1、法醫(yī)物證學(xué)：是以法醫(yī)物證為研究對(duì)象，以提供科學(xué)證據(jù)為目的，研究應(yīng)用生命科學(xué)技術(shù)解決案件中與人體有關(guān)的生物檢材鑒定的一門學(xué)科。法醫(yī)物證學(xué)是法醫(yī)學(xué)的分支學(xué)科，其研究?jī)?nèi)容屬于法醫(yī)學(xué)中的物證檢驗(yàn)部分，是法醫(yī)學(xué)研究的主要內(nèi)容之一。法醫(yī)物證的特點(diǎn)：法醫(yī)物證的穩(wěn)定性受環(huán)境條件的影響；法醫(yī)物證屬于“科學(xué)證據(jù)”。法醫(yī)物證學(xué)生物檢材遺傳標(biāo)記個(gè)人識(shí)別遺傳（heredity）：生物繁衍過(guò)程中，子代與親代相似的現(xiàn)象。變異（variation）：生物繁衍過(guò)程中，子代與親代有所不同的現(xiàn)象。遺傳標(biāo)記（genetic marker，GM）：個(gè)體的單位遺傳性狀作為標(biāo)志用于法醫(yī)物證分析時(shí)，這種遺傳性狀就稱為遺傳標(biāo)記。遺傳性狀，即生

2、理生化特征，可作為標(biāo)志來(lái)識(shí)別攜帶它的個(gè)體、細(xì)胞和染色體。單位遺傳性狀是指可檢測(cè)的、由遺傳決定的、并能夠以一定的規(guī)律從親代傳給下一代的形態(tài)學(xué)、生理學(xué)及分子生物學(xué)特征。DNA的變性和復(fù)性：某些理化因素（溫度、PH、離子強(qiáng)度等）會(huì)導(dǎo)致DNA雙鏈互補(bǔ)堿基對(duì)之間的氫鍵發(fā)生斷裂，使雙鏈DNA解離為單鏈，這種現(xiàn)象稱為DNA變性。DNA變性只改變其二級(jí)結(jié)構(gòu)，不改變它的核苷酸序列。當(dāng)變性條件緩慢地除去后，兩條解離的互補(bǔ)鏈可重新配對(duì)，恢復(fù)原來(lái)的雙螺旋結(jié)構(gòu),這種現(xiàn)象稱為復(fù)性（renaturation）。融鏈曲線的中點(diǎn)所示溫度稱作該DNA分子的融鏈溫度（melting temperature，Tm），Tm是一半DNA

3、分子變性時(shí)的溫度。串聯(lián)重復(fù)序列（tandem repeats）：其結(jié)構(gòu)形式是以相對(duì)恒定的短序列作為重復(fù)單位，首尾相接，串聯(lián)連接形成。在人類基因組中，串聯(lián)重復(fù)序列約占10%，主要分布在非編碼區(qū)，少數(shù)分布于編碼區(qū)。編碼區(qū)中的重復(fù)DNA與功能有關(guān)，非編碼區(qū)串聯(lián)重復(fù)DNA多分布在間隔DNA或內(nèi)含子。短串聯(lián)重復(fù)序列（short tandem repeats，STR）：可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列（variable number of tandem repeats，VNTR）：假基因（pseudogene）：是基因組中喪失功能的基因，這類基因或是在復(fù)制擴(kuò)增過(guò)程中因?yàn)橥蛔兪チ苏{(diào)控信號(hào)，不再具有轉(zhuǎn)錄功能；或丟失拼接

4、加工信號(hào)，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物無(wú)法正確拼接形成成熟mRNA；或在編碼區(qū)形成終止信號(hào)，產(chǎn)生不完整肽鏈。多基因家族（multigene family）：是指一組具有功能相似，堿基序列相同或部分同源的基因。轉(zhuǎn)座子（transposon）：又稱為可移動(dòng)DNA成分，是指DNA分子內(nèi)或分子間可以轉(zhuǎn)移的DNA片段。除散布重復(fù)序列外，轉(zhuǎn)座子還包括DNA形式轉(zhuǎn)座子和擬反轉(zhuǎn)錄病毒反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子元件。端粒（telomere）：線性形式基因組DNA的末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)，是一段DNA和蛋白質(zhì)形成的復(fù)合結(jié)構(gòu)，叫做端粒。DNA的甲基化修飾：生物體在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferase，DNMT）的催化下，以S

