1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型的建立摘要：動(dòng)脈粥樣硬化 (atherosclorosis , As) 是一種動(dòng)脈疾病，是心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)。由于確切發(fā)病原因不明，建立As動(dòng)物模型成為對(duì)其病因研究及探討治療措施的主要方法之一。關(guān)鍵詞：動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型一、 疾病簡(jiǎn)介1.臨床表現(xiàn)及危害 動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclorosis , As) 是一種動(dòng)脈疾病，是心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)。近年來(lái)有人提出As是一種慢性炎癥過(guò)程。As的特征是發(fā)病緩慢，其臨床癥狀在主要病變出現(xiàn)之前表現(xiàn)輕微。它主要造成三種臨床表現(xiàn)：腦中風(fēng)、冠心病和周圍性血管性疾病。2.病理過(guò)程 低密度脂蛋白(L

2、DL) 在易損區(qū)域動(dòng)脈內(nèi)皮下間質(zhì)內(nèi)沉積。單核細(xì)胞粘附于內(nèi)皮細(xì)胞表面。單核細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)膜層增生，并吞噬氧化型LDL而轉(zhuǎn)化成泡沫細(xì)胞。泡沫細(xì)胞死亡并釋放出脂質(zhì)，形成壞死中心。平滑肌細(xì)胞遷移、增生和聚集，并分泌纖維樣物質(zhì)，使形成的斑塊增大。3. 研究進(jìn)展As發(fā)病機(jī)理的研究已經(jīng)經(jīng)歷了一個(gè)半世紀(jì),主要是圍繞三種學(xué)說(shuō):脂質(zhì)浸潤(rùn)學(xué)說(shuō)、血栓形成學(xué)說(shuō)和損傷反應(yīng)學(xué)說(shuō)。Virchow曾提出As 是一種炎癥的觀點(diǎn), 1998 年12 月法國(guó)衛(wèi)生研究院及Merieux 基金會(huì)在法國(guó)的Annecy 組織了一次感染與As 研討會(huì)。初步得出“As過(guò)程是炎癥反應(yīng)過(guò)程”這一基本觀點(diǎn)。然而從現(xiàn)有的流行病學(xué)、病理學(xué)和動(dòng)物模型的研究資料

3、來(lái)看,感染與As 之間是否存在著必然的因果關(guān)系,還不能作出最后判斷。As 病變中發(fā)現(xiàn)的病原體是直接引起病理變化還是通過(guò)免疫反應(yīng)起作用尚未明確，可能與其他危險(xiǎn)因子共同起作用。而以As 是一種炎癥的觀點(diǎn)出發(fā),就必須從解決炎癥發(fā)生發(fā)展的基本環(huán)節(jié)出發(fā),去打斷這一網(wǎng)絡(luò)形成的主要環(huán)節(jié),才能真正達(dá)到防治的目的,當(dāng)然要做到這點(diǎn)還需要進(jìn)行大量深入的研究。4.預(yù)防及治療阻斷動(dòng)脈粥樣硬化的形成過(guò)程改善飲食習(xí)慣控制高脂血癥改善不良習(xí)慣是防治AS的重要措施控制高血壓及糖尿病阻斷AS的發(fā)生和發(fā)展AS的藥物治療擴(kuò)血管藥抗血小板藥阿司匹林溶栓與抗凝藥AS手術(shù)介入治療基因治療及干細(xì)胞移植二、 可用于建立實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷膭?dòng)物目前可以作

4、為模型的動(dòng)物有：大白兔、雞、鼠、豬和猴等。其中豬和猴的系統(tǒng)發(fā)育和飲食結(jié)構(gòu)類似于人能夠產(chǎn)生自發(fā)性的動(dòng)脈粥樣硬化，是研究人類AS的理想模型。家兔和鼠是現(xiàn)在研究AS最常用的模型動(dòng)物，兩者比較各有優(yōu)缺點(diǎn)：家兔不易自發(fā)性產(chǎn)生AS，但它對(duì)高脂飲食特別敏感，但是家兔的As病變只與人的病變表面上相似，其病變中的脂類和巨噬細(xì)胞含量遠(yuǎn)比人類大。鼠具有抗As性，但是作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，具有經(jīng)濟(jì)效益比較高，生存能力強(qiáng)，死亡率低的特點(diǎn)。為此，人們不斷摸索建立造型簡(jiǎn)便且重復(fù)性好的AS模型。兔 是最早用以制造高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化癥模型的動(dòng)物，至今仍然多被采用。它對(duì)外源性膽固醇的吸收率高，可達(dá)7595%，大白鼠僅為40%，對(duì)高血

