1、電鏡在腎小球疾病病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值研究【摘要】目的：探討電鏡在腎小球疾病病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法：選取我院在2013年3月2014年3月接診的82例腎小球疾病患者作為研究對(duì)象，所有患者都應(yīng)用光鏡+免疫熒光法、電鏡分別進(jìn)行腎組織活檢，比較兩種檢查方法對(duì)腎小球疾病的診斷結(jié)果。結(jié)果：最終病理診斷顯示IgA腎病所占比例最高，為19.51%，其次為腎小球微小病變，占9.76%，薄基底膜腎病、膜性腎病、狼瘡性腎炎所占比例也較高，均為7.32%。電鏡對(duì)最終病例診斷結(jié)果起完全修正作用的有19例（23.17%），起補(bǔ)充修正作用的有19例（23.17%）。光鏡+免疫熒光檢驗(yàn)有44例對(duì)腎活檢最終病理診斷結(jié)果產(chǎn)生

2、影響，占53.66%，電鏡檢驗(yàn)有38例對(duì)腎活檢最終病理診斷結(jié)果產(chǎn)生影響，占46.34%，二者比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：在腎小球疾病病理診斷中，電鏡檢查可為臨床診斷、疾病分型、病理分期提供重要的參考信息，電鏡聯(lián)合光鏡檢查可進(jìn)一步降低腎小球疾病誤診率，值得推廣應(yīng)用?！娟P(guān)鍵詞】腎小球疾病；腎活檢；電子顯微鏡；光學(xué)顯微鏡 目前，臨床診斷腎臟疾病最基本的手段仍為腎活組織病理檢查，腎活檢對(duì)明確腎臟疾病類型、發(fā)病機(jī)制、判斷預(yù)后及評(píng)估病情進(jìn)展都具有重要作用。在腎活檢病理診斷中，電鏡、免疫熒光/免疫組化、光鏡是不可或缺的三大組成部分1。近年來，隨著電鏡技術(shù)的發(fā)展與普及，其在腎活檢病理

3、診斷中的應(yīng)用優(yōu)勢也越來越明顯，其能反映腎小球超微結(jié)構(gòu)改變，對(duì)腎小球疾病的免疫熒光和光鏡病理診斷進(jìn)行驗(yàn)證和修正2。為進(jìn)一步明確電鏡在腎小球疾病病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值，本文選取了82例行電鏡、免疫熒光、光鏡腎活檢的腎小球疾病患者進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。1 一般資料與方法1.1 一般資料 選取我院泌尿內(nèi)科在2013年3月2014年3月接診的82例腎小球疾病患者作為研究對(duì)象，本組患者均接受腎組織活檢，其臨床檢查及實(shí)驗(yàn)室檢查資料均完整。男45例，女37例，年齡875歲，平均（36.5±18.8）歲。臨床表現(xiàn)：腎病綜合征10例，血尿32例，腎炎綜合征11例，蛋白尿2例，腎功能衰竭1例，溶血尿毒綜合征

4、1例。1.2 方法所有患者均在B超引導(dǎo)下行腎穿刺活檢術(shù)，取腎活檢標(biāo)本，并將其分為3份，分別用于免疫熒光、光鏡、電鏡檢查。（1）第一份腎活檢標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋，切片（厚度2m），常規(guī)進(jìn)行Masson（馬森）、PASM（嗜銀）、PAS（糖原）、HE（蘇木精-伊紅）染色，然后進(jìn)行光鏡檢查；（2）第二份腎活檢標(biāo)本冰凍后切片（厚度4m），用以免疫熒光檢測。采用直接法檢測FRA（纖維蛋白原）、C1q、C3、IgA、IgM、IgC，采用間接法進(jìn)行乙肝病毒抗原檢測，檢測項(xiàng)目包括HbeAg、HbcAg、HbsAg；（3）第三份腎活檢標(biāo)本進(jìn)行電鏡檢查。分別使用戊二醛（2.5%）、鋨酸（1%）對(duì)活檢標(biāo)本進(jìn)行前固定、后