5、-腺苷甲硫氨酸（SAM）為甲基供體，將甲基轉(zhuǎn)移到特定的堿基上的過(guò)程。甲基化修飾修飾限于CG序列中的胞嘧啶?；蛲蛔兊姆诸悾荷矬w的基因組DNA并不穩(wěn)定，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)各種各樣的可遺傳的改變，在子代留下變異的遺傳信息。在DNA分子水平，DNA損傷的后果之一就是突變（mutation）。主要分為編碼區(qū)堿基突變和非編碼區(qū)突變兩種。編碼區(qū)堿基突變：堿基替代在基因組中是最常見的突變形式，分轉(zhuǎn)換（transition）和顛換（transversion）兩種。非編碼區(qū)突變：非編碼區(qū)DNA沒(méi)有表達(dá)產(chǎn)物，DNA復(fù)制中也能夠出現(xiàn)堿基的錯(cuò)配、插入和缺失，但是對(duì)細(xì)胞正常生理過(guò)程不構(gòu)成實(shí)質(zhì)性影響。無(wú)論在編碼區(qū)或非編碼區(qū)，突

6、變的后果從沒(méi)有效應(yīng)到有害效應(yīng)和有利效應(yīng)，各種情況都會(huì)出現(xiàn)。堿基替換：堿基轉(zhuǎn)換、堿基顛倒堿基序列改變 基因突變堿基排列改變：倒位、易位堿基數(shù)目改變：插入、缺失、重復(fù)同義突變（same sense mutation）：是指DNA組成變了，但密碼子沒(méi)有改變，或密碼子雖然不同，但編碼產(chǎn)生同一種氨基酸，這種突變又稱中性突變。錯(cuò)義突變（missence mutation）：是指DNA組成改變使編碼一種氨基酸的密碼子改變成編碼另一種氨基酸的密碼子。無(wú)義突變（nonsense mutation）：是指某一堿基的替換使氨基酸密碼子變?yōu)榻K止密碼，可過(guò)早地終止轉(zhuǎn)錄，形成無(wú)活性的肽鏈。移碼突變（frameshift

7、mutation）：DNA鏈上插入或缺失一個(gè)或n個(gè)核苷酸，使下游密碼子閱讀框發(fā)生變化，導(dǎo)致在插入或缺失部位以后的編碼發(fā)生相應(yīng)改變。終止密碼突變：是DNA分子中的某一終止密碼突變?yōu)榫幋a氨基酸的密碼子，從而使多肽鏈的合成至此仍繼續(xù)下去，直至下一個(gè)終止密碼為止，形成超長(zhǎng)的異常多肽鏈。沉默突變（silent mutation）：僅改變表達(dá)產(chǎn)物的單個(gè)氨基酸，對(duì)蛋白質(zhì)的生理功能沒(méi)有影響的點(diǎn)突變，是形成蛋白質(zhì)多態(tài)性的主要原因。DNA多態(tài)性（DNA polymorphisms）：基因水平上的多樣性來(lái)自基因的突變，當(dāng)基因突變以等位基因形式在群體中得以保留，并能夠從親代遺傳給子代，可形成個(gè)體間的遺傳差異。不同個(gè)體

8、間的遺傳差異形式是不同的等位基因組成。等位基因之間的差異可以是點(diǎn)突變引起的序列不同，也可以是因?yàn)閴A基的插入或缺失引起的片段長(zhǎng)度不同，都能構(gòu)成具有個(gè)體特征的DNA遺傳標(biāo)記。DNA遺傳標(biāo)記可以出現(xiàn)在編碼區(qū)，也可以存在于非編碼區(qū)。在基因組DNA中，這種由不同堿基結(jié)構(gòu)的等位基因所形成的多態(tài)性叫做DNA多態(tài)性。DNA長(zhǎng)度多態(tài)性（DNA length polymorphisms）：是指同一基因座上各等位基因之間的DNA片段長(zhǎng)度差異構(gòu)成的多態(tài)性。DNA長(zhǎng)度多態(tài)性靶序列主要是指可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列（VNTR），VNTR既存在于小衛(wèi)星DNA中，也存在于微衛(wèi)星DNA中。由于命名習(xí)慣和為了便于區(qū)分，通常小衛(wèi)星DNA