5、脂的清除能力低，靜脈注入膽固醇后脂血癥可持續(xù)34天，大鼠僅為12小時(shí)，狗介于兩者之間。只要給兔含膽固醇較高的飼料，不必附加其它因素，經(jīng)34月即可形成明顯的動(dòng)脈粥樣硬化癥，而且與人體發(fā)生的病變相似，取血檢查也較方便。但是也有些缺點(diǎn)，如必須使血清膽固醇達(dá)到很高的水平才能形成斑塊，而這時(shí)內(nèi)臟易于發(fā)生脂質(zhì)沉著，動(dòng)物壽命短，低抗力差，容易繼發(fā)感染而死亡。再者，兔為草食動(dòng)物，其酯代謝與人體的酯代謝差異較大；實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其冠狀動(dòng)物病變主要呈現(xiàn)在心臟的小動(dòng)脈，而人主要發(fā)生在冠狀動(dòng)脈的大分支。 大白鼠 應(yīng)用大白鼠建立高血脂及動(dòng)脈粥樣硬化模型，有飼養(yǎng)方便、抵抗力強(qiáng)、食性與人相近的優(yōu)點(diǎn)。所形成的病理改變與人早期者相似，

6、不易形成似人體的后期病變，較易形成血栓。 正常大鼠的血清膽固醇平均值為92.67±1.87mg%。單純?cè)陲暳现性黾幽懝檀迹灰滓鹧迥懝檀忌?，更不易發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化癥，必須在飼料中同時(shí)加入膽酸以增加膽固醇的吸收，始能出現(xiàn)高膽固醇血癥，如再加抗甲狀腺藥物；可使血清膽固醇進(jìn)一步升高。 小白鼠 用小白鼠制造實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ鸵灿休^容易飼養(yǎng)和節(jié)省藥品的優(yōu)點(diǎn)，但是取血不便，難作動(dòng)態(tài)觀察，所以較少采用。 雞 雞為雜食動(dòng)物，食物品種接近于人，僅在普通飼料中加入膽固醇，就可形成動(dòng)脈粥樣硬化斑快。病變發(fā)生較快，在斑塊中有時(shí)伴有鈣化和形成潰瘍。 鴿 與雞相似，飼料簡(jiǎn)單，在飼料中加入膽固醇即易產(chǎn)生主動(dòng)脈粥樣硬化

7、斑塊，并可發(fā)生心肌梗死。由于鴿的品種不同，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的性質(zhì)可有很大差異，可能是個(gè)體之間脂肪酶的活性不同所致。 猴 猴與人的情況很相近，無(wú)論其正常血脂、動(dòng)脈粥樣硬化病變的性質(zhì)和部位、臨床癥狀以及各種藥品的療效關(guān)系等，都與人體的非常相似。但是進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，其不同的種屬對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的敏感各種有所不同。一般認(rèn)為獼猴更為理想，給予高脂飲食13個(gè)月后，血清膽固醇水平即可達(dá)300600mg%，并同時(shí)發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化，且可產(chǎn)生心肌梗死。動(dòng)脈粥樣硬化病變的部位，不僅在主動(dòng)脈，也呈現(xiàn)在冠狀動(dòng)脈、腦動(dòng)脈、腎動(dòng)脈及股動(dòng)脈等。 豬 豬可能是動(dòng)脈粥樣硬化研究較理想的動(dòng)物模型，因?yàn)槟承┢贩N的老齡豬在飼喂以人的殘羮

8、剩飯后能產(chǎn)生動(dòng)脈、冠狀動(dòng)脈和腦血清粥樣硬化病變，與人的病變非常相似。單用高膽固醇、高脂肪飼料喂養(yǎng)，容易在相對(duì)較短的時(shí)間內(nèi)（918個(gè)月）產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化。此外，進(jìn)行性的主動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈粥樣硬化可以用探針刺傷加上高膽固醇、高脂肪飼料即能很快產(chǎn)生。豬模型的其它優(yōu)點(diǎn)包括解剖學(xué)和生理學(xué)與人類相似，動(dòng)脈結(jié)構(gòu)相似，有若干確認(rèn)的品種可供利用，多胎多仔，雜食習(xí)性等，其體形大小亦足能供各種外科手術(shù)和臨床評(píng)價(jià)之用。豬也特別適合于研究應(yīng)激因素與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系。豬模型的缺點(diǎn)是飼養(yǎng)要花一定代價(jià)，人工產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化需要類脂質(zhì)代謝有一定改變，或動(dòng)脈受到損傷的基礎(chǔ)。三、 模型的建立1. 高脂飲食建立大鼠As模型選取