5、固定，再使用丙酮脫水，使用Epon812環(huán)氧樹脂對(duì)腎組織進(jìn)行常規(guī)包埋處理，使用甲苯胺藍(lán)染色定位后切片（厚度50nm），鈾、鉛雙重電子染色后，在H-600型電子顯微鏡下觀察腎小球基底膜厚度、基底膜內(nèi)沉積物情況、系膜細(xì)胞或基質(zhì)增生情況、系膜內(nèi)沉積物情況、內(nèi)皮細(xì)胞及上皮細(xì)胞增生及結(jié)構(gòu)變化情況、系膜與基底膜關(guān)系、足突融合程度、足細(xì)胞變性、假微絨毛形成情況等。部分疑難病例，還需進(jìn)行型膠原35染色和輕鏈染色/剛果紅染色。1.3 觀察指標(biāo) 參考WHO制定的腎小球疾病分類方法、腎活檢病理診斷標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)免疫熒光和光鏡檢查結(jié)果進(jìn)行初步病理診斷，再結(jié)合電鏡檢查結(jié)果做出最終病理診斷，個(gè)別疑難病例，還需結(jié)合型膠原35染色

6、和輕鏈染色/剛果紅染色結(jié)果做出最終病例診斷。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本次研究數(shù)據(jù)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 最終病理診斷 82例患者的最終病理診斷結(jié)果見表1。從表1可知，IgA腎病所占比例最高，為19.51%，其次為腎小球微小病變，占9.76%，薄基底膜腎病、膜性腎病、狼瘡性腎炎所占比例也較高，均為7.32%。表1 82例患者的最終病理診斷結(jié)果疾病類型例數(shù)構(gòu)成比（%）疾病類型例數(shù)構(gòu)成比（%）IgA腎病1619.51膜增生腎炎33.66腎小球微小病變89.76內(nèi)皮細(xì)胞病33.66薄基底膜腎病67.32乙型肝炎

7、病毒性腎炎33.66膜性腎病67.32小管間質(zhì)性疾病33.66狼瘡性腎炎67.32IgM腎病22.44糖尿病腎病56.10Alpot綜合征22.44局灶節(jié)段腎小球硬化56.10毛細(xì)血管內(nèi)增生腎炎22.44紫癜性腎炎56.10腎淀粉樣變11.22系膜增生性腎炎56.10高血壓性腎損害11.22腎小球輕微病變44.88硬化性腎炎11.222.2 電鏡的完全修正、補(bǔ)充修正結(jié)果電鏡對(duì)最終病理診斷結(jié)果的完全修正、補(bǔ)充修正結(jié)果見表2。從表2可知，電鏡對(duì)最終病例診斷結(jié)果起完全修正作用的有19例，占23.17%，完全修正的疾病類型包括腎小球微小病變、薄基底膜腎病、膜性腎病、糖尿病腎病、Alpot綜合征、腎淀粉

8、樣變；起補(bǔ)充修正作用的有19例，占23.17%，補(bǔ)充修正的疾病類型包括IgA腎病、膜性腎病、狼瘡性腎病、糖尿病腎病、局灶節(jié)段腎小球硬化、乙型肝炎病毒性腎病、膜增生腎炎。表2 電鏡的完全修正、補(bǔ)充修正結(jié)果n疾病類型完全修正補(bǔ)充修正驗(yàn)證診斷合計(jì)IgA腎病011516腎小球微小病變8008薄基底膜腎病6006膜性腎病1326狼瘡性腎炎0516糖尿病腎病1405局灶節(jié)段腎小球硬化0145紫癜性腎炎0055系膜增生性腎炎0055腎小球輕微病變0044膜增生腎炎0123內(nèi)皮細(xì)胞病0123乙型肝炎病毒性腎炎0303小管間質(zhì)性疾病0033IgM腎病0022Alpot綜合征2002毛細(xì)血管內(nèi)增生腎炎0012腎淀