9、中的可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列稱為VNTR，而把微衛(wèi)星的可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列稱為短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）。DNA序列多態(tài)性（sequence polymorphisms）：是指一個(gè)基因座上，因不同個(gè)體DNA序列有一個(gè)或多個(gè)堿基的差異而構(gòu)成的多態(tài)性?？梢岳斫鉃樵摶蜃纤械任换駾NA長(zhǎng)度相同，但是它們之間的序列存在差異。在基因組DNA中，無(wú)論是編碼區(qū)或者非編碼區(qū)，單堿基替換是最基礎(chǔ)的突變形式。在人類基因組范圍內(nèi)，如果任何單堿基突變使特定核苷酸位置上出現(xiàn)兩種堿基，其中最少的一種在群體中的頻率不少于1%，就形成單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）。

10、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）：RFLP分析是一種傳統(tǒng)的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于突變分析、基因診斷、基因定位等各個(gè)方面。法醫(yī)物證鑒定應(yīng)用RFLP技術(shù)主要是對(duì)人類基因組中的VNTR基因座進(jìn)行分型，其技術(shù)核心是DNA分子雜交，決定RFLP分析圖譜個(gè)體特異性的因素是限制性核酸內(nèi)切酶的特異性和探針的特異性。檢測(cè)所用的探針多是由人類基因組DNA中篩選出的小衛(wèi)星序列，選擇特異性不同的探針，在不同的雜交條件下，可以只檢出單個(gè)VNTR基因座，也可同時(shí)檢出多個(gè)VNTR基因座，前者稱為DNA紋印，后者稱之為DNA指紋，檢測(cè)所

11、用的相應(yīng)探針?lè)謩e被稱為單基因探針（single-locus probe）和多基因探針(multi-locus probe)。Southern印跡雜交：是進(jìn)行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜或其他固相支持物上，經(jīng)干烤或者紫外線照射固定，再與相對(duì)應(yīng)結(jié)構(gòu)的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交，用放射自顯影或酶反應(yīng)顯色，從而檢測(cè)特定DNA分子的含量。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補(bǔ)的原則形成雙鏈，此雜交過(guò)程是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測(cè)方法的靈敏性，綜合凝

12、膠電泳和核酸內(nèi)切限制酶分析的結(jié)果，便可繪制出DNA分子的限制圖譜。Southern印跡雜交（Southern blot）是研究DNA圖譜的基本技術(shù)，在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產(chǎn)物分析等方面有重要價(jià)值。Southern印跡雜交的基本方法是將DNA標(biāo)本用限制性內(nèi)切酶消化后，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離各酶解片段，然后經(jīng)堿變性，Tris緩沖液中和和高鹽下通過(guò)毛吸作用將DNA從凝膠中轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜上、烘干固定后即可用于雜交。凝膠中DNA片段的相對(duì)位置在DNA片段轉(zhuǎn)移到濾膜的過(guò)程中繼續(xù)保持著，附著在濾膜上的DNA與32P標(biāo)記的探針雜交，利用放射自顯影術(shù)確立探針互補(bǔ)的每一條DNA帶的位置，從而可以確

13、定在眾多消化產(chǎn)物中含某一特定序列的DNA片段的位置和大小。（瓊脂糖凝膠電泳硝酸纖維素膜吸?。?。限制性內(nèi)切酶常見的有那些？限制性內(nèi)切酶（restriction endonuclease）：一種在特殊核甘酸序列處水解雙鏈DNA的內(nèi)切酶。型限制性內(nèi)切酶既能催化宿主DNA的甲基化，又催化非甲基化的DNA的水解；而型限制性內(nèi)切酶只催化非甲基化的DNA的水解。合成引物的要點(diǎn)，PCR的反應(yīng)組成：標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系10×擴(kuò)增緩沖液10l4種dNTP混合物200l引物10100l模板DNA0.12gTaq DNA聚合酶2.5 lMg2+1.5mmol/L加雙或三蒸水100 lPCR反應(yīng)五要素：參加P

