選用南京恒生制藥廠生產妥布霉素滴眼液，分別對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌6種菌進行體內外抗菌試驗，以便對臨床合理使用抗生素提供依據。    1材料和方法    1.1材料 妥布霉素滴眼液 (商品名佳諾泰，含3g/L妥布霉素)，南京恒生制藥廠生產。速眠新注射液 5mL/支，長春農牧大學獸醫(yī)研究所研制，常溫避光保存。Mueller-Hinton(M-H)肉湯和營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基由北京

7、奧博星生物技術有限公司生產。大耳白家兔由第四軍醫(yī)大學動物中心提供，雌雄均有，體質量22.5kg。實驗前單籠常規(guī)飼養(yǎng)1wk，室溫20左右，自由飲水，檢查雙眼無異常。大腸埃希菌ATCC25922， 金黃色葡萄球菌ATCC25923，綠膿桿菌ATCC27853，化膿性鏈球菌（臨床株），肺炎克雷伯菌（臨床株），肺炎鏈球菌（臨床株），由第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院檢驗科提供。    1.2方法    2結果    2.1體外試驗 妥布霉素滴眼液最低殺菌濃度依次為大腸埃希菌<金黃色葡萄球菌<綠膿桿菌<化膿性

8、鏈球菌<肺炎克雷伯菌<肺炎鏈球菌。最低抑菌濃度（MIC）和 最低殺菌濃度(MBC)見表1。    2.2體內試驗 四種菌感染兔眼24h后出現炎性癥狀，輕者結膜紅腫眼充血。重者全身狀態(tài)欠佳伴結膜紅腫充血，角膜水腫增厚，大量分泌物呈黃白色，將上下眼瞼粘住，雙眼緊閉。綠膿桿菌感染的兔眼分泌物微顯黃綠色?；撔枣溓蚓腥狙装Y反應較重，持續(xù)7d以上。評分標準在1.53級。細菌培養(yǎng)結果 ：給藥前角膜分泌物4種細菌培養(yǎng)均為陽性，妥布霉素滴眼液治療5d的角膜分泌物細菌培養(yǎng)轉陰率大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌均為100%，化膿性鏈球菌83%。家兔眼評分結果，與未治

9、療對照組比較，妥布霉素滴眼液對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、化膿性鏈球菌感染組給藥后4,5d都有明顯差異(P <0.01,表2）。病理切片,妥布霉素滴眼液治療前3種菌感染的角膜各層結構基本完整，傷口表面被復層鱗狀上皮覆蓋，傷口處有纖維組織增生，傷口斑痕性愈合，未見炎細胞浸潤；化膿性鏈球菌治療組部分片子可見角膜水腫，傷口未愈合并有少量炎細胞浸潤；未治療對照組感染4種菌后兔眼均顯示角膜水腫，血管擴張充血，傷口未愈合并有潰瘍，有大量炎細胞浸潤及壞死組織。正常對照組角膜完好無損。    3討論    妥布霉素屬氨基糖甙類抗生素，

10、抗菌機制是阻礙細菌蛋白質合成，改變細胞膜通透性?？咕V與慶大霉素近似。對革蘭氏陰性菌和部分革蘭氏陽性均有良好作用。臨床資料表明妥布霉素眼藥水對細菌性結膜炎，細菌性角膜炎或角膜潰瘍、早期麥粒腫，眼瞼炎等有明顯效果，對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌仍為敏感藥5，抗綠膿桿菌作用更強，近半數綠膿桿菌對慶大霉素耐藥而對其敏感，而抗化膿性鏈球菌資料報道不多7-9。我們選擇藥物劑量是根據產品推薦劑量，目的在于了解該滴眼液提供的治療劑量對常見幾種細菌的療效，故未做多個劑量療效的比較。首先用體外測定MIC和MBC，選出對其敏感性較強的金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌和較弱的化膿性鏈球菌4種細菌進行體內抗菌

11、試驗。采用角膜淺實質層損傷感染造成角膜炎動物模型，再以妥布霉素滴眼液連續(xù)滴藥7d，經癥狀觀察評分統(tǒng)計學t檢驗處理、細菌培養(yǎng)、病理切片檢查判定療效。結果表明，感染4種菌后，妥布霉素滴眼液治療34d后療效明顯。細菌培養(yǎng)5d轉陰率大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌均為100%，化膿性鏈球菌83%。病理切片檢查可見對照組未經藥物治療靠自身抗炎恢復較慢，7d傷口未愈合并有潰瘍，有大量炎細胞浸潤及壞死組織。而給藥組治療7d可達到角膜結構基本完整，傷口處被上皮細胞覆蓋，傷口瘢痕性愈合的效果，療效顯著，說明角膜炎感染治療越早療效越好。在本實驗中相比較化膿性鏈球菌感染組雖然兔眼癥狀較重，恢復較慢，但統(tǒng)計學處理治療效果同樣顯著。分析原因：1）機體受感染期，自身免疫機制參與抗炎作用的發(fā)揮有關；2）妥布霉素滴眼液每日2.4mg治療量足以達到殺死化膿性鏈球菌的劑量。本實驗進一步證明，用角膜環(huán)鉆至家兔角膜損傷建立細