9、粉樣變1001高血壓性腎損害0011硬化性腎炎0011合計(jì)19194482構(gòu)成比/%23.1723.1753.66100.02.3 光鏡+免疫熒光檢驗(yàn)與電鏡的病理診斷影響程度 光鏡+免疫熒光檢驗(yàn)有44例對(duì)腎活檢最終病理診斷結(jié)果產(chǎn)生影響，占53.66%；電鏡檢驗(yàn)有38例對(duì)腎活檢最終病理診斷結(jié)果產(chǎn)生影響，占46.34%，二者比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。表3光鏡+免疫熒光檢驗(yàn)與電鏡的病理診斷影響程度比較n檢測方法對(duì)最終病理診斷無影響對(duì)最終病理診斷有影響影響率（%）電鏡443846.34光鏡+免疫熒光384453.663 討論電鏡可將標(biāo)本放大數(shù)十萬倍，在電鏡下，可清晰地觀察

10、到腎小球基底膜結(jié)構(gòu)及厚度變化，腎小球足細(xì)胞足突形態(tài)，以及其他細(xì)胞的細(xì)胞器變化，同時(shí)還能觀察到致密物及致密物沉淀部位、病毒樣顆粒、特殊纖維樣物質(zhì)，而腎活檢標(biāo)本的這些情況在光鏡下，或通過免疫病理檢查是無法完成的3。電鏡的問世及應(yīng)用，也發(fā)現(xiàn)了纖維性腎小球病等多種新的腎小球疾病，極大地豐富了人們對(duì)腎臟疾病尤其是腎小球疾病的認(rèn)識(shí)，其已經(jīng)成為了目前腎臟病理診斷的重要組成部分之一4。本組患者的最終病理診斷結(jié)果顯示，所有腎臟疾病中，腎小球疾病所占比例最高，達(dá)到了96.8%。提示電鏡檢查對(duì)腎小球疾病診斷的敏感性較高，這可能與電鏡能顯示腎小球基底膜超微結(jié)構(gòu)、電子致密物分布情況，從而能更好地進(jìn)行腎小球病理診斷有關(guān)5

11、。本次研究顯示，在最終病理診斷結(jié)果中，23.17%是由電鏡檢查起決定性作用，疾病類型包括腎小球微小病變、薄基底膜腎病、膜性腎病、糖尿病腎病、Alpot綜合征、腎淀粉樣變。這一結(jié)果與國內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道相符6。這也提示光鏡診斷為腎小球輕微病變和免疫熒光結(jié)果呈陰性的病例，還應(yīng)做電鏡檢查，以免發(fā)生漏診7。最終病理診斷結(jié)果中電鏡檢查起修正診斷作用的占23.17%，疾病類型以免疫復(fù)合物性腎炎居多，這可能與電鏡能夠精確定位電子致密物沉積部位，顯示沉積物特點(diǎn)、結(jié)構(gòu)等有關(guān)。雖然電鏡檢查的應(yīng)用優(yōu)勢顯著，但其觀察范圍較為局限，對(duì)彌漫性腎炎、局灶節(jié)段性腎小球病變的診斷較為有限，其對(duì)最終病理診斷結(jié)果無影響，免疫熒光+光鏡

12、檢查即可獨(dú)立診8。然而，由于電鏡具有顯示電子致密物、超微結(jié)構(gòu)改變的作用，故可為病理診斷提供相關(guān)佐證，用以驗(yàn)證免疫熒光+光鏡診斷結(jié)果。綜上所述，在腎小球疾病病理診斷中，電鏡檢查可為臨床診斷、疾病分型、病理分期提供重要的參考信息，電鏡聯(lián)合光鏡檢查可進(jìn)一步降低腎小球疾病誤診率，值得推廣應(yīng)用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 唐炯.68例腎臟疾病病理分析J.醫(yī)學(xué)信息,2014,(9):437-437.2 董航,李艷茹,崔新明等.應(yīng)用透射電鏡在小兒腎小球疾病診斷中的利弊J.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2012,16(6):1103-1105.3 肖長長,駱九源,姚月成等.59例腎活檢病例臨床與病理分析J.中國處方藥,2014,(5):102-103.4 暢飛,張莉,孟梅霞等.158例腎活檢病理及臨床分析J.海南醫(yī)學(xué),2012,23(18):122-124.5 王銳艷,孫婷麗.78例腎小球疾病臨床與病理J.中國實(shí)用醫(yī)藥,2013,8(24):38-39.6 Satirapoj,B.,Nast,C.C.,Adler,S.G. et al.Novel Insights into the Relationship Between Glomerular Path