14、CR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即： 模板DNA，寡核苷酸引物，dNTP，反應(yīng)緩沖液，TaqDNA聚合酶。PCR基本原理：PCR技術(shù)是模擬生物體內(nèi)DNA的半保留復(fù)制，在體外合成DNA鏈的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的條件下經(jīng)過(guò)：“高溫變性低溫退火中溫延伸”三步循環(huán)，獲得大量擴(kuò)增片段。合成引物的要點(diǎn)：引物合成是通過(guò)測(cè)定引物的OD值，溶解引物，最終合成引物的一個(gè)完善的過(guò)程。目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。亞磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點(diǎn)。亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成的，合成的方向是由待合成引物的3端向

15、5端合成的，相鄰的核苷酸通過(guò)35磷酸二酯鍵連接。第一步，是將預(yù)先連接在固相載體CPG上的活性基團(tuán)被保護(hù)的核苷酸與三氯乙酸反應(yīng)，脫去其5-羥基的保護(hù)基團(tuán)DMT，獲得游離的5-羥基。第二步，合成DNA的原料，亞磷酰胺保護(hù)核苷酸單體，與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，它的3端被活化，5-羥基仍然被DMT保護(hù)，與溶液中游離的5-羥基發(fā)生縮合反應(yīng)。第三步，帶帽(capping)反應(yīng)，縮合反應(yīng)中可能有極少數(shù)5-羥基沒(méi)有參加反應(yīng)(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑終止其后繼續(xù)發(fā)生反應(yīng)，這種短片段可以在純化時(shí)分離掉。第四步，在氧化劑碘的作用下，亞磷酰形式轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯。經(jīng)過(guò)以上四個(gè)步驟，一

16、個(gè)脫氧核苷酸被連接到固相載體的核苷酸上。再以三氯乙酸脫去它的5-羥基上的保護(hù)基團(tuán)DMT，重復(fù)以上步驟，直到所有要求合成的堿基被接上去。常染色體STR與性染色體STR有什么不同？常染色體STR：短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)是廣泛存在于人類基因組中的一類具有長(zhǎng)度多態(tài)性的DNA序列。它由26 個(gè)堿基對(duì)構(gòu)成核心序列,呈串聯(lián)重復(fù)排列,其長(zhǎng)度多態(tài)性主要由核心序列拷貝數(shù)目的變化而產(chǎn)生。一般認(rèn)為,人類基因組平均每610kb就有1個(gè)STR基因座,為法醫(yī)個(gè)人識(shí)別和親子鑒定提供了高信息基因座的豐富來(lái)源。與限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性產(chǎn)生的DNA 指紋相比,用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)擴(kuò)增STR 基因座產(chǎn)生的DNA紋印具有更高的

17、靈敏度。STR擴(kuò)增片段較短(100300bp),對(duì)于常見含部分降解 DNA的陳舊斑痕,PCR擴(kuò)增STR比DNA指紋分析更容易成功。性染色體STR：人類Y染色體屬于近端著絲粒染色體，由長(zhǎng)臂Yq和微小的短臂Yp組成，DNA長(zhǎng)度約60Mb。Y-DNA中大致有五類多態(tài)性遺傳標(biāo)記：衛(wèi)星DNA、小衛(wèi)星DNA、微衛(wèi)星DNA、插入或缺失及SNP。Y染色體STR基因座（Y-STR）是其中一種重要的遺傳標(biāo)記。與常染色體STR基因座相比，大多數(shù)Y-STR基因座具有復(fù)雜的串聯(lián)重復(fù)結(jié)構(gòu)：一個(gè)基因座內(nèi)常含有兩種以上不同的重復(fù)單位，恒定重復(fù)序列和可變重復(fù)序列同時(shí)存在。與常染色體STR基因座比較，Y-STR分型的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用具