9、健康Wistar大鼠24只，雌雄各半，體重180200 g，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組采用高脂飼料(含150脂肪、125膽固醇、05膽酸、02甲基硫氧嘧啶)，對(duì)照組采用普通飼料飼喂。10周實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生明顯As特點(diǎn)，可誘發(fā)Wistar大鼠出現(xiàn)粥樣斑塊，但是無(wú)法形成成熟斑塊。2.高脂飼料及維生素D3聯(lián)合應(yīng)用建立大鼠As模型健康Wistar大鼠雌雄各半，體重180200 g，隨機(jī)分為2組實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組：每只大鼠按700 000 Ukg的總劑量腹腔注射VD3，分3d給完之后，每天給予高脂飼料20 g，即3%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%豬油、81.3%基礎(chǔ)飼料

10、。連續(xù)喂養(yǎng)21d；對(duì)照組：每只大鼠以等體積的生理鹽水腹腔注射，3d后，每日給予標(biāo)準(zhǔn)飼料20g，連續(xù)喂養(yǎng)21d可建立As模型。實(shí)驗(yàn)3周后，處死動(dòng)物，分離各組大鼠主動(dòng)脈弓，置于10中性福爾馬林中固定，作HE染色及yon Kossa染色，觀察形態(tài)學(xué)改變。實(shí)驗(yàn)組可見(jiàn)血管內(nèi)皮連續(xù)性破壞，管壁局部向管腔明顯突出，形成斑塊，斑塊內(nèi)有壞死物質(zhì)形成，彈力纖維斷裂，動(dòng)脈外膜變薄撕裂，呈較典型的動(dòng)脈粥樣斑塊。3.脂飼料及維生素D負(fù)荷的同時(shí)予球囊損傷動(dòng)脈建立大鼠As模型健康Wistar大鼠雌雄各半，體重180200 g，隨機(jī)分為2組實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組：在高脂加維生素D飲食的基礎(chǔ)上在第7天行大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜損傷術(shù)(將

11、球囊導(dǎo)管自頸外動(dòng)脈進(jìn)入胸主動(dòng)脈，以生理鹽水充盈球囊，向外拉至頸外動(dòng)脈，再進(jìn)入胸主動(dòng)脈，重復(fù)3次)，90 d后內(nèi)皮損傷組管壁內(nèi)皮細(xì)胞脫落，內(nèi)膜增厚，斑塊表面纖維帽薄，突出的斑塊內(nèi)含有壞死物質(zhì)，平滑肌細(xì)胞減少，纖維組織增生伴片狀或點(diǎn)狀鈣化，中膜明顯萎縮，呈較典型的與人類AS相似的成熟動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。4.載脂蛋白E基因敲除小鼠As模型載脂蛋白E基因敲除小鼠，6周齡，雌雄各半。分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組給予高脂膳食結(jié)構(gòu)的飼料飲食(脂肪2l 、膽固醇015)，對(duì)照組予普通飼料飲食，飲水不限。分別在飼養(yǎng)l5周齡、l9周齡、24周齡、28周齡、36周齡時(shí)隨機(jī)各取等量處死，處死前一天晚上禁食不禁水。進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，1820周斑塊形成。載脂蛋白E基因敲除小鼠形成As斑塊不僅局限于主動(dòng)脈根部，在冠狀動(dòng)脈、主動(dòng)脈弓及其分叉處、頸總動(dòng)脈及其分叉處、胸主動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈、雙腎動(dòng)脈分叉處均可形成斑塊，與人類全身As好發(fā)處相近。5.半胱氨酸血癥大鼠As模型普通級(jí)雄性Wistar大鼠，體重200g，分實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組鼠L2蛋氨酸灌胃給藥，分別給予230 mg觀察其引起動(dòng)物血脂紊亂，病理組織化學(xué)變化。對(duì)照組同等劑量生理鹽水灌胃給藥。喂飼8周時(shí)主動(dòng)脈弓局部?jī)?nèi)膜下水腫引起主動(dòng)脈弓內(nèi)