18、有以下特點(diǎn)：Y染色體為男性所特有，Y-STR呈父系遺傳特征，只能有父親傳遞給兒子，在減數(shù)分裂過(guò)程中，Y-特異性區(qū)不發(fā)生重組，評(píng)估Y-STR鑒別能力的指標(biāo)是遺傳差異度，和mtDNA一樣，Y-STR分型結(jié)果不具有唯一性，其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值在于排除，而不能認(rèn)定。X-STR基因座具有伴性遺傳的特征，X-STR的遺傳特征既不同于常染色體，也不同于Y染色體，表現(xiàn)為性連鎖特征。進(jìn)行分型檢測(cè)時(shí)，男性個(gè)體X-STR顯現(xiàn)一條片段，女性雜合子則顯示兩條等位基因片段。低拷貝DNA（low copy number，LCN）：是指基因組含量小于100pg的樣本。PCR循環(huán)測(cè)序的基本原理：PCR技術(shù)能夠快速、特異性地?cái)U(kuò)增靶D

19、NA，應(yīng)用PCR技術(shù)測(cè)定DNA序列分為兩個(gè)步驟：先利用PCR擴(kuò)增靶序列片段，制備測(cè)序模板，然后再利用PCR直接測(cè)定序列。PCR測(cè)序采用了熱循環(huán)高效合成DNA的特性并結(jié)合雙脫氧核苷酸終止法，使引物鏈終止的延伸產(chǎn)物數(shù)量在熱循環(huán)過(guò)程中得到增加，因此稱為循環(huán)測(cè)序。每個(gè)測(cè)序循環(huán)包括：PCR擴(kuò)增制備的模板DNA變性成單鏈形式；標(biāo)記引物與其中的一條鏈上的互補(bǔ)序列退火；退火后的引物在耐熱DNA聚合酶催化下發(fā)生鏈延伸終止反應(yīng)。本次循環(huán)產(chǎn)生的模板鏈與延伸終止鏈形成的雙鏈的產(chǎn)物，在下一輪測(cè)序循環(huán)中，再次被變性，釋放出模板鏈，作為又一輪引發(fā)反應(yīng)的模板，同時(shí)積累下一輪循環(huán)產(chǎn)生的鏈終止產(chǎn)物。上述循環(huán)步驟重復(fù)2040次，使

20、鏈終止產(chǎn)物以線性方式獲得擴(kuò)增。DNA自動(dòng)測(cè)序技術(shù)：DNA自動(dòng)測(cè)序技術(shù)是以4種熒光染料基團(tuán)分別作為4種ddNTP終止鏈的標(biāo)記物，于20世紀(jì)80年代末期建立的一種高效、快速、自動(dòng)化的序列測(cè)定技術(shù)。4種熒光染料分別作為測(cè)序反應(yīng)中4種ddNTP終止鏈的標(biāo)記物，即4種被雙脫氧核苷酸終止的DNA片段分別帶上4種不同的顏色。這些DNA片段的混合物同時(shí)加在一個(gè)樣品槽中電泳展開，相互間僅差1個(gè)堿基的DNA片段形成一條具有4種顏色的階梯分布圖像。階梯中的每- DNA片段由標(biāo)記在該片段上的特征性熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光所指示。熒光染料基團(tuán)作為標(biāo)記物的基本要求是經(jīng)過(guò)激光誘發(fā)的吸收光譜波長(zhǎng)在可見光波長(zhǎng)范圍內(nèi)，不影響延伸反應(yīng)，

21、不影響標(biāo)記后DNA片段的電泳性質(zhì)。其次要求4種熒光的吸收和激發(fā)光波長(zhǎng)要有足夠的差異，便于檢測(cè)。熒光染料的摻入的方式有兩種：一種是將熒光染料預(yù)先標(biāo)記在測(cè)序反應(yīng)通用引物的5端。4種熒光標(biāo)記形成4種標(biāo)記引物，測(cè)序反應(yīng)分4個(gè)反應(yīng)管進(jìn)行，特定的熒光染料與相應(yīng)的ddNTP是對(duì)應(yīng)關(guān)系，例如熒光示蹤染料JOE標(biāo)記的通用引物總是與ddATP加在同一個(gè)反應(yīng)管內(nèi)，因此由ddATP終止的所有延伸鏈都帶有JOE。這種方式被稱為Dye-Primers。另一種是將熒光染料基團(tuán)連在ddNTP上，4種熒光染料分別與4種ddNTP底物連接，反應(yīng)產(chǎn)生的4組DNA片段分別由特定ddNTP所終止，并且標(biāo)記有4種不同的熒光發(fā)色基團(tuán)，A、

22、C、G和T分別攜帶有綠、紅、藍(lán)、黃4種熒光。這種方式被稱為Dye-Terminators。兩種方式各有特點(diǎn)，不過(guò)前者要求A，G，C，T分4個(gè)反應(yīng)進(jìn)行，而后者的4組反應(yīng)可以在同一管中完成。上述兩種方法都能確定4種熒光與4種ddNTP所終止的DNA片段之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系，這是后來(lái)從電泳中檢測(cè)標(biāo)記物信號(hào)以及最終讀序的基礎(chǔ)。自動(dòng)測(cè)序儀器無(wú)論是變性PAG平板凝膠電泳還是毛細(xì)管電泳，都配置有激光束激發(fā)系統(tǒng)和熒光信號(hào)收集檢測(cè)系統(tǒng)。當(dāng)DNA片段電泳通過(guò)檢測(cè)窗口時(shí)，在激光束的激發(fā)下，片段的電泳時(shí)間和被激發(fā)熒光的波長(zhǎng)、強(qiáng)度等信號(hào)都被記錄，由計(jì)算機(jī)自動(dòng)作數(shù)據(jù)處理，最后在屏幕上顯示每一樣品的各終止片段電泳分離的模擬圖像。

23、不同顏色的峰標(biāo)示各自標(biāo)記的堿基及其排列順序(如圖所示)：MVP（minisatellite variant repeat）序列：稱為具有變異核心序列的小衛(wèi)星DNA，是一類既有長(zhǎng)度多態(tài)性又有序列差異的DNA重復(fù)序列。線粒體DNA的特點(diǎn)：人類線粒體的基因排列得非常緊湊，除與mtDNA復(fù)制及轉(zhuǎn)錄有關(guān)的一小段區(qū)域外，無(wú)內(nèi)含子序列。mtDNA為高效利用DNA有5個(gè)閱讀框架，缺少終止密碼子，僅以U或UA結(jié)尾。mtDNA的突變率高于核中DNA，并且缺乏修復(fù)能力。mtDNA為母系遺傳。部分mtDNA的密碼子不同于核內(nèi)DNA的密碼子。血型（blood group）：是人類血液由遺傳控制的個(gè)體性狀之一，是血液的遺

24、傳標(biāo)記（genetic marker）。紅細(xì)胞血型是指紅細(xì)胞表面抗原由遺傳決定的個(gè)體差異?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)抗原分布紅細(xì)胞膜上分泌液中血漿中糖脂質(zhì)HAB、PILea、Leb莫內(nèi)蛋白R(shí)h、Kell糖蛋白（寡糖+多肽）MN、HLAHAB、Lea、Leb蛋白質(zhì)Gm、KmABO血型（重點(diǎn)）：ABO血型系統(tǒng)是最早發(fā)現(xiàn)，最重要的血型系統(tǒng)。人類學(xué)與遺傳學(xué)研究、器官移植，以及法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中的個(gè)人識(shí)別與親子鑒定均需應(yīng)用這個(gè)系統(tǒng)。.一、ABO血型.4種普通血型的劃分及存在相應(yīng)的抗體.1.紅細(xì)胞ABO血型系統(tǒng)的分型。ABO血型系統(tǒng)分四種型：即O型、A型、B型與AB型。.2.四種血型個(gè)體血清中存在的相應(yīng)抗體：血清中有天然抗體，B

25、型血清中有抗A抗體；A型血清中有抗B抗體；O型血清中有抗A、抗B及抗A，B等抗體；AB型血清中沒(méi)有抗體ABO血型抗體恒定地存在于正常人的血清中，可以預(yù)測(cè)其存在，故稱為規(guī)則抗體。.3.正常的A、B、AB、O型的檢測(cè)。利用抗A與抗B血清，以及A與B型紅細(xì)胞，可以測(cè)定未知血液的ABO血型。.二、ABO血型抗體.正常情況下，凡紅細(xì)胞沒(méi)有某一種或某兩種ABO抗原，又無(wú)明顯的外來(lái)A或B抗原的刺激，其血清中含有與紅細(xì)胞上缺失抗原相對(duì)應(yīng)的天然抗A、抗A1或抗B抗體。.(一) 抗A、抗B抗體的生成.新生兒血中的IgG抗A與抗B抗體多來(lái)自母體，故一般不對(duì)新生兒進(jìn)行血型測(cè)定。36個(gè)月以內(nèi)的嬰兒，多數(shù)尚未產(chǎn)生抗A與抗

26、B抗體；6個(gè)月以后，抗體逐漸產(chǎn)生；510歲抗體效價(jià)達(dá)最高峰；隨著年齡的增長(zhǎng)，抗體效價(jià)逐漸降低，老年人抗體水平明顯地低于年輕的成年人。.(二) 抗A、抗B抗體的特性.1、抗A與抗B抗體最顯著的血清效應(yīng)是凝集反應(yīng)，在適當(dāng)?shù)臈l件下也可以發(fā)生溶血反應(yīng)；.2、ABO血型測(cè)定都在室溫中(2225)進(jìn)行，偶爾在4下進(jìn)行；.3、抗A和抗B抗體可以是天然的，也可以是免疫抗體；.4、B型與A型血液中的天然抗A與抗B抗體大多數(shù)是IgM；.5、天然IgM與IgG抗A與抗B抗體均能在鹽水介質(zhì)中使紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)，在室溫中具有抗體活性。.(三)抗H抗體.由于O、A、B或AB型紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)上含有H成分，故其血清中很少有抗H

27、抗體。.三、ABO血型的遺傳.(一) 各種不同表型的雙親所生子女的血型。.(二) ABO血型按孟德爾規(guī)律遺傳.ABO血型系統(tǒng)按孟德爾定律遺傳，人類染色體上的一個(gè)座位為.A、B、O.三個(gè)等位基因之一所占，每一個(gè)體有一對(duì)染色體，一條來(lái)自父親，另一條來(lái)自母親，紅細(xì)胞ABO型的表達(dá)由基因決定。ABO血型有4種普通型，由復(fù)等位基因.A、B及O.所控制，有6種基因型，決定4種表現(xiàn)型。四種表現(xiàn)型、六種基因型，一個(gè)基因座位，三個(gè)等位基因。.何謂ABO血型的正反定型？正定性試驗(yàn)：根據(jù)RBC與特異性抗體的反應(yīng)來(lái)分型，即用抗A抗體判定A抗原，用抗B抗體判定B抗原。反定型試驗(yàn)：依據(jù)血清中的凝集素與標(biāo)準(zhǔn)型RBC膜上的凝

28、集原反應(yīng)的性質(zhì)，即用標(biāo)準(zhǔn)的A型RBC判定抗A抗體，用標(biāo)準(zhǔn)的B型RBC判定抗B抗體，同時(shí)也應(yīng)用抗H抗體判定H抗原。試述ABO血型的DNA分型方法 PCR-SSP序列特異性引物PCR技術(shù)：特異性強(qiáng)、重復(fù)性好；PCR-RFLP。Rh血型：凡是人體血液紅細(xì)胞上有Rh凝集原者，為Rh陽(yáng)性。反之為陰性。這樣就使已發(fā)現(xiàn)的紅細(xì)胞A、B、O及AB四種主要血型的人，又都分別一分為二地被劃分為Rh陽(yáng)性和陰性兩種。在中國(guó)，Rh陰性血型只占千分之三到四。RH陰性A型、B型、O型、AB型的比例是3：3：3：1。Rh血型鑒定：RhD抗原分布：Rh血型鑒定一般指Rh系統(tǒng)中D抗原的檢測(cè)，根據(jù)病人紅細(xì)胞是否帶有D抗原分為Rh陽(yáng)性

29、和Rh陰性。Rh血型鑒定正常值：Rh+，稱作“Rh陽(yáng)性”、“Rh顯性”，表示人類紅細(xì)胞有“Rh因子”；Rh-，稱作“Rh陰性”，“Rh隱性”，表示人類紅細(xì)胞沒(méi)有“Rh因子”。HLA（human leukocyte antigen）抗原：即人類白細(xì)胞抗原，是人類最復(fù)雜的顯性遺傳多態(tài)性系統(tǒng)，也是迄今為止人類基因組中密度最高的區(qū)域。HLA系統(tǒng)具有極其重要的功能，如抗原的加工、呈遞，控制免疫應(yīng)答，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞間相互作用，對(duì)異體移植物的排斥，腫瘤監(jiān)視，參與大量的自身免疫性疾病的發(fā)生。人類白細(xì)胞膜上的抗原分為三類：是紅細(xì)胞血型抗原，如ABH、Lea、Leb、Jka、K、k、Dib等；是白細(xì)胞本身特有的抗原

30、，如CD4、CD8、Leu8等；是與其他組織共有的，也是最強(qiáng)的同種抗原，即人類白細(xì)胞抗原。HLA抗原的結(jié)構(gòu)和分布：HLA-I類和HLA-II類抗原存在于細(xì)胞表面，為跨膜蛋白質(zhì)，均為異二聚體蛋白。HLA-I類抗原分布廣泛，幾乎存在于所有的有核細(xì)胞表面，以淋巴細(xì)胞上的密度最高；含有HLA-II類抗原的組織比I類抗原少得多，密度最高者為樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞，一些吞噬細(xì)胞亞群及B細(xì)胞。結(jié)構(gòu)：HLA-I類基因產(chǎn)物為HLA-A、B和C抗原，由重鏈和輕鏈兩條多肽鏈構(gòu)成；HLA-II類基因產(chǎn)物為HLA-DR、DQ、DP抗原，均為跨膜糖蛋白，由和兩條鏈構(gòu)成。HLA遺傳：HLA基因定位于6號(hào)染色體，占整個(gè)人類基因

31、組全部堿基序列的0.12%。HLA區(qū)主要有HLA-I、II、III類基因座。表現(xiàn)為：共顯性遺傳、單倍型遺傳、連鎖不平衡。HLA遺傳特征：共顯性遺傳：每個(gè)HLA基因座表達(dá)一對(duì)抗原，人類HLA每個(gè)基因座上有眾多等位基因。故如果血清學(xué)方法分型時(shí)，個(gè)體只檢測(cè)出了一個(gè)抗原則有三種可能：該抗原的純合子、HLA血清板不完全、存在一種至今尚未發(fā)現(xiàn)的抗原。單倍型遺傳：?jiǎn)伪扼w是指一條染色體上HLA各基因座的基因緊密連鎖組成的基因遺傳單位。連鎖不平衡：HLA在實(shí)際群體調(diào)查發(fā)現(xiàn)，各基因座的基因并非完全隨機(jī)組成單倍型，有些單倍型觀察頻率高于期望頻率或低于期望頻率，這種現(xiàn)象稱為連鎖不平衡。處于連鎖部平衡狀態(tài)說(shuō)明HLA不同

32、基因座的基因之間存在關(guān)聯(lián)，具有一同遺傳的趨向。HLA高多態(tài)性。HLA抗原的分布：HLA-I類抗原：分布廣發(fā)，幾乎存在于所有的有核細(xì)胞表面，以淋巴細(xì)胞上的密度最高；成熟RBC上沒(méi)有HLA-A、B、和DR抗原，幼稚RBC卻有；HLA-II類抗原：密度最高者為DC、單核細(xì)胞，一些吞噬細(xì)胞亞群及B細(xì)胞；II類抗原作為一種分化抗原在不同細(xì)胞上表達(dá)，大多數(shù)骨髓分化細(xì)胞具有HLA-II類抗原。HLA命名原則：以大寫字母A、D、C.表示HLA遺傳區(qū)域中的座位；HLA抗原特異性用數(shù)字表示；為防止與補(bǔ)體組分命名相混淆，HLA-C抗原特異性以Cw為字首命名；HLA基因命名一般以4位數(shù)字表示，其中前2位數(shù)字表示對(duì)應(yīng)最相近的HLA抗原特異性，后2位數(shù)字則用于表示亞型的等位基因，如A*0101；如果出現(xiàn)第五位數(shù)字，則代表“沉默取代”，即該基因雖發(fā)生了個(gè)別堿基的替換，但新密碼子與原密碼子屬簡(jiǎn)并密碼，不影響所編碼的氨基酸序列；第6、7位數(shù)字代表相應(yīng)的啟動(dòng)子序列的多態(tài)性；末尾加英文字母N表示無(wú)效基因或不表達(dá)基因；在不能區(qū)分等位基因時(shí)，可允許最前面